Serratia marcescens ATCC 25419를 질소원이 풍부한 BHI 배지에서 황산 암모늄 분별 침전을 시킨 후 DAEA-Sephacel chromatography, Phenyl-Sepharose hydrophobic chromatography, Sephacryl S-400 gel filtration, native gel elution을 거쳐 ALS isozyme Rf 0.83을 분리하였다. 분리한 ALS isozyme Rf 0.83의 native 형태는 gel filtration을 이용하여 분자량을 측정한 결과, 531,400이었고, SDS-PAGE를 수행한 결과 55,000의 large subunit와 38,900의 small subunit로 구성된 multimer임을 알 수 있었다.
Kim, Hee Jung;Jung, Won Kyeong;Lee, Hyun Woo;Yoo, Wanki;Kim, T. Doohun;Kim, Hoon
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제25권12호
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pp.2024-2033
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2015
A gene encoding lipolytic enzyme, lip7-3, was isolated from Bacillus sp. W130-35 isolated from a tidal mud flat. The gene encoded a protein of 215 amino acids with a signal peptide composed of 34 amino acid residues. Lip7-3 belonged to the family I.4 lipase and showed its maximal activity at pH 9.0 and 60℃. Its activity increased in the presence of 30% methanol and, remarkably, increased as well to 154.6% in the presence of Ca2+. Lip7-3 preferred p-nitrophenyl octanoate (C8) as a substrate and exhibited broad specificity for short- to long- chain fatty acid esters. Additionally, Lip7-3 showed a low degree of enantioselectivity for an S-enantiomer (e.g., (S)-methyl-3-hydroxy-2-methylpropionate). It efficiently hydrolyzed glyceryl tributyrate, but did not hydrolyze glyceryl trioleate, fish oil, or olive oil. Its substrate specificity and activation by the solvent might offer a merit to the biotechnological enzyme applications like transesterification in the production of biodiesel.
대한원격탐사학회 2006년도 Proceedings of ISRS 2006 PORSEC Volume II
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pp.627-630
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2006
Sequential Pattern Mining is the mining approach which addresses the problem of discovering the existent maximal frequent sequences in a given databases. In the daily and scientific life, sequential data are available and used everywhere based on their representative forms as text, weather data, satellite data streams, business transactions, telecommunications records, experimental runs, DNA sequences, histories of medical records, etc. Discovering sequential patterns can assist user or scientist on predicting coming activities, interpreting recurring phenomena or extracting similarities. For the sake of that purpose, the core of sequential pattern mining is finding the frequent sequence which is contained frequently in all data sequences. Beside the discovery of frequent itemsets, sequential pattern mining requires the arrangement of those itemsets in sequences and the discovery of which of those are frequent. So before mining sequences, the main task is checking if one sequence is a subsequence of another sequence in the database. In this paper, we implement the subsequence matching method as the preprocessing step for sequential pattern mining. Matched sequences in our implementation are the normalized sequences as the form of number chain. The result which is given by this method is the review of matching information between input mapped sequences.
Raphanus sativus L. (RS) is a cruciferous vegetable that is widely consumed in Korea. The anticancer activity of leaves of RS (RSL) extract has been investigated; however, no studies focused on its anti-inflammatory effects. Therefore, the aim of the current study was to evaluate the anti-inflammatory effects of RSL extract. In brief, RSL powder was fractionated into n-hexane, chloroform, ethyl acetate, n-butanol, and water-soluble fractions. Lipopolysaccharide (LPS)-stimulated RAW264.7 cells were treated with each fraction for initial screening. It was found that the chloroform fraction significantly inhibited nitric oxide release in LPS-stimulated RAW264.7 cells with a half maximal inhibitory concentration value of $196{\mu}g/mL$. In addition, the mRNA and protein expression levels of inducible nitric oxide synthase, measured using reverse transcriptase-polymerase chain reaction and western blotting, respectively, were reduced in a concentration-dependent manner. Moreover, the inflammatory cyclooxygenase-2 enzyme expression decreased. Furthermore, the expression of nuclear factor-kappa B ($NF-{\kappa}B$), the key regulator of the transcriptional activation of the inflammatory cytokine genes, was reduced by the RSL chloroform fraction. Therefore, the results of our study suggest that RSL exhibits anti-inflammatory effects in LPS-stimulated macrophages via $NF-{\kappa}B$ inactivation.
The room temperature fluorescence induction of chloroplasts was utilized as a probe to locate the site of inhibition by mercury, copper and zinc on PS II by mercury. Inhibitory effect of Hg2+ on electron transport activity was notable as compared with Cu2+ and Zn2+. At concentrations of HgCl2 over 50 $\mu$M, activities of PS II and whole-chain electron transport decreased more than 70%, while that of PS I decreased about 10~30%. This suggests that PS II is more susceptible to Hg2+ than PS I is. In the presence of diphenylcarbazide (DPC), 50 $\mu$M HgCl2 inhibited the reduction of dichlorophenolindophenol (DCPIP) about 50%. Addition of heavy metals induced marked decrease in maximal variable fluorescence/initial fluorescence [(Fv)m/Fo], but no changes in Fo. With various concentrations of heavy metals, changes of chlorophyll a fluorescence emitted by PS II showed gradual decrease in photochemical quenching (qQ), which indicates an increase in reduced state of electron acceptor, QA. Especially, the addition of HgCl2 caused a notable decrease of qQ. In the presence of 50 $\mu$M CuCl2, energy-depended quenching (qE) was completely reduced, whereas in the presence of 50 $\mu$M CuCl2 and ZnCl2 it was still remained. The above results are discussed on the effects of mercury in relation to water-splitting system and plastoquinone (PQ) shuttle system.
Sequential Pattern Mining is the mining approach which addresses the problem of discovering the existent maximal frequent sequences in a given databases. In the daily and scientific life, sequential data are available and used everywhere based on their representative forms as text, weather data, satellite data streams, business transactions, telecommunications records, experimental runs, DNA sequences, histories of medical records, etc. Discovering sequential patterns can assist user or scientist on predicting coming activities, interpreting recurring phenomena or extracting similarities. For the sake of that purpose, the core of sequential pattern mining is finding the frequent sequence which is contained frequently in all data sequences. Beside the discovery of frequent itemsets, sequential pattern mining requires the arrangement of those itemsets in sequences and the discovery of which of those are frequent. So before mining sequences, the main task is checking if one sequence is a subsequence of another sequence in the database. In this paper, we implement the subsequence matching method as the preprocessing step for sequential pattern mining. Matched sequences in our implementation are the normalized sequences as the form of number chain. The result which is given by this method is the review of matching information between input mapped sequences.
In this paper, we consider the structure of ${\gamma}$-constacyclic codes of length $2p^s$ over the Galois ring $GR(p^a,m)$ for any unit ${\gamma}$ of the form ${\xi}_0+p{\xi}_1+p^2z$, where $z{\in}GR(p^a,m)$ and ${\xi}_0$, ${\xi}_1$ are nonzero elements of the set ${\mathcal{T}}(p,m)$. Here ${\mathcal{T}}(p,m)$ denotes a complete set of representatives of the cosets ${\frac{GR(p^a,m)}{pGR(p^a,m)}}={\mathbb{F}}p^m$ in $GR(p^a,m)$. When ${\gamma}$ is not a square, the rings ${\mathcal{R}}_p(a,m,{\gamma})=\frac{GR(p^a,m)[x]}{{\langle}x^2p^s-{\gamma}{\rangle}}$ is a chain ring with maximal ideal ${\langle}x^2-{\delta}{\rangle}$, where ${\delta}p^s={\xi}_0$, and the number of codewords of ${\gamma}$-constacyclic code are provided. Furthermore, the self-orthogonal and self-dual ${\gamma}$-constacyclic codes of length $2p^s$ over $GR(p^a,m)$ are also established. Finally, we determine the Rosenbloom-Tsfasman (RT) distances and weight distributions of all such codes.
Ehretia asperula is a medicinal plant of the Ehretiaceae family used to treat inflammatory disorders, but the underlying mechanisms are not fully elucidated. The anti-inflammatory potential was determined based on enzyme cyclooxygenase-2 (COX-2) inhibition, which showed that the 95% ethanol extract (95ECH) was most effective with a half-maximal inhibitory concentration (IC50) value of 34.09 ㎍/mL. The effects of 95ECH on phagocytosis, NO production, gene, and protein expression of the cyclooxygenase 2/prostaglandin E2 (COX-2/PGE2) and inducible nitric oxide synthase/ nitric oxide (iNOS/NO) pathways in lipopolysaccharide (LPS)-induced RAW264.7 cells were examined using the neutral red uptake and Griess assays, reverse-transcriptase polymerase chain reactions (RT-PCR), and enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA). The results showed that 95ECH suppressed phagocytosis and the NO production in activated macrophage cells (p < 0.01). Conversely, 95ECH regulated the expression levels of mRNAs for cytokines tumor necrosis factor alpha (TNF-α), interleukin-6 (IL-6), and interleukin-1 beta (IL-1β) as well as the corresponding proteins. In addition, PGE2 production was inhibited in a dose-dependent manner by 95ECH, and the expression of iNOS and COX-2 mRNAs was decreased in activated macrophage cells, as expected. Therefore, 95ECH from E. asperula leaves contains potentially valuable compounds for use in inflammation management.
Paenibacillus woosongensis의 유전체 부분 염기서열로부터 mannanase를 코드하는 것으로 유추되는 open reading frame을 중합효소연쇄반응으로 증폭하여 대장균에 클로닝하고 염기서열을 결정하였다. Mannanase 유전자는 man26AT로 명명하였으며 1,053 아미노산으로 구성된 단백질을 코드하는 3,159 뉴클레오티드로 이루어졌다. 아미노산 잔기배열을 분석한 결과 Man26AT는 glycosyl hydrolase family 26의 mannanase와 상동성이 높은 활성영역, 탄수화물 결합영역 CBM27과 CBM11로 구성되어 있었다. Man26AT의 아미노산 배열은 P. ihumii의 유추된 mannanase와 상동성이 81%이고 다른 Paenibacillus 속 균주의 여러 mannanases와 57% 이하의 상동성을 보였다. man26AT 유전자를 함유한 재조합 대장균의 균체 파쇄상등액은 $55^{\circ}C$와 pH 5.5에서 최대의 mannanase 활성을 보였고, $50^{\circ}C$에서 1시간 열처리한 후에 80% 이상의 잔존활성을 보였다. Man26AT는 locust bean gum (LBG) galactomannan과 konjac glucomannan에 대한 분해활성이 유사하였으며, carboxymethylcellulose, xylan과 para-nitrophenyl-${\beta}$-mannopyranoside는 분해하지 못하였다. Man26AT에 의해 mannotriose, mannotetraose, mannopentaose와 mannohexaose 등의 만노올리고당이나 LBG로부터 공통의 최종 가수분해 산물로 mannose, mannobiose와 mannotriose가 생성되었다. 또한 mannotriose 보다 큰 만노올리고당이 LBG와 guar gum의 분해산물로 각각 생성되었다. 그러나 Man26AT는 mannobiose를 분해하지는 못하였다. 활성염색을 통해 Man26AT는 균체 내에서 3개 이상의 크기가 다른 활성 단백질로 분해된 것이 확인되었다.
This study aimed to investigate the signal transduction of phosphorylation sites at the carboxyl (C)-terminal region of equine luteinizing hormone/chorionic gonadotropin receptor (eLH/CGR). The eLH/CGR has a large extracellular domain of glycoprotein hormone receptors within the G protein-coupled receptors. We constructed a mutant (eLH/CGR-t656) of eLH/CGR, in which the C-terminal cytoplasmic tail was truncated at the Phe656 residue, through polymerase chain reaction. The eLH/CGR-t656 removed 14 potential phosphorylation sites in the intracellular C-terminal region. The plasmids were transfected into Chinese hamster ovary (CHO)-K1 and PathHunter Parental cells expressing β-arrestin, and agonist-induced cAMP responsiveness was analyzed. In CHO-K1 cells, those expressing eLH/CGR-t656 were lower than those expressing eLH/CGR wild-type (eLH/CGR-wt). The EC50 of the eLH/CGR-t656 mutant was approximately 72.2% of the expression observed in eLH/CGR-wt. The maximal response in eLH/CGR-t656 also decreased to approximately 43% of that observed in eLH/CGR-wt. However, in PathHunter Parental cells, cAMP activity and maximal response of the eLH/CGR-t656 mutant were approximately 173.5% and 100.8%, respectively, of that of eLH/CGR-wt. These results provide evidence that the signal transduction of C-terminal phosphorylation in eLH/CGR plays a pivotal role in CHO-K1 cells. The cAMP level was recovered in PathHunter Parental cells expressing β-arrestin. We suggest that the signal transduction of the C-terminal region phosphorylation sites is remarkably different depending on the cells expressing β-arrestin in CHO-K1 cells.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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