A novel bioactive molecule produced by Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki Bn1 (Bt-Bn1), isolated from a common pest of hazelnut, Balaninus nucum L. (Coleoptera: Curculionidae), was determined, purified, and characterized in this study. The Bt-Bn1 strain was investigated for antibacterial activity with an agar spot assay and well diffusion assay against B. cereus, B. weinhenstephenensis, L. monocytogenes, P. savastanoi, P. syringae, P. lemoignei, and many other B. thuringiensis strains. The production of bioactive molecule was determined at the early logarithmic phase in the growth cycle of strain Bt-Bn1 and its production continued until the beginning of the stationary phase. The mode of action of this molecule displayed bacteriocidal or bacteriolytic effect depending on the concentration. The bioactive molecule was purified 78-fold from the bacteria supernatant with ammonium sulfate precipitation, dialysis, ultrafiltration, gel filtration chromatography, and HPLC, respectively. The molecular mass of this molecule was estimated via SDS-PAGE and confirmed by the ESI-TOFMS as 3,139 Da. The bioactive molecule was also determined to be a heat-stable, pH-stable (range 6-8), and proteinase K sensitive antibacterial peptide, similar to bacteriocins. Based on all characteristics determined in this study, the purified bacteriocin was named as thuricin Bn1 because of the similarities to the previously identified thuricin-like bacteriocin produced by the various B. thuringiensis strains. Plasmid elution studies showed that gene responsible for the production of thuricin Bn1 is located on the chromosome of Bt-Bn1. Therefore, it is a novel bacteriocin and the first recorded one produced by an insect originated bacterium. It has potential usage for the control of many different pathogenic and spoilage bacteria in the food industry, agriculture, and various other areas.
This study intended to compare the productive performance of three different layer raising systems; conventional cage (CC), barn (BR) and aviary (AV). The AV is welfare bestowed housing that allows free locomotion for birds within the BR. The BR allows bird's free locomotion inside BR but without multilevel structures. Both pullets and cockerels were housed together in both AV and BR, but only pullets in CC. Seventeen weeks old Lohmann Brown Lite (n = 800) pullets were housed in AV during this study. The same age layer pullets were simultaneously assigned to either at CC or BR to compare egg production performance with AV. The duration of experiment was 40 weeks (from 21st to 60th week). There were no remarkable differences in egg production, hen day egg production (HDEP) and average egg weight among three rearing systems. First 20 weeks (phase-1) average HDEP (%) of AV, CC, and BR were 85.9, 88.8, 87.1 and average egg weights (g) were 57.5, 59.9, and 56.9 respectively. Those of the remaining 20 weeks (phase-2) were 87.1, 87.9, 85.5 and 64.2, 63.0 62.1, respectively. Daily feed intakes (122 g, 110 g, 125 g); feed conversion ratio (2.4, 2.1, 2.5) and daily egg mass (53.9 g, 54.4 g, 52.8 g) data from AV, CC, and BR were not influenced significantly by the respective raising systems. Daily feed intake of layers in both AV (124 g) and BR (127 g) tended to be higher than that in CC (113 g) during phase-2. Overall, exterior egg quality (dirty and cracked eggs) in both phases was superior in BR compared with AV and CC, whereas CC generated intermediate results. This study indicated that the HDEP per se in AV and BR were not significantly different from that in CC. The study implied that the facility depreciation cost for AV and cost for increased feed intake in AV compared to CC are believed to be critical to evaluate the cost effectiveness of egg production in AV.
본 연구에서는 Phellinus linteus 균사체의 액상배양을 통한 면역증강 생리활성 효능의 단백다당체 생산공정을 개발하기 위한 시도로서, 우선 생산균체의 원형질체 형성을 통한 고생산성 균주를 개발하고자 하였으며, 발효기 액상배양 시 최적 배양형태의 유도를 통해 균사체와 단백다당체의 생산성을 극대화하고자 하였다. 본 연구실에서 채취한 생산 균주를 ITS rDNA sequencing 방법과 blast search 방법에 의해 조사한 결과 다양한 Phellinus linteus 종들과 99.67% 이상의 유사성 확인되어, 이 균주를 Phellinus linteus라고 최종적으로 동정할 수 있었다. 이 동정된 균주로부터 균주 개량을 시도하기 위해 Phellinus linteus 균사체로부터 대량의 원형질체 형성 및 재생에 의한 단일 콜로니 획득 방법을 개발함으로써 균주를 신속하게 개량할 수 있었다. Sorbitol을 이용한 banding filtration 방법을 이용하여 원형질체를 회수한 결과 $10^5{\sim}10^6\;protoplasts/ml$를 얻을 수 있었으며, 원형질체 재생률은 $10^{-2}{\sim}10^{-3}$로 나타났다. 균주개량을 위해 원형질체 재생배지와 고체배양배지에서 고성장성 및 고안정성을 보이는 균주들을 지속적으로 대량 선별하여, 액상 생산배양을 수행하였다. 그 결과 균사체량은 13~15 g/L로 대부분 비슷하게 자랐으며, 조단백다당체의 함량 또한 5.8~6.4%로 거의 비슷하게 분포하는 것으로 나타났는데, 이로부터 고체배양배지에서 빠른 성장속도를 보여주는 균주들이 대부분 액상 생산배양에서도 고생산성 및 고안정성을 보여주는 것을 확인할 수 있었다. 한편 Phellinus linteus 균사체의 경우 조단백다당체의 함량이 세포 무게당 거의 일정한 양을 함유하고 있는 것으로 확인되었으므로, 조단백다당체의 생산성을 증가시키기 위해서는 최종 생산배양에서의 균체량 증가가 가장 중요한 것으로 판단되어, 균사형성 고등균류의 균사체 배양 시 균체량 증가에 가장 중요한 요인 중의 하나인 생산균주의 배양형태적 특성에 대해 집중적으로 조사하였다. 균주개량 실험을 통해 고생산성 균주로 최종 결정된 AR147 균주를 이용해서 다양한 배양조건에서 발효조 배양을 수행한 결과, 최종 생산발효조로의 접종원이 고농도의 균사모양인 경우에 생산균주의 배양형태가 매우 작은 compact한 펠렛 모양(대부분 직경 0.5 mm 이하)을 유지하는, 이상적인 균사체 액상배양 공정이 이루어지는 것으로 확인되었다. 즉 생산 발효조배양에서 직경 0.5 mm 이하의 compact한 펠렛 모양의 배양형태가 유도되었을 경우, lag phase 시간의 획기적 감소와 1.5배 이상의 높은 세포비성장속도로 인해, 최종 균사체생산성이 다른 배양형태를 유도한 경우에 비해 약 3.3배 더 높은 주목할 만한 배양결과를 얻을 수 있었다. 이로부터 균사 형성 Phellinus linteus의 산업용 발효조 배양 시, 각 배양단계에서의 생산균체의 배양형태가 최종 균체생산성, 궁극적으로는 최종 단백다당체의 생산성에 심각한 영향을 미친다는 것을 알 수 있었다.
본 연구의 목적은 고압나트륨등 광원(HPS)을 조사하여 파프리카의 동적생장과 기관별 건물분배율 및 광이용효율에 미치는 효과를 구명하고자 수행하였다. 파프리카 육묘는 2010년 9월 29일에 $m^2$당 3.75주를 정식하여 2010년 12월 14일부터 HPS 광원을 실험종료일까지 하루 16시간 조사하였다. HPS 처리는 엽수를 증가시켰으나, 절간수와 엽면적에는 미비한 영향을 미쳤다. HPS 처리구의 초장은 대조구에 비해 짧았으나, 줄기당 착과수의 증가를 나타냈다. 줄기와 과실 및 총건물중은 HPS 처리구가 대조구보다 각각 28.5%, 97.1%, 67.8%를 증가시켰다. 총 건물중의 증가율 대비 엽과 줄기 생장율을 비율로 나타낸 각 기관의 건물분배율은 생육초기에 45-47%로 동일하다가 과실의 생장이 시작되는 시점에서 급격히 감소하였다. 영양생장기관으로의 건물분배율은 대조구에서 HPS 처리구보다 4% 높았다. 과실로의 평균 건물 분배율을 HPS 처리구에서 대조구에 비해 14.2% 증가하였다. 동적생장량은 지수선형함수의 최대상대생장율, 최대 절대생장율 및 손실일수로 잘 묘사할 수 있었다. 대조구에 비해 처리구의 엽의 최대절대생장율은 18.6%, 줄기는 74.7%, 과실은 143.5%가 증가하는 것으로 추정되었다. 총 건물중에 대한 광이용효율(LUE)은 HPS 처리구에서 $4.90g{\cdot}MJ^{-1}$로 대조구의 $3.84g{\cdot}MJ^{-1}$ 높았으며, 영양생장기관의 LUE는 HPS 처리구가 $1.56g{\cdot}MJ^{-1}$로 대조구의 $1.61g{\cdot}MJ^{-1}$보다 약간 낮았으며, 과실 생산에 대한 LUE는 처리구가 $3.34g{\cdot}MJ^{-1}$로 대조구 $2.23g{\cdot}MJ^{-1}$보다 49.8% 증가하였다. 처리간 총 건물중의 LUE의 차이는 HPS 처리구의 과실생산에 대한 LUE가 높았기 때문에 발생되었다.
Kim, Ji-Yoon;Choi, Dongho;Kim, Joohwan;Kim, Young-Myeong;Lim, Hyunyoung;Sung, Jeong Min;Lee, Min Kyu;Choung, Yoo Jin;Chang, Ji Hee;Jeong, Mi Ae
BMB Reports
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제53권3호
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pp.148-153
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2020
Erythropoietin and iron have individually shown beneficial effects on early-phase liver regeneration following partial hepatectomy (PHx); however, there are limited data on the combined effect on late-phase liver regeneration after PHx. Here we examined combined effects of recombinant human erythropoietin (rhEPO, 3,000 IU/kg) and iron isomaltoside (IIM, 40 mg/kg) on late-phase liver regeneration following PHx and investigated the possible underlying mechanism. Rats administrated with rhEPO showed significantly higher liver mass restoration, interleukin-6 (IL-6, a hepatocyte mitogen) levels, and Ki-67-positive hepatocytes on day 7 after PHx than saline-treated controls. These beneficial effects were further enhanced on days 7 and 14 by co-treatment with IIM. This combination also significantly improved liver function indices, such as increased albumin production and decreased bilirubin levels, but did not alter serum levels of toxic parameters, such as aspartate transaminase and alanine transaminase. This study demonstrates that the combination of rhEPO and IIM synergistically improves late-phase liver regeneration and function after PHx, probably by promoting IL-6-mediated hepatocyte proliferation without adverse effects. Thus, this combination treatment can be a potential therapeutic strategy for patients undergoing resection for hepatic malignancies.
Kim, Pyoung-Il;Ryu, Jae-Won;Kim, Young-Hwan;Chi, Youn-Tae
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제20권1호
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pp.138-145
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2010
A bacterial strain isolated from soil for its potential to control the anthracnose disease caused by Colletotrichum gloeosporioides was identified as a Bacillus subtilis. Bacillus subtilis CMB32 produced antifungal agents on M9 broth at $30^{\circ}C$. Biosurfactant lipopeptides produced by Bacillus subtilis CMB32 were precipitated by adjusting to pH 2 and extracting using chloroform/methanol, and then were purified using column chromatography and reverse-phase HPLC. The molecular masses of the lipopeptides were estimated by MALDI-TOF mass spectrometry as (a) 1,080, (b) 1,486, and (c) 1,044 Da, respectively. They had cyclic structures and amino acid compositions of (a) Pro, Asx, Ser, Tyr, Glx, (b) Glx, Tyr, Thr, Ala, Pro, lie, and (c) Glx, Leu, Val, Asx, respectively. Further analysis revealed that Bacillus subtilis CMB32 produced three antifungal lipopeptides: (a) iturin A, (b) fengycin, and (c) surfactin A.
Human Glucagon like peptide-1 (GLP-1) is an incretin hormone that promotes secretion of insulin. In order to eliminate the formation of the soluble aggregate, Ala19 in GLP-1 was substituted with Thr, resulting in a GLP-1 mutant GLP-1A19T. The gene synthesis of GLP-1A19T and the fusion of 6-lysine tagged ubiquitin gene were accomplished by using the overlap extension polymerase chain reaction. The ubiquitin fused GLP-1A19T (K6UbGLP-1A19T) is expressed as form of inclusion body with little formation of the soluble aggregation in recombinant E. coli. In order to produce K6UbGLP-1A19T in large amounts, fed-batch fermentation was carried out in a pH-stat feeding strategy. Maximum dry cell weight of 87.7 g/L and 20.4% of specific K6UbGLP-1A19T content were obtained. Solid-phase refolding using a cation exchanger was carried out to renature K6UbGLP-1A19T. The refolded K6UbGLP-1A19T aggregated little and was released GLP-1A19T by on-column cleavage with ubiquitin-specific protease-1. The molecular mass of GLP-1A19T showed an accurate agreement with its theoretical molecular mass.
Chlortetracycline (CTC) is one of the most important compounds in antibiotic production, and its distribution has been widely investigated due to health and ecological concerns. This study presents systematic approach to optimize the high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry for analyzing CTC in a multiple reaction monitoring mode ($479{\rightarrow}462m/z$). One-factor-at-a-time (OFAT) test with response surface analysis (RSA) was used as optimization strategy. In OFAT tests, the fragmentor voltage, collision energy, and ratio of acetonitrile in the mobile phase were selected as major factors for RSA. The experimental conditions were determined using a composite in cube design (CCD) to maximize the peak area. As a result, the partial cubic model precisely predicted the peak area response with high statistical significance. In the model, the (solvent composition) and (collision $energy^2$) terms were statistically significant at the 0.1 ${\alpha}$-level, while the two-way interactions of the independent variables were negligible. By analyzing the model equation, the optimum conditions were derived as 114.9 V, 15.7 eV, and 70.9% for the fragmentor voltage, collision energy, and solvent composition, respectively. The RSA, coupled with the CCD, offered a comprehensive understanding of the peak area that responds to changes in experimental conditions.
막분리기술은 다른 분리기술에 비해 에너지절약형이며 또 비교적 대량으로 분리를 수행할 수 있다는 장점이 있어 근래 산업 현장에서 많이 이용되고 있다. 특히 mass separating agent를 사용하지 않고, 상변화를 수반하지 않는 순조건에서 실시할 수 있다는 특성으로 인하여 생물물질의 생산 및 회수에 있어서 막분리의 사용이 크게 증가하고 있다. 근래에 들어 막의 재지라 분리 module의 개발 등에 의해 fouling, 농도분극현상 등, 막분리의 근본적 문제점들이 많이 해결되고 있을 뿐 아니라, 기존의 조분리의 영역을 넘어서 정밀분리에로의 발전이 가시화되고 있다. 또한 생물분리기술의 추세인 복합분리와 동시분리의 측면에 있어서도 막분리의 응용성은 우수하여, 향후 생물공학 제품의 생산에 있어 막분리 기술의 역할은 막대할 것으로 사료된다.
Drying process is involved in the production of various products including food, textiles, paper, pharmaceuticals, and batteries. Phase change of liquid to vapor generally requires enormous thermal energy, so in order to save energy, it is advantageous to develop an appropriate drier and use it under appropriate operating conditions, depending on the characteristics of materials. However, due to the complex, multiscale heat and mass transfer occurring during drying processes, predictions of appropriate drying conditions before actual operation are not easily achieved, leading to challenges in designing driers. Here, we developed a lab-scale experimental setup to evaluate the performance of band dries. The experimental setup was used to measure the moisture content and temperature change in the materials being dried in a belt dryer. Experimental results obtained using our lab-scale setup allow us to predict the performance of a full-scale band drier, thus suggesting a practical framework for predicting the drying process of various materials and developing band driers.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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