• 제목/요약/키워드: Multiplex real-time polymerase chain reaction

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분자생물학적 방법으로 확진한 접종 21개월 후에 발생한 BCG 쇄골상부 림프절염 1례 (Supraclavicular BCG Lymphadenitis Noted at 21 Months after BCG Vaccination Confirmed by a Molecular Method)

  • 이민현;채문희;박경운;조혜경
    • Pediatric Infection and Vaccine
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    • 제21권2호
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    • pp.139-143
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    • 2014
  • BCG 림프절염은 BCG 접종 후에 생기는 가장 흔한 합병증이다. BCG 림프절염은 대부분 6개월 미만의 영아에서 발생하며 접종한 부위와 같은 쪽 겨드랑이 림프절을 침범하는 경우가 많다. 본 저자들은 생후 15일에 Tokyo주 BCG 백신을 접종한 22개월 남자아이에서 왼쪽 쇄골상부 림프절 부위에 발생한 BCG 림프절염을 경험하여 이에 대해 보고한다. 우리는 림프절 흡인을 시행하여 얻은 검체에서 실시간 중합효소 연쇄반응과 region of difference (RD)에 대한 다중 중합효소연쇄반응으로 M. bovis Tokyo주에 의한 감염을 확인하였고 반복적인 흡인을 통해 치료하였다.

요양보호시설 이용중인 알츠하이머 치매환자의 구강 병원성 미생물 분석 (Analysis of oral pathogenic microorganisms in Alzheimer's dementia patients using nursing facilities)

  • 정서윤;정미애;김춘성;김수관
    • 한국치위생학회지
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    • 제22권5호
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    • pp.411-416
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    • 2022
  • Objectives: This study aimed to identify pathogenic microorganisms in the oral cavity of Alzheimer's dementia patients and recognize the necessity and importance of oral prevention management. Methods: The participants comprised 40 dementia patients aged 60 years or older and general patients who were using nursing care facilities in Gwangju from February to July 2017. Samples were collected with Eazyperio products for oral pathogenic microbial testing. Eighteen types of bacteria could be detected by analyzing Multiplex-Quantity Real Time polymerase chain reaction at a genetic testing agency. Results: The study comprised more women than men. Most participants were in their 80s. Statistically significant differences were observed in some oral pathogenic microorganisms. Conclusions: Pathogenic microorganisms could more easily proliferate in the oral cavities of Alzheimer's dementia patients than they could among general elderly participants due to a lack of awareness of oral hygiene and prevention management. To improve this, it is considered necessary to deploy oral health care professionals.

An Inexpensive System for Rapid and Accurate On-site Detection of Garlic-Infected Viruses by Agarose Gel Electrophoresis Followed by Array Assay

  • Kazuyoshi Furuta;Shusuke Kawakubo;Jun Sasaki;Chikara Masuta
    • The Plant Pathology Journal
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    • 제40권1호
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    • pp.40-47
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    • 2024
  • Garlic can be infected by a variety of viruses, but mixed infections with leek yellow stripe virus, onion yellow dwarf virus, and allexiviruses are the most damaging, so an easy, inexpensive on-site method to simultaneously detect at least these three viruses with a certain degree of accuracy is needed to produce virus-free plants. The most common laboratory method for diagnosis is multiplex reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). However, allexiviruses are highly diverse even within the same species, making it difficult to design universal PCR primers for all garlic-growing regions in the world. To solve this problem, we developed an inexpensive on-site detection system for the three garlic viruses that uses a commercial mobile PCR device and a compact electrophoresis system with a blue light. In this system, virus-specific bands generated by electrophoresis can be identified by eye in real time because the PCR products are labeled with a fluorescent dye, FITC. Because the electrophoresis step might eventually be replaced with a lateral flow assay (LFA), we also demonstrated that a uniplex LFA can be used for virus detection; however, multiplexing and a significant cost reduction are needed before it can be used for on-site detection.

인유두종바이러스 유전자형 검사법 PANA RealTyper HPV Kit와 AdvanSure HPV GenoBlot Assay의 비교 (Comparison of PANA RealTyper HPV Kit with AdvanSure HPV GenoBlot Assay for Human Papillomavirus Genotyping)

  • 김이현;정혜선;이미애
    • Annals of Clinical Microbiology
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    • 제21권4호
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    • pp.86-91
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    • 2018
  • 배경: PANA RealTyper HPV kit (PANAGENE, Korea; PANA RealTyper)는 multiplex real-time PCR과 melting curve analysis를 이용하여 human papillomavirus (HPV)의 유전자형을 검출한다. 본 연구에서는 PANA Real Typer와 AdvanSure HPV GenoBlot assay (LG Life Sciences, Korea; AdvanSure assay)를 비교하였다. 방법: 자궁경부암 검진을 받은 환자에서 채취한 검체를 60개 수집하였다. AdvanSure assay와 PANA RealTyper는 고위험군 HPV 20종을 검출할 수 있다. 저위험군 HPV의 경우 AdvanSure assay는 15종을, PANA RealTyper는 2종의 유전자형을 구별할 수 있고 18종의 유전자형을 검출할 수 있다. 결과: 총 60개 중 40개 검체에서 54개의 고위험군 유전자형이 검출되었으며 18개 검체에서 20개의 저위험군 유전자형이 검출되었다. 고위험군에서 두 방법 간 일치율은 94.4-100%였다. PANA Real Typer에서만 양성으로 검출된 9개 유전자형 중 7개(HPV 16 (n=1), 39 (n=1), 52 (n=1), 58 (n=2), 68 (n=2))은 진양성으로 판별되었다. AdvanSure assay에서만 양성으로 나온 4개 유전자형 중 3개는 HPV 59였다. 저위험군에서 AdvanSure assay에서 검출된 19개 유전자형 중 HPV 6 2개, HPV 11 1개였다. HPV 6 중 한 개는 PANA RealTyper에서만 양성이었다. 결론: PANA RealTyper는 AdvanSure assay와 동등한 검출력을 보였으며, 임상 검사실에서 HPV 유전자형 검사에 유용하게 쓰일 수 있을 것으로 생각한다.

계절 인플루엔자 진단에서 신속항원검사의 유용성 (The Efficacy of Rapid Antigen Tests for Detection of Seasonal Influenza Virus)

  • 이준열;이솔;김한성;김광남
    • Pediatric Infection and Vaccine
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    • 제24권1호
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    • pp.31-36
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    • 2017
  • 목적: 본 연구에서는 인플루엔자 신속항원검사의 유용성을 확인해보고, 결과의 정확도에 영향을 주는 인자를 알아보고자 한다. 방법: 2011년 6월 1일부터 2016년 5월 31일까지 5년간 한림대학교 성심병원의 소아청소년과 외래와 응급실을 통해 내원한 인플루엔자 의사환자를 대상으로 하였다. 이들 중 입원하여 PCR검사를 같이 진행한 798검체의 검사 결과를 비교하였다. 결과: PCR검사를 표준으로 신속항원검사의 양성 일치율은 A형 인플루엔자에서 75.7%, B형 인플루엔자에서 60.0%였다. 발열 시작일로부터 4일 이내에 내원하여 검사를 진행한 경우 양성 일치율은 A형 인플루엔자 77.6%, B형 인플루엔자 73.2%였으나, 5일 이상 경과 후 검사를 진행한 경우 양성 일치율은 A형 인플루엔자 66.7%, B형 인플루엔자 21.4%였다. 결론: 신속항원검사의 민감도는 상대적으로 낮으므로, 인플루엔자 진단에 적용하기 위해서 증상 발현 후 5일 이내 빠르게 채취한 검체에서 상대적으로 높은 민감도 해석이 가능하다.

바이러스에 의한 최근(2010-2019) 국내 식중독 사고와 검출법 및 제어법에 대한 동향 조사 (Recent (2010-2019) foodborne outbreaks caused by viruses in the Republic of Korea along with their detection and inactivation methods)

  • 권승욱;김상순
    • 한국식품과학회지
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    • 제53권1호
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    • pp.1-11
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    • 2021
  • 본 논문에서는 최근 10년간(2010-2019년) 바이러스에 의한 식중독 통계 및 바이러스 검출법과 제어법에 대한 자료를 정리하여 나타냈다. 국내에서 지난 10년 동안 바이러스에 의해 발생한 식중독 사고 488건 중 94.9%가 노로바이러스에 의한 것으로 확인되어 노로바이러스가 국내에서 가장 주요한 식중독 바이러스로 생각된다. 노로바이러스를 검출하는 방법으로는 PCR을 이용한 방법이 주로 보고되고 있으며 현재(2020년 12월) 식품 공전에 등록된 방법(고시 제 2010-45호)에 따라 전기 영동을 기반으로 한 one-step RT PCR 및 semi-nested PCR 방법이 널리 이용되고 있다. 또한 최근 DNA sequencing 기술이 발달됨에 따라서 검출된 바이러스의 서열을 분석하여 이미 보고된 바이러스의 서열과 비교한 논문들이 많이 보고되었다. 이 외에도 real-time PCR을 적용한 논문들도 보고되고 있으며 앞으로는 전기 영동을 실시하는 conventional PCR을 대신하여 신속하게 정량 검출이 가능한 realtime PCR의 활용이 늘어날 것으로 생각한다. 기타 바이러스의 검출에 있어서도 역시 PCR을 활용한 방법이 주로 보고되고 있으며 multiplex PCR을 활용하여 여러 종류의 바이러스를 동시에 검출하고자 하는 노력이 이루어지고 있다. 더 나아가서, 자기 면역력 분리와 퀀텀닷 분석 방법 등을 이용한 신속 검출법이 제시되고 있어 앞으로 여러 식품에 오염된 바이러스를 현장에서 신속분리 및 검출하는데 이용할 수 있을 것으로 전망된다. 한편, 노로바이러스는 실험실에서 배양하기가 어렵기 때문에 노로바이러스 제어 연구는 대체재를 이용한 방법들이 주를 이루었다. 옴 가열을 포함한 여러 종류의 열처리와 초고압, 오존, 감마선, 광펄스 등의 비가열 처리를 이용하여 노로바이러스의 저감 정도를 살펴본 연구들이 최근 보고되었다. 일반적으로 물이나 완충용액보다는 식품 샘플에서 바이러스의 저감 정도가 낮게 관찰되었는데 식품 matrix가 이러한 물리적 처리에 간섭 효과를 나타내기 때문으로 생각되며 이를 극복하기 위해서는 여러 물리적, 화학적 처리를 조합하여 처리할 필요가 있다. 기타 바이러스 제어 연구에 있어서는 열, 광펄스, 고압력 등의 물리적 처리와 더불어 살균제(sanitizer)를 적용한 논문들이 보고되고 있으며 식중독 바이러스의 저감 메커니즘에 대한 체계적인 연구가 수행되고 있는 것을 확인하였다. 여러 물리적, 화학적 처리에 대해서 식중독 바이러스가 저항성을 갖는 이유와 사멸되는 메커니즘을 정확하게 이해한다면 추후 여러 식품에서의 바이러스에 대한 안전성을 확보하는데 도움이 될 것으로 사료된다.

VITEK 2 시스템과 Multiplex Real-time PCR을 이용한 반코마이신 내성 장알균(VRE)과 내성관련 유전자 검출 (Detection of Vancomycin-Resistant Enterococci and Related Genes Using VITEK 2 System and Multiplex Real-time PCR Assay)

  • 정민경;유영빈;김상하;김성현;김영권
    • 대한임상검사과학회지
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    • 제49권4호
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    • pp.401-406
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    • 2017
  • 이 연구에서 VITEK 2 시스템을 사용하여 $6{\mu}g/mL$ vancomycin이 첨가된 Enterococcosel (EV6 agar에서 배양한 327개의 검체 중 74개의 분리균(22.6%)으로 확인하였다. E. faecium은 55주(74.3%), E. gallinarum 16주(21.6%), E. casseliflavus 2주(2.7%) 및 E. avium 1주(1.4%)로 확인되었다. E. faecium의 55가지 표현형 중 vanA가 42주(76.4%), vanB가 9주(16.4%), vanC 표현형이 4주(7.3%)로 나타났다. E. gallinarum 16주와 E. casseliflavus 2주 모두 vanC 표현형을 보였으며 E. avium 1주는 vanB 표현형을 나타내었다. EV4에서만 증식된 E. faecium 1주는 VITEK2 시스템을 이용한 항균제 감수성 검사 결과 vancomycin과 teicoplanin에 모두 감수성이었고 vancomycin 내성 표현형 유전자는 PCR에 의해 검출되지 않았다. 총 327 검체를 $6{\mu}g/mL$ vancomycin (EV6 broth)을 첨가 한 Enterococoscosel broth에서 배양하여 120 균주(36.7%)가 분리되었다. 120균주에서 다중 중합 효소 연쇄반응에 의한 반코마이신 내성 유전형 실험을 실시한 결과, vanA가 51주(42.5%), vanA와 vanC가 5주(4.2%), vanC가 18주(15%), 나머지 46주(38.3%)에서는 vancomycin 내성 유전형 유전자는 검출되지 않았다.

Mitochondrial DNA Levels in Blood and Tissue Samples from Breast Cancer Patients of Different Stages

  • Xia, Peng;Wang, Hui-Juan;Geng, Ting-Ting;Xun, Xiao-Jie;Zhou, Wen-Jing;Jin, Tian-Bo;Chen, Chao
    • Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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    • 제15권3호
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    • pp.1339-1344
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    • 2014
  • Aims: Alterations in mitochondrial DNA (mtDNA) have been implicated in carcinogenesis and tumor progression. We here evaluated the diagnostic and prognostic potential of mtDNA as a biomarker for breast cancer. Methods: Using multiplex real-time polymerase chain reaction, nuclear DNA (nDNA) and mtDNA levels in serum, buffy coat, tumor, and tumor-adjacent tissue samples from 50 breast cancer patients were determined and assessed for associations with clinicopathological features. To evaluate mtDNA as a biomarker for distinguishing between the four sample types, we created receiver operating characteristic (ROC) curves. Results: The mtDNA levels in buffy coat were significantly lower than in other sample types. Relative to tumor-adjacent tissue, reduced levels of mtDNA were identified in buffy coat and tumor tissue but not in serum. According to ROC curve analysis, mtDNA levels could be used to distinguish between buffy coat and tumor-adjacent tissue samples with good sensitivity (77%) and specificity (83%). Moreover, mtDNA levels in serum and tumor tissue were positively associated with cancer TMN stage. Conclusions: The mtDNA levels in blood samples may represent a promising, non-invasive biomarker in breast cancer patients. Additional, large-scale validation studies are required to establish the potential use of mtDNA levels in the early diagnosis and monitoring of breast cancer.

Pyramiding transgenes for potato tuber moth resistance in potato

  • Meiyalaghan, Sathiyamoorthy;Pringle, Julie M.;Barrell, Philippa J.;Jacobs, Jeanne M.E.;Conner, Anthony J.
    • Plant Biotechnology Reports
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    • 제4권4호
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    • pp.293-301
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    • 2010
  • The feasibility of two strategies for transgene pyramiding using Agrobacterium-mediated transformation was investigated to develop a transgenic potato (Solanum tuberosum L. cv. Iwa) with resistance to potato tuber moth (PTM) (Phthorimaea operculella (Zeller)). In the first approach, cry1Ac9 and cry9Aa2 genes were introduced simultaneously using a kanamycin (nptII) selectable marker gene. The second approach involved the sequential introduction (re-transformation) of a cry1Ac9 gene, using a hygromycin resistance (hpt) selectable marker gene, into an existing line transgenic for a cry9Aa2 gene and a kanamycin resistance (nptII) selectable marker gene. Multiplex polymerase chain reaction (PCR) confirmed the presence of the specific selectable marker gene and both cry genes in all regenerated lines. The relative steady-state level of the cry gene transcripts in leaves was quantified in all regenerated lines by real-time PCR analysis. Re-transformation proved to be a flexible approach to effectively pyramid genes for PTM resistance in potato, since it allowed the second gene to be added to a line that was previously identified as having a high level of resistance. Larval growth of PTM was significantly inhibited on excised greenhouse-grown leaves in all transgenic lines, although no lines expressing both cry genes exhibited any greater resistance to PTM larvae over that previously observed for the individual genes. It is anticipated that these lines will permit more durable resistance by delaying the opportunities for PTM adaptation to the individual cry genes.

생후 6개월 미만의 영아에서 백일해에 대한 적극적인 감시활동: 2011-2013년 단일기관 연구 (Active Surveillance of Pertussis in Infants Under 6 Months of Age: A Single Center Experience from 2011 to 2013)

  • 한영익;최지연;이혜원;이택진
    • Pediatric Infection and Vaccine
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    • 제21권2호
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    • pp.114-120
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    • 2014
  • 목적: 본 연구에서는 6개월 미만의 영아를 대상으로 백일해의 기초적인 역학조사를 확인하고자 단일 기관에서 실시하였다. 방법: 2011년 10월부터 2013년 4월까지 분당 차병원에 내원한 진찰 당시 호흡기계 증상을 보여서 입원한 생후 6개월 미만의 영아들을 대상으로 비인두 흡입물로 B. pertussis PCR 또는 배양검사를 시행하였다. 또한 respiratory syncytial virus, adenovirus, metapneumo-virus, rhinovirus, parainfluenza virus, influenza A, B virus 포함한 호흡기 바이러스들에 대한 multiplex RT-PCR 검사를 시행 후 분석하였다. 결과: 대상 환아 수는 총 79례였으며 환아 연령 중앙값은 2개월이었고 대부분 진단은 급성 세기관지염(60%)이거나 폐렴(28%)이었다. B. pertussis 이 확인된 경우는 13례(16%)였으며 환아 연령 중앙값은 2개월이었다. B. pertussis 이 확인된 13례 중 7례(53%)에서 respiratory syncytial virus가, 1례(7%)에서 influenza A virus가 확인되었다. B. pertussis 이 확인된 13증례 중 DTaP 접종력 없는 증례는 6례(46%)이었고 DTaP 백신 1회 접종한 증례는 6례(46%)이었고 DTaP 백신 2회 접종한 증례는 1례(8%)이었다. 결론: 호흡기계 증상들을 보이는 입원한 생후 6개월 미만의 영아의 원인 병원체 중 B. pertussis 이 16%를 차지하였다. 6개월 미만의 영아들에 대한 향후 전국적인 다 기관이 포함된 역학적 감시 활동이 필요할 것으로 사료된다.