cellulose acetate 전기영동법으로 한국산 개구리목의 동물 6종에서 LDH 와 MDH isozyme을 조사하였다. 개구리목의 MDH 와 LDH isozyme은 종에 따른 특징을 잘 나타내고 있었으며 포유류나 조류와는 다름을 알 수 있었다. 참개구리와 금개구리에서는 LDH 나 MDH 모두 두개의 isozyme으로 구성되어 있었고, 이두 isozyme의 pattern 역시 거의 같다고 볼 수 있었다. 산개구리 전뇌의 LDH isozyme 역시 두개의 isozyme만을 보였으나 그 pattern은 참개구리나 금개구리와 근본적으로 달랐다. 두꺼비와 무당개구리는 다섯개의 LDH isozyme을 가지고 있으나 그 pattern은 전혀 달랐다. 한편 옴개구리에서는 세개의 LDH isozyme을 볼 수 있었다. 모든 시험동물에서 두개의 MDH isozyme을 발견 할 수 있었는데 참개구리의 후엽과 소뇌 및 연수혼합 물에서는 단 하나의 MDH isozyme만이 검출되었다.
Cellulose acetate 전기영동법으로 부족류의 MDH isozyme 은 1$\\sim$2개의 band로 구성되어 있음을 알았다. 이들 부족류의 MDH isozyme은 종에 따라 특징적이므로 생화학적인 다양성의 한가지 증거라 할 수 있다. 그러나 MDH isozyme pattern은 계통상의 유연 관계를 뚜렸하게 나타내고 있지는 않다. 몇 가지 실험하여본 종에 있어서 NAD-MDH 다형현상이 나타나지 않았다.
온도, pH및 염도 stress가 굴(Crassostrea gigas)의 malate dehydrogenase isozyme에 미치는 영향을 전기영동법으로 분석하였다. 대조군의 MDH isozyme은 2개의 band가 양극 쪽으로 이동되어 분리되었다. 각 실험 온도와 pH를 12시간 노출시킨 실험군에서는 1개의 band만 양극 쪽에서 분리되었고, 24시간과 48시간 노출한 실험군에서는 2개의 band가 모두 양극 쪽에서 분리되었다. 염분 농도가 5ppt 와 3ppt에서 12시간 노출시켰을 때 각각 2개의 band가, 10ppt와 40ppt에서는 각각 3개의 band가 분리되었고, 24시간과 48시간 노출 실험군에서는 2개의 band가 양극 쪽에서 분리되었다. 모든 isozyme pattern에서 각 band의 활성도는 실험 조건에 따라 각각의 특이성이 나타났다. 결과적으로 MDH isozyme의 변화는 굴이 환경 stress에 대한 생화학적 반응의 결과로 간주된다.
한국에서 서식하는 뱀과, 살모사과, 및 북살모사과에 속하는 몇종의 파충류에서 각 장기별로 MDH 및 LDH isozyme을 조사하였던 바 MDH는 2개의 isozyme으로 구성되어 있는 점이 동일하였다. 그러나 대륙유혈목이의 MDH isozyme은 이동속도가 빠른 점이 다른 종과 다르다. 뱀과, 살모사과 및 북살모사과의 구성원 각 종에서 4개의 LDH isozyme을 확인할 수 있었다. 근과 간조직의 LDH isozyme은 근본적으로 같은 pattern이었고 $LDH_4$가 없는 것이 뱀과, 살모사과 및 북살모사과의 특징이었다. 한편 심장에서는 2개의 LDH isozyme이 발견되는데 근조직과는 반대되는 pattern 이었다. 위 homogenate에서 나타나는 LDH isozyme은 심장의 pattern과 동일하다고 볼수 있는데 살모사과와 북살모사과에서는 4개의 isozyme이 나타나는 점이 독특하였다. 따라서 실험 동물의 MDH 및 LDH isozyme pattern에서 의미있는 다양성을 발견할 수 없었다.
Cellulose acetate strip 전기영동법으로 한국산 개구리목 동물 6종에서 각 장기별로 LDH 와 MDH isozyme을 조사하였다. LDH isozyme은 포유류와 조류의 그것과는 달리 뇌와 골격근의 isozyme형이 유사한 것이 특징이다. 과에 따른 LDH isozyme의 특징은, 무당개구리는 5개의 isozyme이 모두 나타났으며 두꺼비과의 물두꺼비는 5개의 isozyme이 나타났으나 무당개구리에 비하여 이동속도가 빠르고, isozyme사이의 간격이 조밀하다. 개구리과의 개구리, 금개구리, 옴개구리 및 산개구리에서는 2개 내지 4개의 isozyme만이 나타났다. 개구리목의 LDH 와 MDH isozyme은 종에 따른 특징을 잘 나타내고 있으며, 과 사이의 특징도 아울러 살필 수 있다.
개구리 2種 (Rana nigromaculata와 Rana plancyi chosenica)과 도룡뇽 (Hynobius leechii)의 胚發生에 EK른 lactate dehydrogenase (LDH)와 malate dehydrogenase (MDH)의 isozyme 組成變化를 polyacrylamide 電氣泳動法으로 조사 분석하고 이를 成體의 몇 器官과 비교하였다. R. nigromaculata에서 LDH의 B subunit의 合成을 지배하는 유전자는 heterozygous이고 H. leechii에서는 A subunit의 合成을 지배하는 유전자가 heterozygousfk고 추정된다. 위의 3種의 兩棲類\ulcorner 胚에서 發生初期에는 LDH-1 (심장형)의 活性이 높으나 發生이 진행됨에 따라 LDH-5 (근육형)의 活性도 점차 증가된다. MDH의 경우 發生初期부터 MDH-m과 MDH-s가 존재하고 발생 全段階를 통하여 그 組成에는 변화가 없으나 MDH-m의 活性이 점차 증가하는 경향을 보인다.
감자전분젤을 매개로 한 수평식 전기영동장치를 이용하여 은행나무(Ginkgo biloba L.)의 megagametophyte로부터 15개 동위효소의 변이가 분석되었다. 분석된 효소 가운데서 ADH, G6PD, IDH, MPI, UGPP의 5개 효소에서는 변이가 나타나지 않았으며, 나머지 10개 효소의 11개 동위효소 구역(ACON-A, FST-B, GDH-A, GOT-B, MDH-B, MDH-C, MNR-A, PGI-B, PGM-A, 6PGD-B, SKDH-B)에서 다형성이 관찰되었다. 이중 MDH-B를 제외한 모든 구역에서 관찰된 동위효소 변이들이 1 : 1의 독립적 분리비를 보임으로써, 이들이 단일 유전자좌에 의해 조절되는 공우성 대립유전자임을 추정할 수 있었다. 한편, 동위효소 유전자좌의 3가지 조합(ACON-A : MDH-B, GOT-B : PGI-B, MNR-A : SKDH-B)에서 약한 연관관계가 관찰되었으며, 이들의 재조합 비율은 0.38-0.40로 계산되었다 (p<0.05).
연어류의 종간교배 실험과 LDH, MDH, IDH, $\alpha$GODH, ME 등 다섯가지 isozyme에 대한 genetic marker로서의 활용 가능성을 알아보고자 1차적으로 연어, 산천어 및 무지개송어를 이용하여 종간교배를 실시하였고 이들 세종의 isozyme pattern을 비교하였다. 교배실험은 종간교배, 및 allotriploid 구간 등 12구간으로 나누어 실시하였으며 연어 암컷과 산천어 수컷의 교배결과가 초기성장 단계적에서 가장 우수하게 나타났고이들의 allotriploid도 부활율이 28.1%로 가장 우수하였다. Genetic identification을 위한 isozyme loci 분석결과 연어와 산천어는 대부분의 loci에서 거의 찾아볼 수 없었고 무지개송어는 MDH-B와 IDH에서 다형현상을 확인할 수 있었다. 특히 MDH-B loci는 b 유전자의 출현 빈도에서 세 종간의 식별이 가능하였으며, IDH pattern을 산천어와 무지개송어의 비교에 유효한 것으로 나타났다. 이들 두 loci는 hybrid의 genotype 분석시 유용한 marker로 활용할 수 있는 가능성을 보였고, 앞으로의 어류 육종에 좋은 기초 자료로 이용될 것으로 사료된다.
본 연구는 고추 잎 절편으로부터 유도한 callus로부터 체세포 배형성에 따른 peroxidase, esterase 및 MDH의 활성 및 전기영동적 변화를 비교 분석하여 세포분화에 따른 생리, 생화학적인 변화를 알아보고자 하였다. 고추 잎 절편에서 유도된 callus는 호르몬이 첨가 되지 않은 MS 액체배지에서 체세포배를 유도하였을 때 배양 7일째 peroxidase, esterase, MDH의 효소 활성이 가장 높게 나타났으며 특히 peroxidase의 활성도는 배양 12일째 세포내에 비해 배로 방출된 효소의 활성이 4배 정도 높았다. 이와같이 페세포 배형성에 따른 isozyme 의 활성도 및 전기영동적 양상의 배형성과 재분화 과정을 연구하는데 유용할 것으로 사료된다.
Isozyme comparisons of mycelial extracts from Pleurotus ostreatus were undertaken using isoelectric focusing. Enzyme isozyme patterns were Used to describe the extent of geographical diversity and degree of intraspecific variation in these extracts. A total of 77 bands were resolved from six different enzymes. Cluster analyses were performed using the zymograms for esterase (EST), glucose phosphate isomerase (GPI), leucine aminopeptidase (LAP), malate dehydrogenase(MDH), peroxidase (POX), and phosphoglucomutase (pGM). EST gave multiple banding patterns, while less variability was observed for GPI, MDH, and PGM. Cluster analyses demonstrated that strains of P. ostreatus from geographically different origins are genetically divergent, supporting the idea that there is little or no gene flow between these geographically distant population groups.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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