The deletion of sti from the Streptomyces plasmid pIJ101 made its derivative pHZ1358 an efficient vector for gene disruption and replacement. Here, pHZ1358 was further optimized by the construction of a derivative plasmid pJTU1278, in which a cassette carrying multiple cloning sites and a lacZ selection marker were introduced for convenient plasmid construction in E. coli. In addition, the oriT region of pJTU1278 was also deleted, generating a vector (pJTU1289) that can be used specifically for PCR-targeting. The efficient usage of these vectors was demonstrated by the deletion of the gene involved in avermectin biosynthesis in S. avermitilis.
Microbial metabolism of trans-2-dodecenal (1) was studied. Screening studies have revealed a number of microorganisms that are capable of metabolizing trans-2-dodecenal (1). Scale-up fermentation with Penicillium chrysogenum resulted in the production of two microbial metabolites. These metabolites were identified using spectroscopic methods as trans-2-dodecenol (2) and trans-3-dodecenoic acid (3).
Microbial biotransformations can be used to predict mammalian drug metabolism. The present investigation deals with microbial biotransformation of valdecoxib using microbial cultures. Thirty-nine bacterial, fungal, and yeast cultures were used to elucidate the biotransformation pathway of valdecoxib. A number of microorganisms metabolized valdecoxib to various levels to yield nine metabolites, which were identified by HPLC-DAD and LC-MS-MS analyses. HPLC analysis of biotransformed products indicated that a majority of the metabolites are more polar than the substrate valdecoxib. Basing on LC-MS-MS analysis, the major metabolite was identified as a hydroxymethyl metabolite of valdecoxib, whereas the remaining metabolites were produced by carboxylation, demethylation, ring hydroxylation, N-acetylation, or a combination of these reactions. The hydroxymethyl and carboxylic acid metabolites were known to be produced in metabolism by mammals. From the results, it can be concluded that microbial cultures, particularly fungi, can be used to predict mammalian drug metabolism.
Preliminary microbial metabolism studies of bisphenol A (BPA) (1) on twenty six microorganisms have shown that Aspergillus fumigatus is capable of metabolizing BPA. Scale-up fermentation of 1 with A. fumigatus gave a metabolite (2) and its structure was established as bisphenol $A-O-{\beta}-D-glucopyranoside$ (BPAG) based on spectroscopic analyses.
Microbial metabolism studies of yangonin (1), a major styryl lactone from Piper methysticum, have resulted in the production of three hydroxylated metabolites (2-4). The chemical structures of these compounds were elucidated to be 4-methoxy-6-(12-hydroxystyryl)-2-pyrone (2),4-methoxy-6-(11,12-dihydroxystyryl)-2-pyrone (3),and 4,12-dimethoxy-6-(7,8-dihydroxy-7,8-dihydrostyryl)-2-pyrone (4) on the basis of the chemical and spectroscopic analyses. The compounds 3 and 4 are reported herein as microbial metabolites of yangonin for the first time.
As a global regulatory gene in Streptomyces, afsR can activate the biosynthesis of many secondary metabolites. The effect of afsR on the biosynthesis of a phenazine metabolite, lomofungin, was studied in Streptomyces lomondensis S015. There was a 2.5-fold increase of lomofungin production in the afsR-overexpressing strain of S. lomondensis S015 N1 compared with the wild-type strain. Meanwhile, the transcription levels of afsR and two important genes involved in the biosynthesis of lomofungin (i.e., phzC and phzE) were significantly upregulated in S. lomondensis S015 N1. The optimization of metal chlorides was investigated to further increase the production of lomofungin in the afsR-overexpressing strain. The addition of different metal chlorides to S. lomondensis S015 N1 cultivations showed that CaCl2, FeCl2, and MnCl2 led to an increase in lomofungin biosynthesis. The optimum concentrations of these metal chlorides were obtained using response surface methodology. CaCl2 (0.04 mM), FeCl2 (0.33 mM), and MnCl2 (0.38 mM) gave a maximum lomofungin production titer of 318.0 ± 10.7 mg/l, which was a 4.1-fold increase compared with that of S. lomondensis S015 N1 without the addition of a metal chloride. This work demonstrates that the biosynthesis of phenazine metabolites can be induced by afsR. The results also indicate that metal chlorides addition might be a simple and useful strategy for improving the production of other phenazine metabolites in Streptomyces.
SOS response is a conserved response to DNA damage in prokaryotes and is negatively regulated by LexA protein, which recognizes specifically an "SOS-box" motif present in the promoter region of SOS genes. Myxococcus xanthus DK1622 possesses a lexA gene, and while the deletion of lexA had no significant effect on either bacterial morphology, UV-C resistance, or sporulation, it did delay growth. UV-C radiation resulted in 651 upregulated genes in M. xanthus, including the typical SOS genes lexA, recA, uvrA, recN and so on, mostly enriched in the pathways of DNA replication and repair, secondary metabolism, and signal transduction. The UV-irradiated lexA mutant also showed the induced expression of SOS genes and these SOS genes enriched into a similar pathway profile to that of wild-type strain. Without irradiation treatment, the absence of LexA enhanced the expression of 122 genes that were not enriched in any pathway. Further analysis of the promoter sequence revealed that in the 122 genes, only the promoters of recA2, lexA and an operon composed of three genes (pafB, pafC and cyaA) had SOS box sequence to which the LexA protein is bound directly. These results update our current understanding of SOS response in M. xanthus and show that UV induces more genes involved in secondary metabolism and signal transduction in addition to DNA replication and repair; and while the canonical LexA-dependent regulation on SOS response has shrunk, only 5 SOS genes are directly repressed by LexA.
Methionyl-tRNA synthetase (MRS) is essential for translation. MRS mutants reduce global translation, which usually increases lifespan in various genetic models. However, we found that MRS inhibited Drosophila reduced lifespan despite of the reduced protein synthesis. Microarray analysis with MRS inhibited Drosophila revealed significant changes in inflammatory and immune response genes. Especially, the expression of anti-microbial peptides (AMPs) genes was reduced. When we measured the expression levels of AMP genes during aging, those were getting increased in the control flies but reduced in MRS inhibition flies age-dependently. Interestingly, in the germ-free condition, the maximum lifespan was increased in MRS inhibition flies compared with that of the conventional condition. These findings suggest that the lifespan of MRS inhibition flies is reduced due to the down-regulated AMPs expression in Drosophila.
Kim, Da-Ran;Kim, Su-Hyeon;Lee, Su In;Kwak, Youn-Sig
The Plant Pathology Journal
/
v.38
no.4
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pp.372-382
/
2022
Soybean is an important source of protein and for a wide range of agricultural, food, and industrial applications. Soybean is being affected by Xanthomonas citri pv. glycines, a causal pathogen of bacterial pustule disease, result in a reduction in yield and quality. Diverse microbial communities of plants are involved in various plant stresses is known. Therefore, we designed to investigate the microbial community differentiation depending on the infection of X. citri pv. glycines. The microbial community's abundance, diversity, and similarity showed a difference between infected and non-infected soybean. Microbiota community analysis, excluding X. citri pv. glycines, revealed that Pseudomonas spp. would increase the population of the infected soybean. Results of DESeq analyses suggested that energy metabolism, secondary metabolite, and TCA cycle metabolism were actively diverse in the non-infected soybeans. Additionally, Streptomyces bacillaris S8, an endophyte microbiota member, was nominated as a key microbe in the healthy soybeans. Genome analysis of S. bacillaris S8 presented that salinomycin may be the critical antibacterial metabolite. Our findings on the composition of soybean microbiota communities and the key strain information will contribute to developing biological control strategies against X. citri pv. glycines.
The potential for humic substances to serve as terminal electron acceptors in microbial respiration and the effects of humic substances on microbial azoreduction were investigated. The dissimilatory azoreducing microorganism Shewanella decolorationis S12 was able to conserve energy to support growth from electron transport to humics coupled to the oxidation of various organic substances or $H_2$. Batch experiments suggested that when the concentration of anthraquinone-2-sulfonate (AQS), a humics analog, was lower than 3 mmol/l, azoreduction of strain S12 was accelerated under anaerobic condition. However, there was obvious inhibition to azoreduction when the concentration of the AQS was higher than 5 mmol/l. Another humics analog, anthraquinone-2-sulfonate (AQDS), could still prominently accelerate azoreduction, even when the concentration was up to 12 mmol/l, but the rate of acceleration gradually decreased with the increasing concentration of the AQDS. Toxic experiments revealed that AQS can inhibit growth of strain S12 if the concentration past a critical one, but AQDS had no effect on the metabolism and growth of strain S12 although the concentration was up to 20 mmol/l. These results demonstrated that a low concentration of humic substances not only could serve as the terminal electron acceptors for conserving energy for growth, but also act as redox mediator shuttling electrons for the anaerobic azoreduction by S. decolorationis S12. However, a high concentration of humic substances could inhibit the bacterial azoreduction, resulting on the one hand from the toxic effect on cell metabolism and growth, and on the other hand from competion with azo dyes for electrons as electron acceptor.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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