과립활성탄(GAC)상에 고정된 세균에 의한 4chloro-2-methylphenoxyacetic acid (MCPA)의 분해가 유통 조건하의 컬럼반응조에서 연구되었다. GAC상에 생물막을 형성시키기 위한 접종으로서 M MCPA를 분해하는 세균의 혼합배양이 사용되었다. 접종하기 전에 GAC에 의한 MCPA의 흡착을 조사 하였으며 접종후 GAC상에 형성된 생물막을 주사전자 현미경으로 관찰하였다. MCPA 분해는 생물막이 형성된 GAC를 포함하는 컬럼반응조의 회분 및 연 속운전 조건하에서 조사되었다. 회분배양에서 MC P PA의 완전분해가 이루어졌다. 연속배양상태에서 분적 인 MCPA의 분해가 일어났으나 분해정도는 기질인 MCPA의 결럼반응조내로 유입속도에 의존 었다.
Seven numerically dominant 2-methyl-4-chlorophenoxyacetic acid (MCPA)-degrading bacteria were isolated from agricultural soils. The isolates utilized the herbicide MCPA as a sole carbon source, producing significant biomass in MCPA mineral medium. They exhibited diverse herbicide degradation capabilities, but most of them grew very slowly in mineral medium containing herbicide. The chromosomal DNA patterns of the isolates obtained by polymerase chain reaction amplification of repetitive extragenic palindromic sequences were distinct from each other. One isolate, SH3, which was identified as Sphingomonas species by fatty acid methyl ester analysis, was able to degrade 5 different phenoxyacetic acid herbicides within 4 days. This strain contains two plasmids, and the smaller one has a crucial role in herbicide degradation. MCPA treated into agricultural soils without indigenous MCPA-degraders persisted for a long time, but the application of the isolate SH3 resulted in rapid decline of MCPA concentration in the soil.
HPLC/UVD를 이용한 현미와 볏짚 중 MCPA의 잔류분석방법 확립하고자 용매별 추출효율과 충진제별 정제효율을 검토한 결과, 용매별 추출효율은 시료 20g에 acetone 200mL와 1N-HCl 100mL의 혼합용매(pH 3.6)를 사용하는 것이 87%로 높은 효율을 보였고, 충진제별 정제효율은 florisil(6mL, 1g) Sep-$pak^{(R)}$ cartridge column에서 1% methanol/ acetonitile 용출이 83%의 효율을 나타내었다. 이 결과를 토대로 현미와 볏짚 시료 중의 MCPA 잔류분석을 수행하였는바, 평균회수율은 현미의 경우 96.0%와 94.9%이었으며, 볏짚의 경우 92.5%와 88.2%로 높은 회수율이었고, 실험의 정밀도는 상대표준편차 1.5~5.7%로 매우 높았다. 벼 이앙 후 30일에 bentazone+MCPA(11+1.2%) 합제를 ha당 30kg과 60kg을 각각 처리하여 재배한 현미와 볏짚 중 MCPA 잔류량은 모든 처리에서 식품의약품안전청이 권고한 잔류허용량인 $5{\mu}g\;mL^{-1}$ 미만이었다. MCPA의 HPLC 분석조건과 잔류분석절차의 결과는 가수분해, 유도체화, saponification과 같은 복잡한 분석절차를 생략할 수 있고, Rt가 기존 16.5 min.에서 6.5 min.으로 빨라져 인체위해성과 시간소모성의 단점을 개선하였으며, 회수율을 높이고 정밀도가 높은 결과로써 현미와 볏짚 중 HPLC에 의한 MCPA 잔류분석에 유용하게 적용할 수 있을 것으로 판단된다.
From the lysates of the 7 selected strains of Pseulomonas utilizing 2-methyl-4-chlorophenoxyactate as a sole source of carbon and energy, several MCPA plasmids, which encodes genes for the degradation of 2-methyl-4-chlorophenoxyacetate, were isolated, and measured their molecular weight as well as genetic characters such as resistance to antibiotics and degradative ability of other chlorinated herbicides. Transmissibility of the MCPA plasmids, pKU1, pKU15, and pKU17 was tested by conjugation or transformation and the restriction pattern of pKU15 for Pvu II, Hind III, EcoR I, Xho I, Bgl II, and Ava II was analyzed.
보리밭의 잡초방제(雜草防除)를 위하여 몇 가지 겨엽처리형제초제(莖葉處理型除草劑)를 공시(供試)하여 시험(試驗)한 결과(結果)를 보면 1. 공시약제중(供試藥劑中) 살초력(殺草力)은 Bromoxynil + MCPA와 Bromoxynil이 Ioxynil 보다는 효과적(效果的)이었다. 2. 이들 약제(藥劑)들의 시용량(제품)(施用量(製品))은 100g/10a 보다는 200g/10a 시용량(試用量)에서 살초효과(殺草效果)가 높았다. 3. 약제(藥劑)의 살포시기(撒布時期)는 이들 3엽제(葉劑) 모두 3월(月)보다는 4월(月) 초순(初旬)에 살포(撒布)되는 하잡초(夏雜草)도 방제(防除)할 수 있었기 때문이었다. 4. 보리 파종직후(播種直後) 토양처리제(土壤處理劑)로서 Butachlor를 처리(處理)하고 4월(月) 초(草)에 경엽처리제(莖葉處理劑)로서 Bromoxynil 이나 Bromonynil + MCPA를 처리(處理)한 구(區)에는 거의 완전방제(完全防除)가 가능(可能)하였다. 5. Bromoxynil+MCPA 약제(藥劑)로 30여(餘) 초종(草種)들의 살초력(殺草力)을 본 결과(結果) 주(主)로 광엽잡초(廣葉雜草)에 효과(效果)가 있어 답이작(畓裏作)보다는 전작맥류포(田作麥類圃)에 발생(發生)되는 잡초(雜草)를 대상(對象)으로 방제(防除)하는 것이 좋을 것으로 본다. 6. 잡초발생량(雜草發生量)(잡초건물중(雜草乾物重))과 보리 수량(收量)과의 회귀식(回歸式)은 y=593.112-0.41x(r=$-0.918^{**}$)로서 고도(高度)의 역상관(逆相關)을 보였다.
In order to find the characteristics of selected powerful Pseudomoanas sp. KU171(pKU19) degrading MCPA, many physiological and genetic tests were accomplished. By the curing and transformation experiment, it was found that the genes of Pseudomonas sp.KU171(pKU19) for MCPA-degrading were located on a plasmid pKU19. Also the plasmid had degradative gens for 2,A-D, 3CB, and DCP. Molecular size of pKU19 was measured to be 31.2Kb.
본 연구는 flucetosulfuron+pyrazosulfuron-ethyl 합제의 다년생 사초과잡초인 올방개, 새섬매자기에 대한 경엽처리시 제초활성 및 sulfonylurea계 저항성 잡초인 물달개비, 올챙이고랭이의 효율적 방제를 위한 bentazone, 2,4-D와의 혼합 경엽처리효과를 구명하고자 수행되었다. Flucetosulfuron+pyrazosulfuron-ethyl 추천량의 올방개 방제효과는 처리 29일차에 75%로 bentazone+MCPA의 95%보다 낮았지만 처리 60일차에는 90%로 bentazone+MCPA의 78%보다 현저히 높았으며, penoxsulam에 비해서는 전시기에 걸쳐 높았다. 새섬매자기에 대한 flucetosulfuron+pyrazosulfuron-ethyl 합제의 방제효과는 bentazone+MCPA 보다는 낮았지만 penoxsulam보다는 높았다. 제초제 경엽처리시 수심 조건에 따른 올방개와 피의 제초효과를 비교한 결과 flucetosulfuron+ pyrazosulfuron-ethyl은 담수심 조건에 관계없이 높은 올방개 및 피 방제효과가 확인되었다. 그러나 penoxsulam, bentazone+MCPA, cyhalofop+bentazone의 경우는 완전배수조건에서는 평가한 제초제 모두 높은 제초효과를 보인 반면 5 cm 담수조건에서는 제초효과가 현저히 감소되었다. Flucetosulfuron+pyrazosulfuron-ethyl은 sulfonylurea계 저항성 물달개비와 올챙이고랭이를 충분히 방제하지 못하였으나 bentazone과 2,4-D를 각각 추천량의 2/3약량 이상 혼합하여 살포하였을 때 효과적으로 방제하였다.
By the curing and transformation experiment, it was found thatthe genes of Pseudomonas sp.KU171(pKU19) for MCPA-degrading were located on a plasmid pKU19. Also the plasmid had degradative gens for 2,4-D, 3CB, and DCP. Molecular size of pKU19 was measured to be 31.2Kb. The restriction pattern were analyzed with Eco RI, BglII,XhoI, and the restriction map was generated.
Propanil, MCPA, 2, 4, 5-T와 Silvex 의 10개(個) 농도(濃度) 수준(水準)을 수경액(水耕液)과 엽면철포(葉面撤布)로 태중재래 1호, Caloro, PI 245717 및 Bluebonnet 50의 수도 품종(品種)을 사용(使用) 신근수 및 분얼수를 조사(調査)하였다. 산화(酸化) phenol 계(系) 제초제는 초장(草長)이나 근장(根長)에 대하여 보다 분얼수나 근수증가에 더 영향(影響)을 주었다. MCPA만이 사용량(使用量)범위내에서 분얼수 증가가 가능(可能)하였다. Silvex는 신근생성(新根生成)을 촉진(促進)하는데 필요(必要)한 수준(水準)보다도 높은 수준(水準)에서 분얼(分蘖)을 촉진(促進) 시켰다. 제초제에 대한 품종간(品種間) 반응(反應)은 제초제 투여부분(投與部分)에 따라 달랐다. 내비성(耐肥性)이 강한 품종(品種) 일수록 제초제의 촉진효과(促進效果)가 큰 경향(傾向)이었다. Propanil은 산화(酸化) Phenol계(系) 제초제의 20배(倍)의 고(高) 농도(濃度)에서도 수도생육에 아무런 영향(影響)이 없었다.
Peroxidase has been isolated to apparent homogeneity from earthworm, Lumbricus rubellus, using ammonium sulfate fractionation, Sephacryl S-2000 gel filtration, CM-cellulose cation exchange chromatography and native-PAGE elution. Some of its enzymatic characteristics were examined. The optimum pH for gruaiacol oxidation of earthworm peroxidase was determined to be 6.0, and the $K_{m}$ values against guaiacol and $H_2O_2$ were 1.25 mM and 3.4mM, respectively. When various compounds were tested as the possible substrates of the enzyme, o-dianisidine was used as the substrate. However, earthworm peroxidase could not oxidize esculetin and ferulic acid as substrates, suggesting the different characteristics of the enzyme from plant peroxidases. The optimum pH for veratryl alcohol and $H_2O_2$ oxidation was determined to be 2.5 when lignin peroxidation activity was examined. The $K_{m}$ values for veratryl alcohol and $H_2O_2$ were 0.02 mM and 0.13 mM, respectively. Furthermore, the earthworm peroxidase could oxidize phenoxyherbicides such as 2,4-D, 2,4-DP and MCPA as substrates. The optimum pHs for 2,4-D, 2,4-DP and MCPA were determined to be 4.0, 2.0 and 2.0, respectively. The most available substrate was 2,4-DP, followed by MCPA and 2,4-D when their peroxidation activities were compared.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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