• 제목/요약/키워드: MDCK cell

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Screening of Antiviral Medicinal Plants against Avian Influenza Virus H1N1 for Food Safety

  • Lee, Jang-Hyun;Van, Nguyen Dinh; Ma, Jin-Yeul;Kim, Young-Bong;Kim, Soo-Ki;Paik, Hyun-Dong
    • 한국축산식품학회지
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    • 제30권2호
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    • pp.345-350
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    • 2010
  • Various extracts from 30 medicinal plants were evaluated for their antiviral activity against influenza virus A/Puerto Rico/8/34 (H1N1) and cytotoxicity in MDCK cell culture. The plant material (30 g) was extracted with methanol (300 mL) at room temperature for 24 h, after which the methanolic extracts were filtered, evaporated, and subsequently lyophilized. Evaluation of the potential antiviral activity was conducted by a viral replication inhibition test. Among these medicinal plants, Tussilago farfara, Brassica juncea, Prunus armeniaca, Astragalus membranaceus, Patrinia villosa, and Citrus unshiu showed marked antiviral activity against influenza virus A/H1N1 at concentrations ranging from 0.15625 mg/mL to 1.25 mg/mL, 0.3125 mg/mL to 10 mg/mL, 5 mg/mL to 10 mg/mL, 0.625 mg/mL to 10 mg/mL, 0.625 mg/mL to 10 mg/mL, and 0.3125 mg/mL to 5 mg/mL, respectively. The extracts of Tussilago farfara showed cytotoxicity at concentrations greater than 2.5 mg/mL, whereas the other five main extracts showed no cytotoxicity at concentrations of 10 mg/mL. Taken together, the present results indicated that methanolic extracts of the six main plants might be useful for the treatment of influenza virus H1N1.

Elucidation of the Inhibitory Mechanisms of Nipponoparmelia laevior Lichen Extract against Influenza A (H1N1) Virus through Proteomic Analyses

  • Cuong, Tran Van;Cho, Se-Young;Kwon, Joseph;Kim, Duwoon
    • Journal of Microbiology and Biotechnology
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    • 제29권7호
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    • pp.1155-1164
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    • 2019
  • Lichens contain diverse bioactive secondary metabolites with various chemical and biological properties, which have been widely studied. However, details of the inhibitory mechanisms of their secondary metabolites against influenza A virus (IAV) have not been documented. Here, we investigated the antiviral effect of lichen extracts, obtained from South Korea, against IAV in MDCK cells. Of the lichens tested, Nipponoparmelia laevior (LC24) exhibited the most potent inhibitory effect against IAV infection. LC24 extract significantly increased cell viability, and reduced apoptosis in IAV-infected cells. The LC24 extract also markedly reduced (~ 3.2 log-fold) IAV mRNA expression after 48 h of infection. To understand the antiviral mechanism of LC24 against IAV, proteomic (UPLC-$HDMS^E$) analysis was performed to compare proteome modulation in IAV-infected (V) vs. mock (M) and LC24+IAV (LCV) vs. V cells. Based on Ingenuity Pathway Analysis (IPA), LC24 inhibited IAV infection by modulating several antiviral-related genes and proteins (HSPA4, HSPA5, HSPA8, ANXA1, ANXA2, $HIF-1{\alpha}$, AKT1, MX1, HNRNPH1, HNRNPDL, PDIA3, and VCP) via different signaling pathways, including $HIF-1{\alpha}$ signaling, unfolded protein response, and interferon signaling. These molecules were identified as the specific biomarkers for controlling IAV in vitro and further confirmation of their potential against IAV in vivo is required. Our findings provide a platform for further studies on the application of lichen extracts against IAV.

Avian Influenza H9N2 Virus의 HA와 NA 단백질 발현, 정제 및 항혈청 생산 (Expression, Purification and Antiserum Production of the Avian Influenza H9N2 Virus HA and NA Proteins)

  • 이현지;송병학;김정민;윤상임;김진경;강영식;구용범;전익수;변승준;이윤정;권준헌;박종현;주이석;이영민
    • 미생물학회지
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    • 제44권3호
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    • pp.178-185
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    • 2008
  • 조류 독감바이러스(avian influenza virus, AIV)는 사람에게서 발생하는 인플루엔자 대유행에 중요한 역할을 한다. 특히 최근 AIV H9N2형에 의한 가금류 감염이 빈번히 나타나고 있어 인체 감염이 상당히 우려되는 실정이다. 본 연구에서는 최종적으로 AIV의 HA와 NA 단백질에 특이적으로 반응하는 항혈청을 생산하고자 하였다. 먼저 감염된 닭에서 분리된 AIV H9N2 한국분리주 A/Ck/Kr/MS96/96의 게놈RNA로부터 RT-PCR 방법으로 HA와 NA 단백질 N-말단부위에 해당하는 염기서열을 증폭하였다. 이렇게 증폭된 DNA단편은 E. coli 발현벡터 pGEX4T-1에 삽입한 후, BL21 세포에서 각각의 GST fusion protein (GST-HAln와 GST-NAn) 형태로 발현하였다. GST-HAln와 GST-NAn은 모두 glutathione sepharose column을 사용하여 분리 및 정제하였으며, 정제된 단배질을 항원으로 사용하여 토끼 항혈청을 생산하였다. 생산된 항혈청의 항원특이성은 AIV H9N2 한국분리주 A/Ck/Kr/MS96/96로 감염된 MDCK 세포의 cell extract를 사용하여 immunoblotting을 수행함으로써 확인하였다. 본 실험결과AIV H9N2의 HA와 NA단백질 N-말단부위에 해당하는 재조합GST fusion protein과, 이들 각각의 단백질에 특이적으로 반응하는 항혈청은 앞으로AIV 감염의 진단 뿐만 아니라, AIV에 대한 기초연구에 중요한 재료로 사용될 것으로 기대한다.

바이러스에 의한 소아 급성 하기도 감염의 유행 및 임상양상(1998년 9월~2002년 8월) (Viral Patterns and Clincal Analysis of Acute Respiratory Tract Infections of Children in Korea(September, 1998~August, 2002))

  • 이수진;박은영;오필수;이건희;김광남;이규만
    • Pediatric Infection and Vaccine
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    • 제10권1호
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    • pp.102-113
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    • 2003
  • 목 적 : 바이러스는 소아 하기도 감염증의 가장 흔한 원인으로 소아에서 흔히 이환되어 모세기관지염, 폐렴, 크룹, 기관 기관지염 등의 하기도 감염을 일으키는 원인 바이러스들의 유행 및 임상 양상을 조사하기 위해 본 연구를 시작하였다. 방 법 : 1998년 9월부터 2002년 8월까지 한림대학교 한강성심병원 소아과에 급성 호흡기 감염증으로 입원했던 환아 중 총 913례에서 비인두 흡인물을 채취하여 바이러스 배양 및 단일 클론 항체를 이용한 면역 형광 검사법으로 251례(27%)에서 호흡기바이러스가 분리되었다. 그 중 모세기관지염, 폐렴, 크룹, 기관 기관지염 등의 급성 하기도 감염증으로 진단 받은 208례의 의무기록을 후향적으로 고찰하였다. 결 과 : 1) RSV가 122례(58%)로 가장 많았고, PIV 30례(14%), INFB 21례(11%), INFA 20례(10%), ADV 15례(7%) 순이었다. 2) 발생시기는 RSV의 경우 1998년 12월과 1999년 11월에 많이 발생하였다. PIV는 연중 비슷하였고, INFA는 1999년 3월과 2000년 1월에 많이 검출되었다. INFB는 2002년 4월에 많이 발생하였고, ADV는 2000년을 제외하고는 연중 비슷하게 검출되었다. 3) 남녀 성별비는 1.8 : 1로 남아가 더 많았고, 중앙연령은 10개월이었다. 4) 임상적 진단에는 세기관지염 88례(43%), 폐렴 87례(42%), 크룹19례(9%), 기관 기관지염 14례(6%)의 순이었고, RSV의 경우 세기관지염이 70례(58%)였다. 5) 임상증상 및 징후에는 각 바이러스 모두 기침(93%), 비루(83%), 가래(74%), 발열(56%)이 많았고, ADV의 경우 발열(89%), 호흡곤란(56%)이 다른 바이러스에 비해서 높았다. 6) 청진 소견으로 천명음이 들렸던 경우는 RSV가 69%, INFA가 45%로 많았고, 건성수포음은 PIV가 52%, INFB가 38%로 많았으며 수포음은 ADV에서 89%로 높았다. 7) 말초 혈액 백혈구 수는 전체 59%에서 정상이었고, 39%에서 증가하였다. 적혈구 침강 속도는 73%에서 증가하였고, C 반응 단백은 21%에서 양성이었다. 8) 방사선 소견은 고찰이 가능하였던 206례 중 각 바이러스 모두 정상 소견이 가장 많았고, 과팽창은 RSV에서 많았다. 폐문 부위 기관지 침윤과 폐경화는 ADV에서 많았고, 하인두 확장은 PIV에서 현저하게 많았으며, 그 외 무기폐 소견도 있었다. 결 론 : 소아에서 급성 하기도 감염증의 중요한 원인을 차지하는 호흡기 바이러스는 각각 발생시기 및 유행양상이 다르고 임상 양상에서도 차이를 보였으나, 이에 더욱 많은 보고와 연구가 진행되어야 할 것으로 본다.

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