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Increase of isoflavones in soybean callus by Agrobacterium-mediated transformation

  • Jiang, Nan;Jeon, Eun-Hee;Pak, Jung-Hun;Ha, Tae-Joung;Baek, In-Youl;Jung, Woo-Suk;Lee, Jai-Heon;Kim, Doh-Hoon;Choi, Hong-Kyu;Cui, Zheng;Chung, Young-Soo
    • Plant Biotechnology Reports
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    • 제4권4호
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    • pp.253-260
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    • 2010
  • Plant secondary metabolites have always been a focus of study due to their important roles in human medicine and nutrition. We transferred the isoflavone synthase (IFS) gene into soybean [Glycine max (L.) Merr.] using the Agrobacterium-mediated transformation method in an attempt to produce transformed soybean plants which produced increased levels of the secondary metabolite, isoflavone. Although the trial to produce transgenic plant failed due to unestablished hygromycin selection, transformed callus cell lines were obtained. The induction rate and degree of callus were similar among the three cultivars tested, but light illumination positively influenced the frequency of callus formation, resulting in a callus induction rate of 74% for Kwangan, 67% for Sojin, and 73% for Duyou. Following seven to eight subcultures on selection media, the isoflavone content of the transformed callus lines were analyzed by high-performance liquid chromatography. The total amount of isoflavone in the transformed callus cell lines was three- to sixfold higher than that in control callus or seeds. Given the many positive effects of isoflavone on human health, it may be possible to adapt our transformed callus lines for industrialization through an alternative cell culture system to produce high concentrations of isoflavones.

고추의 소포자 배양 시 배지 첨가와 진탕이 배의 생산에 미치는 영향 (Influence of medium addition and agitation on the production of embryos in isolated microspore culture of hot pepper (Capsicum annuum L.))

  • 안동주;박은준;김문자
    • Journal of Plant Biotechnology
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    • 제38권1호
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    • pp.30-41
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    • 2011
  • 본 연구에서는 고추의 나출 소포자 배양 시 배양 중 새배지의 첨가와 진탕이 배의 생산에 미치는 영향을 조사하였다. 액체-2층 배양에서 초기 액체배양 시에 새 배지를 첨가하면 배의 발생과 발달 모두 크게 증가하였다. 가장 효과적인 첨가 시기는 초기액체 배양을 시작한 5일 후 이었다. 한편 액체-2층 배양에서 후기 2층배양 시의 새 배지 첨가는 초기 액체배양 시 첨가 때에 비해 그 효과가 적었다. 액체-2층 배양에서 후기 2층배양 시의 1주간 진탕은 정상 자엽배 생산에 효과적이었다. 액체배양시에도 배양 1주 후의 1주간 진탕은 배의 발달에 효과적 이었다. 그러나 액체-2층배양 시와 액체배양 시 모두 진탕기간이 2 ~ 3 주간으로 길어질 때에는 배의 발달이 비정상적이었다. 본 실험 결과 얻어진 정상 자엽배들은 재분화 배지에 이식 시 용이하게 유식물체로 발달하였다. 재분화 식물체들 중에는 반수체와 배가반수체가 혼재하였으며, 이들 간에는 공변세포 내 엽록체 수의 차이가 뚜렷하였다. 이와 같은 결과들은 고추에서 다수의 정상자엽배를 생산할 수 있는 소포자 배양 시스템을 확립하는 데 중요한 기초자료가 될 것이다.

계대세포를 이용한 소 수정란의 체외배양 체계에 관한 연구 (Effects of established cell lines on bovine embryo development during in vitro culture)

  • 주석천;이병천;이원유;최윤석;황우석
    • 대한수의학회지
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    • 제37권3호
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    • pp.647-659
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    • 1997
  • To overcome the difficulties of collecting and culture of primary cell from genital tract on embryonic development, the present study was carried out to investigate the critical effect of cell lines, such as BRL and Vero cell and its conditioned medium on the development of early Korean native cattle embryos in vitro. Oocytes collected from slaughterhouse ovaries were matured in TCM199 containing FSH, estradiol-$17{\beta}$ and FBS with granulosa cell monolayer for 24 hours and then fertilized in vitro using frozen-thawed, heparin-treated spermatozoa in TALP for 30 hours. And then early embryos (1-2cell) were cultured in TCM199 containing 10% FBS with BOEC, Granulosa, BRL, Vera cell monolayers and conditioned medium for 2~3 days. Development to morulae and blastocysts were recorded, also examined the number of blastomeres presented a valuable parameter for the evaluation of embryonic development. The early cleavage rates of in vitro fertilized embryos co-cultured, there was no differences between primary cell and cell lines(p<0.05). The rate of development to the later stage, coculture of BRL cell was significantly higher than that of the primary cell(p<0.05). The rates of development to morula and blastocyst were significantly higher in vero cell than BRL, Granulosa, Oviduct epithelial cell conditioned medium. In the result of effect of serum on development of early bovine embryos, the use of media containing serum were significantly higher than the use of not containing one on development of early and later stage of embryos. The result of number of blastomeres in blastocysts, there is no differences between primary cell and cell lines. The blastocysts from coculture were higher than from conditioned medium in blastomere cells. In summary, these experments have proved that the culture system in TCM199 with BRL, Vero cell monolayers is effective on in vitro development of early bovine embryos, In addition, it is effective to development of bovine embryos that containing serum in conditioned medium, or in co-culture rather than in conditioned medium alone. The use of cell lines opponent to primary cells is effective in bovine embryo culture.

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미세 혈관 접합술에서 봉합적 수기와 비봉합적 수기의 실험적 비교 연구 (Experimental Study of the Anastomosis with Suture vs Non-suture Techinique)

  • 정덕환;한정수;유명철;남기운;선승덕
    • Archives of Reconstructive Microsurgery
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    • 제3권1호
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    • pp.45-53
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    • 1994
  • Suture microvascular anastomosis is time-consuming and tedious and demands long and continuous training. Techinique of anastomosis of microvessel was presented interrupted suture and continuous suture. Recently the unilink instrument system is created as a fast and simple method to achieve high patency rates without long and continuous training in the anastomosis of small vessels. The author experimentally studied the femoral artery of 20 mice(0.5-1.0mm, av. 0.7mm), the femoral vein of 20 mice(0.8-1.6mm, av. 1.2mm) after anastomosis with interrupted suture in 20 cases and continuous sutre in 20 cases. For the unilink apparatus we used the carotid arteries of 15 cases in 14 rabbits(1.0-1.6mm, av. 1.3mm) and facial veins of 12 cases in 14 rabbits(0.9mm-2.2mm, av. 1.5mm). A total of 27 arterial and venous anastomoses were performed. We examined the postoperative patency at immediate, 2 weeks, and 8 weeks. The results were as followings, 1. In the arterial anastomosis the rate of patency was 90%(18/20) in interrupted suture, 90%(18/20) in continuous suture and 93%(13/15) in unilink apparatus. In the venous anastomosis the rate of patency was 90%(18/20) in interrupted suture, 80%(16/20) in continuous suture and 100%(9/9) in unilink apparatus. 2. The mean time for completion of the arterial anastomosis were 12.2 minutes in interrupted suture group, 10.3 minutes in continouous suture group and 8.5 minutes in unillnk apparatus group. The mean time for completion of the venous anastomosis were 13.6 minutes in interrupted suture group, 11.0 minutes in continuous suture group and 6.2 minutes in unilink apparatus group. 3. At the histological examination of suture group, hyperplastic reaction of middle layer and subintimal hyperplasia were observed. In unilink apparatus group, the endothelium layer was continued and the thickness of vessel wall was decreased due to moderate atrophy of the media and mild degree of nonspecific chronic inflammation were seen around the unilink apparatus. 4. No significants was noticied in foreign body reaction among the interrupted, continuous and unilink apparatus group. 5. A case of the arterial anastomosis was released with acting out at 15 minutes after operation. 6. The important factors in the technical problems were accurate apposition of the cut vessel edges in suture group and the proper selection of the ring size and optimal fitting between two rings in unilink apparatus group. Even though the outer diamater of vessel in suture group was different from that in unilink apparatus group the unilink method provides a very safe, fast, and simple way to perform microvascular anastomoses especially in anastomosis of vein. But howerver suture was needed in vessels below 1 mm outer diamater. In that situation continuous suture was benefit than the interrupted suture in operation time.

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KURT 부지 환경에 위치한 가상의 처분 시설에서 누출되는 방사성 핵종의 이동을 Time Domain에서 해석하는 방법에 관한 연구 (Radionuclides Transport from the Hypothetical Disposal Facility in the KURT Field Condition on the Time Domain)

  • 황영택;고낙열;최종원;조성석
    • 방사성폐기물학회지
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    • 제10권4호
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    • pp.295-303
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    • 2012
  • 한국원자력연구원의 지하처분연구시설인 KURT 주변의 지하수 유동 환경과 관련하여 수집 및 분석된 자료를 바탕으로, 가상의 처분장에서 누출된 방사성 핵종의 이동 현상을 시간 영역(time domain)에서 계산하였다. KURT에서 실시된 현장 시험에서 밝혀진 수리지질학적 특성을 바탕으로 지하수 유동 모의를 실시하였고, 그 결과를 통해 파악된 지하수 유동 경로를 따라 방사성 핵종이 이동하는데 걸리는 시간은 시간 영역에서 용질 이동 모의를 하는 TDRW(Time Domain Random Walk) 방식을 통해 평가하였다. 이류(advection)와 분산(dispersion) 현상 외에 방사성 핵종의 붕괴(decay), 평형 흡착(equilibrium sorption), 암반 기질로의 확산(matrix diffusion) 현상이 용질의 이동 시간에 영향을 주는 것으로 설정되었다. 모의 결과를 통해 방사성 핵종과 지하 매질의 특성에 의한 흡착 현상, 기질 확산 현상이 핵종 이동에 미치는 영향이 분석되었으며, 방사성 핵종의 연쇄 KURT 부지 환경에 위치한 가상의 처분 시설에서 누출되는 방사성 핵종의 이동을 Time Domain에서 해석하는 방법에 관한 연구 반응에 의한 영향도 평가하였다. KURT 부지 환경에서 지표로 유출될 수 있다고 계산된 방사성 핵종의 유출량은 처분장에서 누출될 수 있는 양의 $10^{-3}$배 미만이었고, 암반 기질로의 확산 및 흡착이 고려되면 그 비율이 더욱 낮아졌다. 본 연구에서 사용된 핵종 이동 모의 방법은 방사성붕괴나 흡착, 확산 등 이동 지연 현상을 고려하면서 핵종의 이동 시간을 계산할 수 있어 안전성 평가에서 요구되는 심부 지하에서의 방사성 핵종 이동 관련 자료를 작성하는데 활용될 수 있을 것이다.

유리섬유 및 알루미늄 금속 혼합물 유리조성 개발 (Development on Glass Formulation for Aluminum Metal and Glass Fiber)

  • 조현제;김천우
    • 방사성폐기물학회지
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    • 제10권4호
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    • pp.247-254
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    • 2012
  • 원전에서 발생되는 방사성폐기물에 대한 고화처리 방법 중 하나인 유리화기술이 일부 가연성폐기물에 대해 적용되고 있다. 국내외적으로 중저준위 방사성폐기물의 효과적인 감용과 안정적인 처분을 위해 다양한 폐기물에 대한 유리화기술 적용방안이 확대 연구되고 있으며, 최근에는 가연성폐기물 뿐만 아니라 알루미늄 금속과 같은 비가연성폐기물에도 유리화 연구가 활발하게 진행되고 있다. 공기조화계통 (HVAC)에는 주로 필터가 이용되고 있으며, 사용 후 필터는 여과재 (유리섬유 및 알루미늄)를 이용하여 배기체를 흡착하기 때문에 방사성폐기물로 처리가 되어야 한다. 본 연구는 필터에 대한 처리기술 연구를 위해 유도가열식 저온용융로 (Cold Crucible Induction Melter: CCIM)를 이용한 유리화 타당성 연구를 수행하였다. 사용후 필터에 대한 유리화 (Vitrification)는 먼저 유리섬유 및 알루미늄 함량을 고려한 최적의 유리조성을 개발 하였으며, 개발된 유리 조성을 이용하여 최적의 폐기물 저감을 위한 용융변수와 최종 생성된 유리고화체의 특성을 분석하였다. 사용후 필터 유리화용 조성유리는 주로 $SiO_2$$B_2O_3$로 구성되어 있다. 전기로를 이용한 용융물 특성시험에서는 폐기물 투입률 및 최종 생성물인 유리고화체의 특성이 검토되었다. 본 연구에서는 알루미늄 금속과 유리섬유로 구성된 필터에 대한 유리조성 개발과 이를 통해 생성된 유리고화체의 물리화학적 특성을 검토하고 유리화 타당성을 확인하였다.

Synthetic oviduct fluid(SOF)를 이용한 소 수정란의 배양에 관한 연구 (Studies on the culture of bovine embryos using synthetic oviduct fluid(SOF))

  • 노상호;황우석;조충호
    • 대한수의학회지
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    • 제35권1호
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    • pp.187-195
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    • 1995
  • The present study carried out to determine the developmental capacity of bovine oocytes matured in epidermal growth factor(EGF)-containing medium, the developmental competence of bovine embryos using synthetic oviduct fluid(SOF) and the effect of glucose on the development of bovine embryos. In experiment 1, oocytes, obtained from abattoir ovaries, were matured in EGF-containing medium for 24 hours, followed by exposure to Korean native cattle spermatozoa for 18 hours and cultured by utilizing co-culture system with bovine oviduct epithelial cells(BOEC) in TCM199. In experiment 2, early bovine embryos were cultured in SOF with or without BOEC and compared with those in TCM199 with BOEC. In experiment 3, bovine embryos were cultured in the presence or absence of glucose. Seven and ten days after in vitro fertilization, developmental competence of embryos were evaluated. The rate of cleavage was significantly(P<0.05) higher in EGF-containing maturation medium(70.0%) than in control(57.7%). The rates of development to morulae and blastocysts were 30.6% and 23.3% there was no significant difference between them. The rates of in vitro fertilized embryos to morulae and blastocysts cultured in SOF with BOEC(30.4%) and in TCM199 with BOEC(38.0%) were significantly(P<0.01) higher than cultured in SOF without BOEC(13.4%) at seven days after in vitro fertilization. The rates of embryos to blastocysts cultured in SOF with BOEC(29.4%) and in TCM199 with BOEC(35.9%) were significantly(P<0.05) higher than cultured in SOF without BOEC(13.4%) at ten days after in vitro fertilization. The rates of early embryos to morulae and blastocysts cultured in the presence or absence of glucose were 12.2% and 17.5% each other, there was no significant difference between them. The results show that bovine oocytes matured in the presence of EGF can cleave better, SOF with BOEC can replace serum containing complex media, TCM199 with BOEC in bovine embryo culture and glucose have little effect on the culture of early bovine embryos.

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식생체류지의 도시 강우유출수 처리효율 영향인자 조사 연구 (Investigation on the Factors Affecting Urban Stormwater Management Performance of Bioretention Systems)

  • ;;홍정선;김이형
    • 한국물환경학회지
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    • 제33권1호
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    • pp.1-7
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    • 2017
  • 식생체류지는 도시 강우유출수 관리를 위한 저영향개발 및 그린인프라 기술이며, 개발이전의 상태를 최대한 유지하는 강우유출수 관리기술로 자연을 모방하면서 생태계의 다양성을 향상시키는 기술이다. 본 연구는 식생체류지의 물순환 능력과 비점오염물질의 저감효율에 영향을 끼치는 인자를 도출하기 위하여 4개의 식생체류지 시스템에 대하여 연구를 수행하였다. 2개의 식생체류지, 즉 Type A-C와 Type A-FC에는 국화와 매발톱꽃이 식재되었으며, Type B-A와 Type B-JM식생체류지에는 진달래 및 조팝나무와 같은 관목식물이 식재되었다. 연구결과 식생체류지의 유출저감, 저류량 및 오염물질 저감에 영향을 끼치는 인자로는 TV, 침투기작, 여과재의 두께와 식생 종류로 나타났다. Type B-A와 Type B-JM식생체류지 설계시에는 유출저감, 지하수 충진, 긴 체류시간과 첨두유출량 저감과 비점오염물질 저감을 고려하여 설계가 필요한 것으로 나타났다. 반면에 Type A-C와 Type A-FC 식생체류지 설계시에는 지하수 오염 저감을 중요하게 고려하여야 하는 것으로 나타났다.

도시 강우유출수를 처리하는 나무여과상자의 장기 처리효율에 영향을 주는 수리학적 및 수문학적 인자 연구 (Hydrologic and Hydraulic Factors Affecting the Long-term Treatment Performance of an Urban Stormwater Tree Box Filter)

  • ;홍정선;김이형
    • 한국물환경학회지
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    • 제33권6호
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    • pp.715-721
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    • 2017
  • 식생체류지 기법 중 하나인 나무여과상자는 유역면적 및 강우유출수의 특성에 따라 기법의 용적 및 수질 저감 능력 조정이 가능한 도시 저영향개발 기술이다. 본 연구는 주차장 강우유출수 처리를 위해 6년동안 운영된 나무여과상자의 성능을 평가하기 위하여 수행되었다. 또한 나무여과상자의 저감 능력에 영향을 미치는 수리 수문학적 요인들을 조사하였다. 분석 결과, 강수량의 증가는 나무여과상자의 유출량, 평균유량 및 첨두유량 감소 등의 수리 수문학적 성능이 감소되는 것으로 평가되었다(r = -0.53 to -0.59; p < 0.01). TSS, 유기물, 영양물질 및 중금속 등의 오염물질은 나무여과상자 내 충진된 여재의 여과 및 흡착, 침투, 증산발 기작 등을 통하여 저감되는 것으로 나타났다(p < 0.001). 또한 유출량, 평균유량, 첨두유량, 체류시간 및 강우지속시간 등과 같은 수리 수문학적 요인의 영향을 받는 것으로 평가되었다. 이는 나무여과상자 시설을 유역면적 대비 시설의 표면적을 1 % 미만으로 설계 시 특히 유용한 것으로 나타났다.

5ZrSiO4-xCaCO3 혼합계에서 CaCO3첨가량이 CaZrO3와 m-ZrO2의 합성 및 미세구조변화에 미치는 영향 (Influence of Addition Amount of CaCO3on the Synthesizing behavior and Microstructural Evolution of CaZrO3 and m-ZrO2 in 5ZrSiO4-xCaCO3 Mixture System)

  • 김재원;이재언;조창용;이재현;정연길
    • 한국재료학회지
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    • 제13권9호
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    • pp.572-580
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    • 2003
  • Synthesizing behavior and microstructural evolution of $CaZrO_3$and $m-ZrO_2$in a thermal reaction process of $ZrSiO_4$-$xCaCO_3$mixtures, where x is 7 and 19, were investigated to determine the addition amount of CaO in CaO:$ZrO_2$:$SiO_2$ternary composition. CaZrO$_3$-Ca$_2$SiO$_4$precursor prepared by the mixture of $ZrSiO_4$and CaCO$_3$in aqueous suspending media was controlled to the acidic (pH=4.0) condition with HCI solution to enhance the thermal reaction. The addition amount of dispersant into the $ZrSiO_4$-$xCaCO_3$slip increased with increasing mole ratio of $CaCO_3$, which was associated with the viscosity of slip. Decarbonation reaction was activated with an increase of the addition amount of $CaCO_3$, showing different final temperatures in $ZrSiO_4$-$7CaCO_3$and $ZrSiO_4$-$19CaCO_3$mixtures as about 980 and 116$0^{\circ}C$, respectively, for finishing decarbonation reaction. The grain morphology was changed to spherical shape for all samples with an increase of sintering temperature. The grain size and phase composition of the synthesized composites depended on the mixture ratio of Zrsi04 and CacO3 powders, indicating that the main crystals were m-ZrO2 ($\leq$3 $\mu\textrm{m}$) and $CaZrO_3$ ($\leq$ 7 $\mu\textrm{m}$) in $ZrSiO_4$$>-7CaCO_3$and $ZrSiO_4$-$19CaCO_3$mixtures, respectively.