Kim, Hyun-Han;Na, Jeong-Geol;Chang, Yong-Keun;Chun, Gie-Taek;Lee, Sang-Jong;Jeong, Yeon-Ho
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제14권5호
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pp.944-951
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2004
The influences of inoculum size, pH, and medium composition on mycelial growth and exopolysaccharides (EPS) production were investigated in shake flasks and in a bioreactor. The optimum inoculum size for both mycelial growth and EPS production was identified to be 10% (v/v) in shake flask cultures. The optimal initial pH for mycelial growth and EPS production in shake flask cultures were found to be 5.0 and 7.0, respectively. However, the optimal pH was 5.0 for both mycelial growth and EPS production in bioreactor cultures where the pH was regulated. The optimal mass ratio of the two major carbon sources, glucose to dextrin, was 1:4. The optimal mass ratio of the two major nitrogen sources, yeast extract to soy tone peptone, was 2:1. When 500 mg $1^{-1}$ of $MnSO_4-5H_2O$ was added to the bioreactor culture, both mycelial growth and EPS production were enhanced by approximately 10%. Under the optimized conditions, a mycelial biomass of 9.85 g $1^{-1}$ and an EPS concentration of 4.92 g $1^{-1}$ were obtained in 4 days.
The recycling method of enokitake cultural waste and the potentiality of second flush for enokitake were determined, because this fungus is not as prolific as the more commonly cultivated white rot fungi in the conversion of sawdust to mycelial mass. The mycelial growth of F. velutipes on several substrates, variously treated with rice bran was promoted at ratios of 10-20% (w/w) on all substrates, but suppressed at above ratios, although some difference was there. The mycelial densities generally increased correlated to the supplementation contents of rice bran. It could be concluded that F. velutipes preferred mild acidic to acidic conditions for mycelial growth, considering that the mycelial growth rate was highest on waste of pH 6.01, treated with 0.1 % Ca(OH)$_2$ and on populus mixed waste of pH 6.02, non treated. The ranges of substrate bulk densities, which was pertinent for mycelial linear growth were from B.D. (g/cc) 0.17 to 0.23 on waste and populus mixed waste all. The pertinent contents of rice bran supplementation in bottle cultivation was from 20 to 30% on waste and 20% on populus mixed waste, considering the requried duration for pinheading and fruiting yields. Standard bulk density for filling and utilizing the waste and populus mixed waste for commercial f. velutipes cultivation were B.D.(g/cc) 0.19 ~ 0.23, and 0.23~ 0.25, which could be conversed to 510~ 540g/900m1 and 520~ 570g/900m1, respectively, The second flush of F. velutipes was tried and the re-inoculation by sawdust and liquid spawn showed somewhat good results, indicating the potentiality of second crop and suggesting further research for it.
H. erinaceum의 기능성 소재화 연구의 일환으로, 지금까지 체계적으로 연구된 바 없는 H. erinaceum의 액체배양을 시도하고. 이 버섯의 서로 다른 생물반응기하의 액체배양 특성을 규명하고 대량생산을 검토하였다. 5 L 용량의 jar fermenter와 air-lift fermenter에서의 액체배양의 비교실험을 통해 air-lift fermenter의 사용이 종균 배양에 적합한 것으로 나타났으며, 형태 분석을 통해 적정 크기($2{\sim}4mm$)의 pellet 형태의 유지가 대량 생산의 중요인자인 것을 규명하였다. Air-lift fermenter 하의 배양을 종균으로 하고, 적정 크기의 pellet을 유지하는 500 L까지의 jar fermenter를 사용한 회분 배양의 scale-up 실험결과, 30 및 500 L에서의 교반 및 통기속도는 각각 200 rpm, 1 vvm 및 150 rpm, 1 vvm이었다. 이 조건하에서 배양의 전 기간 중 적정 pellet을 유지하였으며, 최대 균사체량은 약 $13{\sim}14g/L$이었다.
Mycelia of Pleurotus ostreatus, Phellinus linteus, Ganoderma lucidum and Lentinus edodes were cultured in the selected cereals to generate functionally active cereals. The optimum water contents for the mycelial growth were 50%(wt/wt) for brown rice, barley and soybean and 75% for wheat and corn, respectively. P. ostreatus grew well in the most cereals while the mycelial growth of P. linteus, G. lucidum and L. edodes in soybean were siginificantly retarded. The contents of β-glucan and glucosamine in the mycelial cereals were determined. Wheat cultured with mushroom mycelia showed high ß-glucan content. Especially, wheat with G. lucidum contained the highest value of 26.16%. Soybean cultured with G. lucidum showed two-fold increase in glucosamine content with 9.63% of total mass while wheat showed 7.91%. Overall, wheat cultured with G. lucidum was the best functional cereal in terms of β-glucan and glucosamine contents.
Two isolates of Tricholoma matsutake T-008 and T-034, preserved in Entomopathogenic Fungal Culture Collection (EFCC) of Korea, were used in the present study. The isolates had 100% Bootstrap homology with Tricholoma matsutake U62964 and T. matsutake AB188557 and AF309538 preserved in Gene Bank of NCBI. Mycelial growth of T. matsutake was highest in TMM and MYA at $25^{\circ}C$. The highest dry wt. of mycelium was obtained after 65 days of culture, when 6 mycelial discs were inoculated in 100 ml of broth in 250 ml shaking flask. Mycelial mats were observed in clumped condition at the inoculation sites of pine forest after two weeks of inoculation. After 5 months of inoculation, mycelia mats were observed growing inside soil and walls of a few inoculation sites, while mycelial mats growth up to $5{\sim}8$ cm were observed in the roots of pine tree after 6 months. The survival rate of the inoculum was about 40% of the total inoculation sites. The survival rate was found below 20% when the mycelium was inoculated in the summer. The reasons for low survival rates of the mycelium were mainly due to dry season and the soil-borne small animals such as earthworm and mole. After one year of inoculation, no external difference was observed between the artificially inoculated mycelia and the naturally existing mycelia of T. matsutake. The present study showed that fruiting bodies of T. matsutake could be produced by artificial inoculation under the appropriate environmental conditions.
무리우산버섯균의 기초적인 자료를 연구함으로써 앞으로 있을 인공재배 및 균사체 대량증식법 등의 연구에 있어서 발판이 되고자 연구한 결과는 다음과 같다. 1. 실험에 사용된 무리우산버섯균은 액체배지의 경우 Glucose pepton에서 202mg/18일로 균사생장이 가장 좋았으며, 고체배지는 YMG배지에서 81mm/8일로 가장 좋았다. 2. 균사생장 최적 온도는 $20{\sim}25^{\circ}C$이며, 최적 산도는 pH 5.5~6.0 이였으나 pH 6.0~7.0에서는 생장이 급속히 감소하였다. 3. 무리우산버섯균의 균사생장을 위한 최적영양원으로 탄소원에는 다당류인 Inulin이였으며, Dextrose를 제외하고는 균사생육에 있어서 큰 차이는 나지 않았다. 질소원으로는 무기태질소원인 $NaNO_3$였으며 다른 질소원들은 생장이 저조하였다. 4. 최적 톱밥배지 선정에 있어서 졸참나무가 가장 좋았으며 미송, 아카시나무, 상수리나무, 포플러 순으로 생장이 좋았고, Corn cob의 경우 생장이 가장 저조하였다. 5. 광학현미경과 주사형전자현미경으로 관찰한 바 목섬유의 세포벽의 일부분이 침식되고 세포 내강에서 중간층으로 점차 얇아지는 박벽화 현상이 관찰되었다. 6. 균사의 밀도는 도관과 방사유세포에 높게 나타났고, 일부 목섬유에서도 균사의 밀도가 높게 나타났다. 도관 내에 균사의 밀도가 높게 나타남에도 불구하고 목섬유와 유세포에 비해 분해가 거의 이루어지지 않았다. 7. PDA배지에 tannic acid를 첨가한 Bavendam 반응에서 배지의 재색이 암갈색으로 변하는 양성 반응을 보여 리그닌 분해 효소중의 하나인 laccase가 존재함이 확인되었다. 8. Dry weight에서 5.9%의 감소율을 보였으며, 이에 따른 pH의 변화는 6.07에서 4.31로 배지가 산성화 되었다. 또한 온수추출물에 있어서 톱밥과 미강(4:1 w/w)의 경우 12.98%의 추출량을 보여주었으며 무리우산버섯균이 배양된 배지의 경우 8.56%를 보여주었다.
The present study was carried out to investigate morphological characteristics of pseudosclerotia of Grifola umbellata formed by artificial cultures. Isolate G. umbellata DUM GUS-01 was obtained from sclerotium cultivated in field. The fungal isolate was cultured on PDYM broth, PDYMA(potato dextrose yeast malt agar) and oak sawdust media at $20^{\circ}C$ under the dark condition. G. umbellata DUM GUS-01 showed a volumetric increment of fungal lumps rather than mycelial growth. Particularly, G. umbellata DUM GUS-01 produced a large amount of melanin pigments in all culture treatments. The color of the fungal mass has been changed into grey gradually, and then formed melanized rind-like structure on its superficial part. The fungal structures which were covered with melanized rind-like layer were named as pseudosclerotia of G. umbellata. The pseudosclerotia of G. umbellata DUM GUS-01 formed a new white mycelial mass, which was swollen out of the melanized rind structure for its volumetric increment. When the pseudosclerotia were sectioned, their structure was discriminated from two structures such as a melanized rind-like structure layer formed by aggregation of aged mycelia and a white mycelial mass with high density. As results of scanning electron microscopic examination, the pseudosclerotia of G. umbellata DUM GUS-01 which were formed in in vitro conditions were similar to the sclerotia of G. umbellata cultivated in natural conditions except for the crystals formed in medula layer of natural sclerotia. Although size, solidity of rind structure and mycelial compactness of pseudosclerotia were more poor than those of natural sclerotia, the morphological structure and growth pattern of pseudosclerotia were very similar to those of natural sclerotia. Therefore, it is probable to induce pseudosclerotia to sclerotia of G. umbellata in in vitro conditions. Consequently, it seems that the induced pseudosclerotia can be used as inoculum sources to substitute natural sclerotia in field cultivation.
A total of 39 essential oils were tested for antifungal activities as volatile compounds against five phytopathogenic fungi at a dose of 1 ${\mu}l$ per plate. Five essential oils showed inhibitory activities against mycelial growth of at least one phytopathogenic fungus. Origanum vulgare essential oil inhibited mycelial growth of all of the five fungi tested. Both Cuminum cyminum and Eucalyptus citriodora oils displayed in vitro antifungal activities against four phytopathogenic fungi except for Colletotrichum gloeosporioides. The essential oil of Thymus vulgaris suppressed the mycelial growth of C. gloeosporioides, Fusarium oxysporum and Rhizoctonia solani and that of Cymbopogon citratus was active to only F. oxysporum. The chemical compositions of the five active essential oils were determined by gas chromatography-mass spectrometry. This study suggests that both E. citriodora and C. cyminum oils have a potential as antifungal preservatives for the control of storage diseases of various crops.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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