본 연구는 Cobas TaqMan MTB 검사(CTM test, Roche Diagnostics, Basel, Switzerland)와 항산균 도말염색검사의 연관성을 확인하고 그에 따른 반정량적 판정기준을 확립하고자 하였다. 2015년 1월부터 2015년 12월까지 삼성서울병원 진단검사의학과에 의뢰된 8,389개의 검체에 대해 결핵균 도말 검사, 배양 검사 및 CTM 검사를 동시에 실시하였으며, 그 결과를 분석하여 AFB 염색과주기의 연관성을 후향적으로 분석하였다. CTM 검사의 임계 값(Ct)값으로, 결핵균 검출방법의 반정량적 판정기준을 설정 하였다. CTM 검사의 135개의 양성 표본에 대한 Ct값은 항산균 도말염색과 반비례적 상관관계가 있었다(rs=-0.545, P<0.01). CTM 검사와 항산균 염색 등급의 음의 상관관계가 입증되었으며, 임상 기준에 이러한 기준을 적용하여 임상적 의의를 검증하였다. 이 연구의 반정량적 기준은 병원에서 활동성 결핵 및 감염을 일으킬 수 있는 환자의 빠른 진단의 판단에 도움이 될 것으로 사료된다.
Recently, the isolation rate of nontuberculous mycobacteria (NTM) in clinical laboratories and the incidence of NTM infections are on the increase in Korea, but there have been only a few studies that reveal the general aspect of NTM isolation or species distribution. Therefore, this study was performed to examine the species identification by PCR-restriction fragment length polymorphism analysis (PRA, PCR-RFLP), and the clinical significance of mycobacterial cultures. PRA was used during the novel region of the rpoB gene and was developed for rapid and precise identification of mycobacteria to the species level. From January 2012 to April 2012, we examined pre-identified nontuberculous mycobacteria (60 species in 3 hospital of Busan-Kyeongnam area). We confirmed 4 (6.6%) Mycobacterium tuberculosis (MTB) and 56 (93.4%) NTM from 60 pre-identified NTM species by multiplex PCR (MolecuTech $MTB-ID^R$ V3, YD Diagnostics, Korea) and PRA (Myco-ID, YD Diagnostics, Korea). The distribution of 56 NTM species were M. intracellulare type I 15 (26.7%), M. avium 14 (25%), M. abscessus 11 (19.5%), M. kansasii type I 3 (5.4%), M. pulveris 2 (3.6%), M. intracellulare type, M. chelonae, M. kansasii type V, M. gallinarum, M. wolinskyi. Respectively, 1 (1.8%) and 6 (10.7%) species were not identified.
The incidence of tuberculosis (TB) in the Republic of Korea remains high when compared to the incidence in other Organization for Economic Cooperation and Development (OECD) countries. The prompt diagnosis and effective treatment of latent TB infection (LTBI) are very important in terms of controlling the burden of TB. The tuberculin skin test (TST) has long been the "gold standard" assay for the diagnosis of LTBI. However, it can show false positive results due to Bacille Calmette-$Gu{\acute{e}}rin$ (BCG) vaccination and infection with many environmental nontuberculous mycobacteria (NTM). The interferon gamma release assay (IGRA) using Mycobacterium tuberculosis (MTB)-specific antigens, was developed for the detection of LTBI. The QuantiFERON-TB Gold In-Tube assay is one of the most commonly used forms of the IGRA. In order to compare the diagnostic efficacy of the TST and IGRA in relation to LTBI among BCG-vaccinated healthy donors, whole blood samples were collected from 51 participants, and the results of the TST and IGRA were compared. Of the 51 cases, 18 cases (35.3%) were positive and 33 cases (64.7%) were negative when using the TST, while four cases (7.8%) were positive and 47 cases (92.2%) negative when using the IGRA. There was no correlation between the size of the induration in the TST and the $IFN-{\gamma}$ protein level. In conclusion, the TST showed higher cross-reactivity among the BCG-vaccinated healthy participants, therefore, the IGRA might be the most suitable assay for the rapid screening of LTBI in BCG-vaccinated healthy population, or for TB contact investigation.
연구 배경 : 결핵의 대부분을 차지하는 폐결핵 진단에 객담, 기관지 세척액, 흉수액을 이용한 TB-PCR 검사의 유용성에 대해서는 여러 연구가 있었으나 폐 이외의 결핵 진단을 위한 신선 생검 조직 검체에서의 TB-PCR법 연구는 아직 미흡하다. 이에 저자들은 자동분석법인 COBAS AMPLICOR MTB PCR assay (Roche Molecular System)를 이용하여 신선 생검 조직 검체로 TB-PCR법의 유용성을 알아보았다. 방법 및 대상 : 2004년 10월부터 2005년 12월까지 가톨릭대학교 대전성모병원 병리과와 진단검사의학과에 결핵의진 하에 조직검사와 신선조직을 이용한 항산균 도말검사, 배양검사, TB-PCR 검사가 공히 의뢰된 환자 42예를 대상으로 하였다. 결 과 : 신선 생검 조직 42예를 대상으로 실시한 결과, 임상소견에서 결핵으로 진단된 경우는 18예 이었으며, 그 중 림프절 12예와 폐 조직 2예, 충수 조직 1예, 총 16예(88.9%)에서 PCR 양성을 보였고, 민감도와 특이도, 양성예측도, 음성 예측도는 88.9%, 100%, 100%와 92.3%로 나타났다. 조직학적으로 육아종 소견과 건락성 괴사의 소견 보인 18예(100%)는 모두 결핵으로 진단되었고 그 중 16예(88.9%)에서 PCR 양성을 보였다. 결 론 : 신선 생검 조직 검체를 이용한 TB-PCR 자동분석기의 결과는 임상소견 및 현미경적 소견과 비교 분석 시 민감도와 특이도가 높은 유용한 검사라고 생각되었다.
석탄산으로 사멸한 균으로 감작시켜 얻은 토끼 항혈청으로 주요 병원성 mycobacteria의 세포 표면항원간의 항원적 상관관계를 효소결합면역분석법으로 관찰하였다. M, avium-intracellulare(MAI) 항혈청을 이용한 동종 및 이종반응 분석결과를 보면 동종내 항원적 상관관계는 매우 가깝고 M. scrofulaceum(MG)을 포함하면 MAIS군내 종간 항원적 관계도 가까웠다. MAI 혈청이 M. chelonei(MC), fortuitum(MF), nonchromogenicum(MNC), terrae(MTR) 및 triviale(MTV)와는 반응하지 않거나 미약하게 반응하지만 M. kansasii(MK)와 결핵균과는 강하게 반응했다. 그러나 후자의 두균종으로 흡수해도 MAI 혈청의 동종반응은 감소되지 않았다. M. avium(MA) (K40004) 항혈청은 M. intracellulare(MI) 균주를 제외한 다른 균들과는 미약하게 반응했고 항원적 상관관계가 가까운 MI와 MG로 흡수하면 동종반응의 50~89%가 감소했다. MI 혈청의 종내반응이 종간반응보다 물론 더 강하지만 공유항원량의 크기에 따라 달랐다. MI균주 중 N-260D, N-260R, N-260T 및 K41014간의 항원적 상관관계가 N-242D, N257T, N281D 및 N275T와의 관계보다 더 가깝게 나타났다. MNC 항혈청은 MC와 MTV를 제외하고는 강한 교차반응을 보여주었다. 종내 항원적 상관관계 다음으로는 MTR와 MG(K30003)과 가까웠다. NC-3 혈청은 MA, MC 및 MF와 상당한 반응력을 나타내지만 NC-11은 그렇지 않았다. MTR 항혈청은 MI와 강하게 반응하지만 MI로 흡수한다고 해서 그들의 동종반응이 감소하지 않는 것으로 보아 MTR 표면에 공유항원이 많지 않음을 보여주었다. MTR과 MNC, MC 및 MF 사이에도 상당량의 공유항원이 있음이 알려졌다. MTR 가운데 T-8 혈청과는 달리 T-13 항혈청은 MA, MG, MK 및 MTB와 강하게 교차반응하였다. 이상의 실험으로 밝혀진 mycobacteria의 항원적 상관관계가 각종 생물학적 및 생화학적 방법으로 갈라놓은 분류군과 잘 일치하고 있었다.
Objectives: To identify the positive rate of and the risk factors associated with latent tuberculosis infection(LTBI) in mine workers, the objectives of the present study evaluated those among former mine workers. Methods: Between January 2015 and May 2017, former male mine workers who had been subjects for epidemiology research for work-related chronic obstructive pulmonary disease(COPD) and had received QuantiFERON-$TB^{(R)}$ Gold In-Tube(QFT-GIT) from the Institute of Occupation and Environment(IOE) under Korea Workers' Compensation and Welfare Service(KCOMWEL) were selected as the study subjects. To identify significant variables for increased risk of LTBI, logistic regression analysis was performed. Results: A total of 736 male former mine workers were selected as study subjects. The positive rate of LTBI among subjects was 69.2%(509/736). The current smoking[odds ratio(OR), 2.3; 95% confidence interval(CI), 1.1-4.9], COPD(OR, 1.4; 95% CI, 0.9-2.3), department loading(OR, 1.8; 95% CI, 0.9-3.4) and mining(OR, 1.5; 95% CI, 0.9-2.5), and working duration of over 20(OR, 1.6; 95% CI, 0.9-3.1) and over 30 years(OR, 2.2; 95% CI, 0.9-4.9) were associated with increased risk of LTBI. The interferon-gamma(IFN-${\gamma}$) level after stimulation with Mycobacterium tuberculosis(MTB)-specific antigens showed a significantly negative correlation with age(r=-0.126). Conclusions: The present study determined that the high positive rate of LTBI among mine workers was associated with not only the host factors but also the occupational exposure to mine dust.
연구배경: 폐결핵의 진단은 결핵균이 배양되면 확진이 되나, 실제 임상에서는 세균학적 진단이 양성으로 나타나지 않는 폐결핵 환자가 다수 존재하므로 활동성 위한 빠르고 확실한 진단방법이 임상에서 절실히 요구되고 있다, $\beta$-glucuronidase(이하 GLU)와 $\beta$-N-acetyl glucosaminidase(이하 NAG)는 폐내 탐식세포인 대식세포(macrophage)의 리소솜(lysosome) 효소들로서, 이산화규소가 폐내로 흡입되어 폐포내 대식세포에 의해서 탐식되고 이어서 대식세포가 파괴된 다고 알려진 규폐증에서 NAG의 혈중농도가 증가한다는 보고가 있었다. 또한 폐결핵에서도 세포내에서 증식된 결핵균을 충분히 사멸시키지 못하여 활동성 결핵 병변이 유발된 경우 파괴된 대식세포로부터 증식된 결핵균과 함께 GLU나 NAG도 유리될 것으로 추정된다. 본 연구는 활동성 폐결핵환자의 혈중 리소솜 효소 활성도가 비활동성 결핵환자나 정상대조군보다 높은지 여부와 혈중내 리소솜 효소의 측정이 활동성 폐결핵 진단법으로 이용될 수 있는지의 여부에 대해 알아보고자 하였다. 방법: 결핵균이 검출되어 활동성 폐결핵으로 진단된 환자군과 비활동성 폐결핵군 및 건강대조군에서 GLU와 NAG의 혈장내 농도 차이를 비교하였으며 활동성 폐결핵환자군에서는 투약에 따른 리소솜효소의 변동이 있는지를 관찰하기 위하여 투약후 2개월 뒤에 상기 효소들의 활성치를 다시 측정하여 진단시의 값과 비교하였다. 두가지 효소 모두 4-methylumbelliferyl substrates를 사용한 형광측정법으로 측정하였다. 결과: 1) 활동성 폐결핵군과 비활동정 폐결핵군 및 건강대조군 사이의 혈중 GLU와 NAG의 농도차이: 활동성 폐결핵군의 GLU 및 NAG의 혈중 농도는 $21.52{\pm}3.01$ 및 $325.4{\pm}23.37nmol$ product/h/ml of plasma(이하 단위표기생략)로서 비활동정 폐결핵군 $24.87{\pm}3.78$, $362.36{\pm}33.92$와 건강대조군 $25.45{\pm}4.05$, $324.44{\pm}28.66$ 사이에 차이가 없었다. 2) 활동성 폐결핵군에서 항결핵제 치료 전후의 혈중 NAG와 GLU의 농도차이: 활동성 폐결핵 치료시작 2개월후 GLU의 혈중치는 $41.18{\pm}5.23$으로서 치료전에 비해 통계적으로 유의하게 증가되었고(p값<0.05) NAG의 혈중농도는 $359.2{\pm}39.53$으로서 치료전과 차이가 없었다. 결론: 활동성 폐결핵환자의 혈장내 GLU 및 NAG의 농도는 비활동성 결핵군이나 건강대조군과 차이가 없었으므로 상기 효소들의 측정은 활동성 폐결핵 진단의 방법으로서 유용하지 않는 것으로 사료되었고 병 경과에 따른 혈중 GLU치의 증가에 대하여는 연구가 필요할 것으로 사료되었다.
Background: Recent studies have shown that the nontuberculosis mycobacterium (NTM) recovery rate in clinical cultures has increased within Korea. However, another study conducted by a secondary hospital within Daegu reported different results. Therefore, the purpose of this study is to understand and evaluate the microbiological distribution and clinical features of NTM in Daegu. Methods: A retrospective study was conducted on 11,672 respiratory specimens undergoing acid fast bacilli (AFB) culture from 6,685 subjects who visited Yeungnam University Respiratory Center from January 2012 to December 2013. Results: Of the 11,672 specimens undergoing AFB culture, 1,310 specimens (11.2%) showed positive results. Of these specimens, NTM was recovered from 587 specimens, showing a recovery rate of 44.8%. Identification test for NTM was performed on 191 subjects; the results were as follows: M. avium-intracellulare complex (MAC) 123 (64.4%), M. abscessus 20 (10.5%), M. kansasii 12 (6.3%), and 33 other NTM germ strains. Of the 382 subjects with NTM, 167 were diagnosed with pulmonary NTM disease (43.7%), however virulence differed depending on NTM strain. Multivariate analysis showed that nodular bronchiectasis, the nodules, and finding consistent with cavity under imaging study were statistically significant for triggering pulmonary NTM disease. AFB culture showing MAC and M. abscessus was statistically significant as well. Positive predictive value for NTM polymerase chain reaction (NTM-PCR) was 88.6%. Conclusion: Results for NTM recovery rate within the Daegu area were similar to those for the Seoul metropolitan area. We can assume that NTM infection is increasing in our community, therefore AFB-positive subjects (1) should undergo NTM-PCR, (2) should have their culture results checked for differentiation of mycobacterium tuberculosis complex (MTB) from NTM, and (3) undergo NTM identification test to confirm its type. Administration of treatment with the above results should be helpful in improving the patients' prognosis.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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