• 한국식품영양과학회지
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• 제30권5호
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• pp.848-853
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• 2001

이 연구는 난백단백질의 알러지성을 없애기 위해 감마선 조사된 OVA에 대한 가열처리가 항원성(알러지성) 및 구조 변화에 미치는 영향을 조사하기위해 수행되었다. OVA 용액 (2.0 mg/mL)을 1) 가열처리구; 2) 가열 후 조사구; 3) 조사 후 가열처리구로 준비하였다. 시료를 개별적으로 가열처리하였고, 감마선 조사는 10 kGy의 흡수선량을 얻도록 조사하였다. 계란알러지가 있는 환자의 혈청과 OVA에 대해 생산된 단클론항체(M-IgG)와 다클론항체(R-IgG)를 사용하여 확립된 경합간접효소면역분석법을 사용하여 시료용액에 있는 OVA의 항원-항체 반응성을 측정하였다. 열변성된 OVA에 대한 항체반응성은 R-IgG가 6$0^{\circ}C$, M-IgG가 7$0^{\circ}C$부터, 그리고 P-IgE의 경우 8$0^{\circ}C$부터 변화하기 시작하였다. P-IgE는 8$0^{\circ}C$이상의 온도에서 가열된 OVA를 잘 인식하지 못하였다. 반면에, M-IgG와 R-IgGdmlruddn 가열처리된 OVA에 대한 P-IgE의 항원-항체 반응성에 미치는 영향은 처리 순서와는 관계없이 모든 가열온도에서 가열처리에 의한 큰 변화를 나타내지 않았다. 가열처리와 감마선 조사에서 시료용액의 혼탁도가 모두 증가하였고, 가열처리보다는 감마선 조사에 의한 혼탁도의 증가가 매우 높았다. 이 결과들은 가열처리가 감마선 조사되어 감소되어 있는 OVA의 알러지성에 큰 영향을 미치지 않는 것을 나타내었다.

• Journal of Yeungnam Medical Science
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• 제12권1호
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• pp.1-9
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• 1995

최근 3년간 영남대학교 의과대학 병리학교실에 의뢰되어 진단되었던 위선종 25례와 위선암종 64례를 대상으로 항 PCNA항체를 이용한 면역 조직화학적 염색을 시행하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1) PCNA 양성율은 대조군 $29.14{\pm}12.77%$, 위선종 $44.09{\pm}17.11%$, 위선암종 $80.15{\pm}10.69%$로서 대조군, 위선종, 위선암종 순으로 유의한 증가를 보였다. 2) 위선암종에 있어서 PCNA 양성율을 조직학적 분화도와 비교한 결과, 중분화형 및 저분화형은 고분화형에 비해 반응도가 증가하는 경향이 있지만 3등급 간에 통계적 유의성은 없었다. 3) 위선암종의 PCNA 양성율을 침습 정도와 비교한 결과, 그 정도가 심할수록 증가하는 경향을 보였으나 통계적 유의성은 없었고, 조기위암군과 진행성 위암군으로 대별할 경우 진행성 위암종에서 의의있는 증가를 보였다. 4) 위선암종의 PCNA 양성율을 림프절 전이상태와 비교한 결과, 림프절 전이가 있는 선암종에서 림프절 전이가 없는 선암종에 비해 의의있는 증가를 보였다. 이상의 결과를 종합하면 PCNA 양성반응은 위선종과 위선암종의 감별진단에 크게 도움을 주리라 사료되며, PCNA는 위선암종의 침윤과 전이에 밀접한 관계가 있을 것으로 생각되어 예후 측정에 보조적인 가치가 있을 것으로 추정되었다. 그러 나 PCNA 반응도만으로는 독립적인 예후 척도로 인정하기 어려울 것으로 생각되며 다른 예후 인자와 함께 고려하는 것이 유용할 것으로 생각되었다.

• Molecules and Cells
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• 제44권10호
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• pp.770-779
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• 2021

Transgenic Arabidopsis thaliana expressing an anti-rabies monoclonal antibody (mAb), SO57, was obtained using Agrobacterium-mediated floral dip transformation. The endoplasmic reticulum (ER) retention signal Lys-Asp-Glu-Leu (KDEL) was tagged to the C-terminus of the anti-rabies mAb heavy chain to localize the mAb to the ER and enhance its accumulation. When the inaccurately folded proteins accumulated in the ER exceed its storage capacity, it results in stress that can affect plant development and growth. We generated T₁ transformants and obtained homozygous T₃ seeds from transgenic Arabidopsis to investigate the effect of KDEL on plant growth. The germination rate did not significantly differ between plants expressing mAb SO57 without KDEL (SO plant) and mAb SO57 with KDEL (SOK plant). The primary roots of SOK agar media grown plants were slightly shorter than those of SO plants. Transcriptomic analysis showed that expression of all 11 ER stress-related genes were not significantly changed in SOK plants relative to SO plants. SOK plants showed approximately three-fold higher mAb expression levels than those of SO plants. Consequently, the purified mAb amount per unit of SOK plant biomass was approximately three times higher than that of SO plants. A neutralization assay revealed that both plants exhibited efficient rapid fluorescent focus inhibition test values against the rabies virus relative to commercially available human rabies immunoglobulins. KDEL did not upregulate ER stress-related genes; therefore, the enhanced production of the mAb did not affect plant growth. Thus, KDEL fusion is recommended for enhancing mAb production in plant systems.

• Nutrition Research and Practice
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• 제15권6호
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• pp.673-685
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• 2021

BACKGROUND/OBJECTIVES: Obesity is associated with the impaired regulation of T cells characterized by increased numbers of Th1 and Th17 cells and the dysregulation of vitamin D metabolism. Both obesity and vitamin D have been reported to affect autophagy; however, a limited number of studies have investigated the effects of vitamin D on T cell autophagy in obese mice. Therefore, we aimed to determine whether in vitro treatment with vitamin D affects the proliferation, function, and autophagy of T cells from obese and control mice. MATERIALS/METHODS: Five-week-old male C57BL/6 mice were fed control or high-fat diets (10% or 45% kcal fat: CON or HFDs, respectively) for 12 weeks. Purified T cells were stimulated with anti-CD3 and anti-CD28 monoclonal antibodies and cultured with either 10 nM 1,25(OH)₂D₃ or 0.1% ethanol (vehicle control). The proliferative response; expression of CD25, Foxp3, RORγt, and autophagy-related proteins (LC3A/B, SQSTM1/P62, BECLIN-1, ATG12); and the production of interferon (IFN)-γ, interleukin (IL)-4, IL-17A, and IL-10 by T cells were measured. RESULTS: Compared with the CON group, T cell proliferation tended to be lower, and the production of IFN-γ was higher in the HFD group. IL-17A production was reduced by 1,25(OH)2D₃ treatment in both groups. The LC3 II/I ratio was higher in the HFD group than the CON group, but P62 did not differ. We observed no effect of vitamin D treatment on T cell autophagy. CONCLUSIONS: Our findings suggest that diet-induced obesity may impair the function and inhibit autophagy of T cells, possibly leading to the dysregulation of T cell homeostasis, which may be behind the aggravation of inflammation commonly observed in obesity.

• 대한방사성의약품학회지
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• 제7권2호
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• pp.105-111
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• 2021

⁸⁹Zr is a positron-emitting radioisotope, which has known as well-suited radioisotope for use in a monoclonal antibody-based imaging agent for immuno-PET. The purpose of this study was to quantitatively evaluate the diagnostic ability of general trastuzumab and thio-trastuzumab as HER2 positive receptors based on Df hexadentate iron chelator. Desferrioxamine-p-SCN (Df-Bz-NCS) and desferroixamine-maleimide (Df-Mal) were purchased from Macrocyclics (Dallas, TX, USA). The trastuzumab was purchased from Roche (Schweiz), and thio-trastuzumab was obtained from professor Hyo-Jeong Hong group (Kangwon National University). The radioisotope ⁸⁹Zr was produced by domestic purification system and KIRAMS using medical cyclotron (50 MeV, Scantronix). The conjugates of Df-trastuzumab and Df-thio-trastuzumab were prepared with Df-Bz-NCS and Df-Mal under basic aqueous solution (pH 8-9) at room temperature, respectively. The conjugates purified by PD-10 column were mixed with dried ⁸⁹Zr chloride. ⁸⁹Zr-labeled conjugates were purified and concentrated by Amicon ultra centrifugal filter. The preparation step and time of ⁸⁹Zr-labeled conjugates was shorted as 4 steps within 2 hours. ⁸⁹Zr-labeled conjugates showed the highly radiochemical purity of over 98%, and were very stable until 7 days by the analysis of radio-ITLC method. Each radio-labeled conjugates were also exhibited the highly stability in both PBS buffer and mouse serum. Immuno-PET imaging of ⁸⁹Zr-labeled conjugates in mice bearing gastric cancer xenograft tumors with HER2 expression showed high tumor uptake in the NCI-N87 HER2-expressing. However, ⁸⁹Zr-Df-Mal-thio-trastuzumab showed a relatively lower tumor-to-background ratio than ⁸⁹Zr-Df-Bz-trastuzumab, as well as whole-body distribution. In the results, ⁸⁹Zr-Df-Bz-trastuzumab was evaluated to have a relatively higher HER2 diagnostic ability than ⁸⁹Zr-Df-Mal-thio-trastuzumab.

• 한국가축번식학회지
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• 제9권2호
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• pp.133-139
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• 1985

An immunoassay may be defined as an analytical procedure involving the competitive reaction between a limiting concentration of specific antibody and two populations of antigen, one of which is labelled or immobillized. The advent of immunoassay has revolutionised our knowledge of reproductive physiology and the practice of veterinary and clinical medicine. Radioimmunoassay (RIA) was the first of these methods to be developed, which meausred the analyte with good sensitivity, accuracy and precision (1,2). The essential components of RIA are:-(i) a limited concentration of antibodies, (ii) a reference preparation, and (iii) an antigen labelled with a radioisotope (usually tritium or iodine-125). Most procedures invelove isolating the antibody-bound fraction and measuring the amount of labelled antigen. Good facilities are available for scintilltion counting, data reduction nd statistical analysis. RIA is undergoing refinement through:-(i) the introduction of new techniques to separate the antibody-bound and free fractions which minimize the misclassification of labelled antigen into these compartments, and the amount of non-specfic binding. (3), (ii) the development of non-extration for the measurement of haptens (4), (iii) the determination of a, pp.rent free (i.e. non-protein bound) analytes (5), and (iv) the use of monoclonal antibodies(6). In 1968, Miles and Hales introduced in important new type of immunoassay which they termed immunora-diometric assay (IRMA) based on t도 use of isotopically labelled specific antibodies(7) in a move from limited to excess reagent systems. The concept of two-site IRMAs (with a capture antibody on a solid-phase, and a second labelled antibody to a different antigenic determinant of the analyte) has enabled the development of more sensitive and less-time consuming methods for the measurement of protein hormones ovar wide concentration of analyte (8). The increasing use of isotopic methos for diverse a, pp.ications has exposed several problems. For example, the radioactive half-life and radiolysis of the labelled reagent limits assay sensitivity and imposes a time limit on the usefulness of a kit. In addition, the potential health hazards associated with the use and disposal of radioactive cmpounds and the solvents and photofluors necessary for liquid scientillation counting are incompatable with the development of extra-laboratory tests. To date, the most practical alternative labels to radioisotopes, for the measurement of analytes in a concentration > 1 ng/ml, are erythrocytes, polystyrene particiles, gold sols, dyes and enzymes or cofactors with a visual or colorimetric end-point(9). Increased sensitivity to<1 pg/ml may be obtained with fluorescent and chemiluminescent labels, or enzymes with a fluorometric, chemiluminometric or bioluminometric end-point. The sensitivity of any immunoassay or immunometric assay depends on the affinity of the antibody-antigen reaction, the specific activity of the label, the precision with which the reagents are manipulated and the nonspecific background signal (10). The sensitivity of a limited reagent system for the measurement of haptens or proteins is mainly dependent upon the affinity of the antibodies and the smalleest amount of reagent that may be manipulated. Consequently, it is difficult in practice to improve on the sensitivity obtained with iodine-125 as the label. Conversely, with excess reagent systems for the measurement of proteins it is theoretically possible to increase assay sensitivity at least 1000 fold with alternative luminescent labels. To date, a 10-fold improvement has been achieved, and attempts are being made to reduce the influence of other variables on the specific signal from the immunoreaction.

• Journal of Veterinary Science
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• 제25권1호
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• pp.15.1-15.15
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• 2024

Background: The anti-programmed death 1 (PD-1) antibody has led to durable clinical responses in a wide variety of human tumors. We have previously developed the caninized anti-canine PD-1 antibody (ca-4F12-E6) and evaluated its therapeutic properties in dogs with advance-staged oral malignant melanoma (OMM), however, their therapeutic effects on other types of canine tumors remain unclear. Objective: The present clinical study was carried out to evaluate the safety profile and clinical efficacy of ca-4F12-E6 in dogs with advanced solid tumors except for OMM. Methods: Thirty-eight dogs with non-OMM solid tumors were enrolled prospectively and treated with ca-4F12-E6 at 3 mg/kg every 2 weeks of each 10-week treatment cycle. Adverse events (AEs) and treatment efficacy were graded based on the criteria established by the Veterinary Cooperative Oncology Group. Results: One dog was withdrawn, and thirty-seven dogs were evaluated for the safety and efficacy of ca-4F12-E6. Treatment-related AEs of any grade occurred in 13 out of 37 cases (35.1%). Two dogs with sterile nodular panniculitis and one with myasthenia gravis and hypothyroidism were suspected of immune-related AEs. In 30 out of 37 dogs that had target tumor lesions, the overall response and clinical benefit rates were 6.9% and 27.6%, respectively. The median progression-free survival and overall survival time were 70 days and 215 days, respectively. Conclusions: The present study demonstrated that ca-4F12-E6 was well-tolerated in non-OMM dogs, with a small number of cases showing objective responses. This provides evidence supporting large-scale clinical trials of anti-PD-1 antibody therapy in dogs.

• Clinical and Experimental Pediatrics
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• 제46권2호
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• pp.128-136
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• 2003

목 적 : Hyper IgM syndrome(HIGM)은 크게 세 부류로 나누는데, CD40L 분자의 돌연변이로 초래되며 X-linked로 유전되는 형태를 HIGM1이라고 하고, 상염색체성 열성 형태로 유전되면서 CD40L는 정상적으로 표현되는 형태로 activation-induced cytidine deaminase(AID) 유전자에 이상 때문에 오는 경우를 HIGM2로 분류하고 있다. 다른 한 부류는 X-linked HIGM 증후군의 매우 드문 한 형태로서 발한 저하성 외배엽 이형성증이 동반된 경우로, 이 질환은 전사인자인 nuclear factor ${\kappa}B$의 활성화에 관여하는 nuclear factor ${\kappa}B$ essential modulator를 coding하는 유전자의 돌연변이 때문에 오는 것으로 알려져 있다. 연구자들은 HIGM2와 유사하지만 AID 유전자에 변이는 없는 새로운 형태의 HIGM 환자의 말초 B세포를 이용하여 병인을 조사하고자 본 연구를 시도하였다. 방 법 : 환자의 말초혈액 단핵구를 분리하고, EBV로 immortalization을 시켜 Cycle TEST PLUS DNA Reagent kit를 이용하여 cell cycle을 분석하였다. 환자의 말초혈액 T 세포에서 CD40L의 표현을 immunostaining으로 알아보고, RNA를 추출하여 RT-PCR을 하고 direct sequencing을 통하여 CD40L 유전자의 돌연변이 부위를 찾아보았다. 아울러 AID 유전자의 돌연변이를 찾기 위하여 같은 방법으로 sequencing하고 조사하였다. 환자의 림프절을 병리학적인 검사를 시행하고 CD3, CD23, CD40, Fas-L, bcl-2, BAX의 표현을 알아보기 위하여 immunostaining을 실시하였다. 결 과: 림프절의 광학적 소견은 반응성 여포증식의 소견을 보였으며, 여포와 단구양 증식은 B-세포 표시인자인 L26에 양성을 보였고, 대부분의 형질세포는 IgM에 양성을 보였다. 여포는 CD40, Fas, BAX에 양성반응을 보이고, bcl-2와 Fas-L에 음성반응을 보였다. 말초혈액 B 림프구를 이용하여 cell cycle을 분석한 결과 정상(17.9%)에 비하여 G2/mitosis phase(M3 in figure)가 현저하게 감소(8.5%)되어 있는 양상을 보여주고 있으며, IL-4로 자극한 경우에는 정상인에서 보여주는 양상으로 회복되는 양상을 볼 수 있었다. 단핵수에서 CD40L의 표현은 정상이었고 CD40L 유전자에도 돌연변이는 발견할 수 없었으며, HuAID 유전자에도 돌연변이를 발견할 수 없었다. 결 론 : 환자의 말초혈액 B림프구를 통한 연구 결과, 기존에 보고 되어진 HIGM2 형태와 임상적으로는 비슷하지만, 정상적인 AID유전자를 보이고, G2/mitosis phase가 정상에 비하여 감소된, 새로운 형태의 HIGM이라고 여겨진다.

• Journal of Preventive Medicine and Public Health
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• 제32권1호
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• pp.88-94
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• 1999

이 연구는 DMF에 의한 간독성 기전을 알아보기 위하여, 대사과정에서 중요한 역할을 하는 이물질 대사효소와 그와 관련된 효소가 어떠한 변화를 보이는가를 알아보았다. 이 연구에 사용된 동물은 Sprague Dawley계 수컷 흰쥐로 DMF를 체중 kg당 0(Control), 450 (D1), 900 (D2), 1,800 (D3) mg을 1일 l회씩 3일간 연속하여 복강주사하였다. 마지막 투여 후 24시간 후에 실험동물로부터 간장의 microsome을 분리하였고, P450 동위효소의 유도와 P450의존성 촉매 효소의 활성도 변화를 관찰하였다. 연구결과, DMF를 투여한 실험군이 대조군보다 microsomal 단백질 함량이 통계학적으로 유의하지는 않았지만 낮은 수치를 보였다. P450과 b5 함량 역시 대조군과 투여군간에 유의한 차이가 없었다. 대사과정에서 어떠한 전자전달계가 주로 관여하는지를 알아보았는데, NADPH-P450 reductase의 경우 대조군보다 투여군이 투여용량이 증가함에 따라 활성도가 유의하게 증가하였다(p<0.01). NADH-b5 reductase의 활성도 의 경우는 대조군보다 투여군이 감소하여(p<0.01), 전자전달이 주로 NADPHP-450 reductase에 의해 이루어지는 것을 알 수 있었다. 활성도 측정에서는 EROD 와 PROD 활성도는 유의한 차이를 보이지 않았으나 pNPH 활성도는 처리군에서 현저한 증가가 관찰되었다(p<0.01). 또한 P4501A1/2, P4502B1/2 및 P4502E1에 대한 단세포군 항제를 이용한 Western immunoblot 분석에서 P4502E1 단백질 의 양이 현저하게 증가하였다. 이 상의 결과를 보면, DMF에 의해서 P4502E1 형태의 동위효소가 유도되며, 유도된 P4502E1 동위효소가 DMF의 대사에 관여하는 것으로 보인다.

• Nuclear Medicine and Molecular Imaging
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• 제40권1호
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• pp.9-15
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• 2006

목적 : 기존의 연구는 갑상선 악성 종양에서 NIS 단백질 발현에 대해 충분한 증례에서 일관성 있는 결과를 보이지 못하고 있다. 이에 본 연구에서는 원발성 갑상선 악성 종양의 조직에서 NIS 발현율의 분포를 알아보고, 이를 양성 갑상선 질환에서의 NIS 발현율의 분포와 비교하였다. 대상 및 방법 : 악성 갑상선 종양이나 양성 갑상선 질환으로 수술을 시행한 환자들을 대상으로 후향적 분석을 하였다. 환자들은 총 119명(남자 15명)이며. 나이는 $48{\pm}3$세(범위 20-75세) 였다. 이들에게서 얻은 조직 표본은 총 205개 였다. 이 표본들은 악성 질환(총 153개)으로 유두상 종양이 90개, 여포상 종양이 4개, 수질상 종양이 2개, 전이성 임파절이 57개 였으며, 양성 질환(총 52개)으로 갑상선 종대가 36개, 갑상선염이 11개, 여포선종이 5개였다. 단클론 항체인 mouse anti-NIS Ab를 사용하였다. 염색된 조직을 현미경으로 관찰하여 양성 등급은 염색 강도에 따라 약하게 염색되면 등급 1, 중등도로 염색되면 등급 2, 강하게 염색되면 등급 3으로 나누었으며, 음성인 경우는 등급 0으로 표시하였다. 개개의 질환에 있어서 NIS의 발현율은 전체의 개수에 대하여 등급 2와 3이 차지하는 비율을 백분율로 표시하였다. 결과: 갑상선 악성 질환에서 NIS의 발현율은 유두상 종양의 원발성 종양에서 63%, 전이성 임파선에서 81%를 보였다. 여포상 종양과 수질상 종양의 NIS의 발현율은 각각 71, 100% 였다. 갑상선 양성 질환에서 NIS의 발현율은 갑상선 종대에서 53%, 갑상선염에서 64%, 여포선종에서 40%였다. NIS의 발현율은 악성 종양에서 양성 질환보다 더 높았다(71% vs 54%) 증례수가 많은 유두상 종양과 갑상선 종대의 경우에 한쪽 등급에만 치우침이 없이 모든 등급에 걸쳐 분포를 보이는 특징을 보였다. 갑상선 질환을 보이는 병변 조직의 주위에 있는 정상 조직의 염색 정도는 다양한 등급을 보여서 일관성을 보이지는 않았으며, 병변조직의 염색 정도와도 연관성을 보이지 않았다. 결론: 갑상선 유두상 종양에서 면역조직화학검사에 기초한 NIS의 발현율은 불균질성 분포를 나타내며 증가하는 양상을 보였고, 악성 질환과 양성 질환 사이에 NIS의 발현율이 큰 차이를 보이지 않았다.