연어류의 종간교배 실험과 LDH, MDH, IDH, $\alpha$GODH, ME 등 다섯가지 isozyme에 대한 genetic marker로서의 활용 가능성을 알아보고자 1차적으로 연어, 산천어 및 무지개송어를 이용하여 종간교배를 실시하였고 이들 세종의 isozyme pattern을 비교하였다. 교배실험은 종간교배, 및 allotriploid 구간 등 12구간으로 나누어 실시하였으며 연어 암컷과 산천어 수컷의 교배결과가 초기성장 단계적에서 가장 우수하게 나타났고이들의 allotriploid도 부활율이 28.1%로 가장 우수하였다. Genetic identification을 위한 isozyme loci 분석결과 연어와 산천어는 대부분의 loci에서 거의 찾아볼 수 없었고 무지개송어는 MDH-B와 IDH에서 다형현상을 확인할 수 있었다. 특히 MDH-B loci는 b 유전자의 출현 빈도에서 세 종간의 식별이 가능하였으며, IDH pattern을 산천어와 무지개송어의 비교에 유효한 것으로 나타났다. 이들 두 loci는 hybrid의 genotype 분석시 유용한 marker로 활용할 수 있는 가능성을 보였고, 앞으로의 어류 육종에 좋은 기초 자료로 이용될 것으로 사료된다.
Two allelotypes of sMDH variation, namely A and B type, are known in the dark chub, Zacco temmincki. We attempted to clarify their probable functional enzymatic difEerence with temperature change. Two types of sMDH were purified separately by successive chromatography on DEAE-cellulose and blue 2-Sepharose amEnity columns, and their ensymatic activities to temperature change were measured. Q10 of Vmax and Vmax/Km were significantly different between two types, i.e. A type being higher in Q10 values than B type. Based on the result it is assumed that A type may be more sensitive to temperature change than B type.
만손열두조충의 스파르가눔(흰쥐에서 적출한 r-스파르가눔, 뱀에서 적출한 s-스파르가눔)과 성충을 재료로 하여 젖산탈수소효소와 말산탈수소효소의 조직내 분포 및 동위효소의 특징을 효소조직화학적 방법과 전기영동뎁으로 조사하였다. LDH와 WH는 외피하근층에서 강한 활성이 나타났으며, 실질조직(parenchyma)에서는 약하게 나타났다. 그러나 nH는 스파르가눔의 외피조직 에서도 활성이 나타났으나 성충의 외피조직에는 나타나지 않았다. LDH의 동위효소 유형은 5-스파르가눔, s-스파르가눔과 성충에서 각각 2개, 4개, 2개가 분리되었고, 45 kDa의 분회이 공통적으로 주분획이었으며 sinH의 동위효소는 5-스파르가눔, r-스파르가눔과 성충에서 각각 2개, 3개 4개의 분획이 분리되었고, IEF에 의해 성충에 존재하는 4개의 tmH 동위효소 분획의 등전점(Pl)은 각각 6.0, 6.5, 6.7, 7.1이었으며, 이 중 6.0이 주분획이었다. 또 최적 pH는 7이나 활성 범위가 pH 6 ~8이었고. 최적온도는 $40^{\circ}C$였으며, $50^{\circ}C$ 이상에서는 활성이 급격히 감소하였다 mH의 최적 활성도는 s-스파르가눔, r-스파르가눔과 성충에서 각각 19.4, 24.5, 108.0이었다. 위의 결과로 보아, 외피하근층으로 흡수된 양분은 충체 중앙으로 이동하면서 산화분해되며 유충에 비해 성충에서 물질 대사가 활발함을 알 수 있고, 또한 만손열두조충의 스파르가눔과 성충이 숙주와 기생 장소를 달리하지만 기생 환경에 따라 젖산탈수소효소와 말산탈수소효소의 동위효소들이 활성을 달리하므로써 숙주 환경에 적응한다는 사실을 알 수 있다.
우리나라 고산 지역에 제한적으로 자생하는 희귀 유전자원인 눈향나무(Juniperus chinensis var. sargentii HENRY)의 설악산 및 한라산 집단을 대상으로 동위효소 분석에 의한 유전적 다양성을 조사하였다. 총 7개 동위효소에서 11개의 재현성 있는 유전자좌가 분석되었으며, 이중 Mdh-1, Mdh-2, Mdh-3 및 Pig-1 유전자좌를 제외한 7개 유전자좌에서 다형성이 관찰되었다. 분석된 두 집단의 유전변이량은 각각 A=2.2, $A_e=1.61,\;P_{95}=54.5,\;H_{o}=0.179,\;H_e=0.287$(설악산 집단)과 A=2.1, $A_e=1.48,\;P_{95}=63.6,\;H_{o}=0.270,\;H_e=0.250$(한라산 집단)으로 국내 타 침엽수종으로부터 동위효소 분석을 통해 추정된 유전변이량에 비해 다소 높은 경향을 보였으며, 분석 집단간 유전적 분화 정도는 그리 높지 않은 것으로 나타났다($F_{ST}=0.039$). 설악산 집단의 경우 이형접합도의 관찰치가 기대치에 비해 매우 낮았으며 근교계수 값이 매우 높게 나타나(F=0.376), 전반적으로 근친교배 또는 유전적 부동의 영향을 많이 받고 있는 것으로 추정되었다. 이는 설악산 눈향나무 집단의 분포 면적이나 개체수가 한라산 집단에 비해 매우 적기 때문인 것으로 추정되며, 향후 설악산 집단의 보존을 위한 보다 적극적인 노력이 필요한 것으로 사료된다.
Populus alba ${\times}$ P. glandulosa의 유전변이(遺傳變異)를 조사(調査)하기 위해 GOT, ACP, MDH, ADH의 isozyme을 starch gel에 의한 수평식(水平式) 전기영동법(電氣泳動法)으로 조사(調査)하였다. 염색결과(染色結果) 4종류(種類)의 동위효소(同位酵素)에 모두 band가 나타났으며 GOT의 band는 6 - 7 loci로 구분(區分)되고, 이 중 변이(變異)를 보인 다섯 loci에서 양친수(兩親樹)의 유전자형(遺傳子型) 추정(推定)에 의한 차대(次代)의 분리비(分離比)는 이론치(理論値)와 관찰치(觀察値)가 거의 일치(一致)하였다. ACP에 있어서 두 개의 locus가 있는 것으로 추정(推定)되며 A-zone은 monomorphic하게 나타났고, B-zone에서는 P. alba는 band가 없고 P. alba ${\times}$ P. alba는 $B_1$-band가 있으므로 교잡종(交雜種)에서 현사시나무 2호가 1호보다 유전변이(遺傳變異)가 크다는 것이 확인되었다. MDH는 변이(變異)가 없는 한 개 유전자좌(遺傳子座)와 변이(變異)가 있는 두 개의 유전자좌(遺傳子座)가 확인되었다. ADH는 교배양친수(交配兩親樹)가 각각(各各) 한 개의 다른 A-band만 나타내나 차대(次代)는 모두 3개의 band를 나타내어 양친수(兩親樹)는 homozygote, 차대(次代)는 heterozygote로 추정(推定)되고 중간(中間) band가 나타남으로 dimer로 판단되었다. 교배모수(交配母樹)인 은백양과 화분수(花粉樹)인 수원사시나무는 4가지 enzyme에 있어서 클론간(間)에 모두 변이(變異)가 없었다.
우리나라에 자생하고 있는 흑오미자 유전자원을 보존하고 육성하기 위하여, 제주도 한라산이라는 격리된 지역에 천연분포하고 있는 3개 집단을 대상으로 동위 효소분석에 의한 유전변이를 조사하였다. 1. 흑오미자 자생지 3개 집단의 4개의 동위효소에 대한 대립유전자 빈도와 분포는 6개의 유전자좌 가운데 Mdh-l과 Pgi-l을 제외한 모든 유전자좌에서 2개 이상의 대립유전자가 관측되어 Idh, Mdh-2, Mnr, Pgi-2에서 다형성을 보였다. Pgi-2를 제외한 Idh, Mdh-2, Pgi-l, Mdh-1, Mnr 유전자좌에서 동일한 대립유전자가 빈도가 가장 높은 주대립유전자로 나타났다. 2. 유전자좌당 대립유전자수(A/L)는 평균 1.7개의 값을 보였으며, 95%( $P_{95}$ ) 및 99%( $P_{99}$) 수준에서의 다형적 유전자좌의 비율은 38.9%와 50%, 평균 이형접합도의 관측치( $H_{0}$$^{./}$)와 기대치( $H_{e}$ )는 각각 0.141과 0.147로 나타났다. 흑오미자와 같이 분포구역이 매우 제한적이거나 멸종위기에 처한 식물종들은 유전변이량이 매우 적게 나타나는데 비해 흑오미자는 다소 많은 유전변이량을 보유하고 있는 것으로 나타났다. 3. 유전변이의 대부분이 집단 간 차이보다 집단내 개체간의 차이(92.6%)로 나타났으며, Wright의 F분석결과, $F_{IS}$ 및 $F_{IT}$ 값 모두 0에 가까운 값을 나타내어 흑오미자 집단이 Hardy-Weinberg 평형 상태에 근접해 있는 것으로 나타났다.다.
Ten anther-derived doubled haploid (ADH) and 10 maternally-derived doubled haploid fines (MDH) from NC 2326 were evaluated in the field to compare their performance. Both anther-derived doubled haploid and maternally-derived doubled haploid lines were agronomically inferior to selfed parental variety for many parameters, but the degree of inferiority of the MDH lines were not significantly different from the selfed parental variety for any character investigated. The inferiority of the ADH lines were, however, significantly different from the selfed parental variety for yield, leaf length and width , and days to flower.
In this work we describe the on-line monitoring technique for the analysis of fumaric acid in biotechnological processes. Fumarase and malate dehydrogenase(MDH) were immobilized on epoxy carrier and integrated into a FIA system. The effects of carrier buffer flow rate, pH, reaction temperature on the immobilized fumarase/MDH were investigated for the development of a fumarate-FIA system. Furthermore the effects of substrates, salts and metabolites dissolved in the sample on the activity of the immobilized enzyme were investigated.
The caudal subnucleus of the spinal trigeminal nucleus (medullary dorsal horn; MDH) receives direct inputs from small diameter primary afferent fibers that predominantly transmit nociceptive information in the orofacial region. Recent studies indicate that reactive oxygen species (ROS) is involved in persistent pain, primarily through spinal mechanisms. In this study, we aimed to investigate the role of xanthine/xanthine oxidase (X/XO) system, a known generator of superoxide anion ($O_2{^-}$), on membrane excitability in the rat MDH neurons. For this, we used patch clamp recording and confocal imaging. An application of X/XO ($300{\mu}M/30mU$) induced membrane depolarization and inward currents. When slices were pretreated with ROS scavengers, such as phenyl N-tert-butylnitrone (PBN), superoxide dismutase (SOD), and catalase, X/XO-induced responses decreased. Fluorescence intensity in the DCF-DA and DHE-loaded MDH cells increased on the application of X/XO. An anion channel blocker, 4,4-diisothiocyanatostilbene-2,2-disulfonic acid (DIDS), significantly decreased X/XO-induced depolarization. X/XO elicited an inward current associated with a linear current-voltage relationship that reversed near -40 mV. X/XO-induced depolarization reduced in the presence of $La^{3+}$, a nonselective cation channel (NSCC) blocker, and by lowering the external sodium concentration, indicating that membrane depolarization and inward current are induced by influx of $Na^+$ ions. In conclusion, X/XO-induced ROS modulate the membrane excitability of MDH neurons, which was related to the activation of NSCC.
Kim, Jeong-Hwan;Lee, Jin-Woo;Shin, Eun-Jung;Nam, Soo-Wan
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제21권2호
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pp.212-217
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2011
${\alpha}$ and ${\beta}$-subunits (ApCpnA and ApCpnB) are group II chaperonins from the hyperthermophilic archaeum Aeropyrum pernix K1, specialized in preventing the aggregation and inactivation of substrate proteins under conditions of transient heat stress. In the present study, the cooperativity of ${\alpha}$- and ${\beta}$-subunits from the A. pernix K1 was investigated. The ApCpnA and ApCpnB chaperonin genes were overexpressed in E. coli Rosetta and Codonplus (DE3), respectively. Each of the recombinant ${\alpha}$- and ${\beta}$-subunits was purified to 92% and 94% by using anionexchange chromatography. The cooperative activity between purified ${\alpha}$- and ${\beta}$-subunits was examined using citrate synthase (CS), alcohol dehydrogenase (ADH), and malate dehydrogenase (MDH) as substrate proteins. The addition of both ${\alpha}$- and ${\beta}$-subunits could effectively protect CS and ADH from thermal aggregation and inactivation at $43^{\circ}C$ and $50^{\circ}C$, respectively, and MDH from thermal inactivation at $80^{\circ}C$C and $85^{\circ}C$. Moreover, in the presence of ATP, the protective effects of ${\alpha}$- and ${\beta}$-subunits on CS from thermal aggregation and inactivation, and ADH from thermal aggregation, were more enhanced, whereas cooperation between chaperonins and ATP in protection activity on ADH and MDH (at $85^{\circ}C$) from thermal inactivation was not observed. Specifically, the presence of both ${\alpha}$- and ${\beta}$- subunits could effectively protect MDH from thermal inactivation at $80^{\circ}C$ in an ATP-dependent manner.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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