• 한국동물학회지
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• 제22권4호
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• pp.141-152
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• 1979

고양이 백혈병 바이러스에서 reverse transcriptase를 분리하여 생화학적 및 면역학적 연구를 하였다. 분자량은 72,000이고, DNA polymerase와 RNase H의 활성은 0.05-1 mM $M_n^2+$와 50-80 mM KCl에서 가장 좋았다. DNA polymerase와 RNase H는 같은 단백질 분자에 있으며, chymotrypsin 처리로서 RNase H를 쪼개낼 수 있으며, 이 RNase H도 reverse transcriptase의 항체에 의해서 활성이 거의 억제 된다. Reverse transcriptase의 항체 결합위치와 활성을 내는 위치는 다른 것 같다.

• 약학회지
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• 제31권2호
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• pp.116-125
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• 1987

It is still difficult and time consuming to obtain cDNA sequences that contain the entire nucleotide sequence of the corresponding mRNA. A rapid and high efficient cloning method to obtain full-length cDNA segments is thus developed. The cloning procedure described here consists of the construction of oligo(dT)-tailed vector primer using pWR34 plasmid, polyadenylation of mRNA-cDNA heteroduplex using terminal deoxytransferase, and replacement of MRNA strand with DNA by RNase H and DNA polymerase I. The restriction endonuclease analysis shows that the size of inserted-cDNA is in the range of 1.5~4.0 kb long suggesting that most of cloned cDNA are full-length or nearly full-length cDNA. The plasmid-DNA recombinants obtained were 4$\times$$10^5$~$10^{6}$ per $\mu\textrm{g}$ of rat liver poly (A$^+$)mRNA, which is 4 to 10 fold higher cloning efficiency in comparison to the presently used methods for full-length cDNA cloning. The results indicate that the described cloning system is much simpler, less time consuming, and very efficient cloning method to construct a cDNA library.

• 미생물학회지
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• 제46권4호
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• pp.313-318
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• 2010

D. radiodurans RecA 단백질은 DNA에 결합한 DNA-단백질 복합체만이 ATPase 활성을 나타내며. 보통의 낮은 염 농도조건에서는 DNA가 존재하지 않으면 RecA 단백질에 의한 ATP 가수분해는 거의 일어나지 않았으나 이러한 ATP 가수분해현상은 높은 농도의 염을 첨가하게 되면 1,000배 활성화 되었으며 1.6 M KCl이 존재할 때 ATP 혹은 dATP를 가수분해 하였다. DNA가 존재하지 않을 때 염에 의해 촉진되는 활성은 RecA 단백질 농도에 비례하였고, 더 높은 염농도에서 더 높은 ATP 가수분해 활성이 나타났다. 이러한 활성화 현상을 다양한 종류의 이온 형태에서 분석하였을 때 1.6 M Cl 음이온이 존재할 때 양이온의 형태에 따른 활성화 정도는 $K^+{\geq}Na^+$> $NH_4^+$의 경향을 보였으며, 1.6 M의 K 양이온 존재할 때 음이온의 형태에 따른 활성화는 glutamate > $Cl^-$ > acetate > $PO_4^-$의 순서로 높게 나타났다. 고농도의 염이 존재하는 조건에서 DNA 비의존성 ATPase의 활성은 비교적 넓은 범위 최적 조건인 pH7과 pH 8 사이에서 최대 활성을 보였고, 기질에 대한 친화도면에서도 외가닥 DNA 의존성 활성보다는 이중가닥 DNA 의존성 활성형태를 보였다. 고농도의 염이 첨가되고 DNA가 존재하지 않을 때 RecA 단백질에 의한 ATP 가수분해를 위한 RecA 단백질의 활성 종 형태는 최소 3개의 RecA 단백질이 결합되어 있는 과량체로 작용하는 것으로 나타났다.

• 대한전기학회:학술대회논문집
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• 대한전기학회 2006년도 제37회 하계학술대회 논문집 C
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• pp.1324-1326
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• 2006

In this study, an integrated microelectrode array was fabricated on glass slide using microfabrication technology. Probe DNAs consisting of mercaptohexyl moiety at their 5-end were spotted on the gold electrode using micropipette or DNA arrayer utilizing the affinity between gold and sulfur. Cyclic voltammetry in 5mM ferricyanide/ferrocyanide solution at 100 mV/s confirmed the immobilization of probe DNA on the gold electrodes. When several DNAs were detected electrochemically, there was a difference between target DNA and control DNA in the anodic peak current values. It was derived from specific binding of Hoechst 33258 to the double stranded DNA due to hybridization of target DNA. It suggested that this DNA chip could recognize the sequence specific genes. It suggested that multichannel electrochemical DNA microarray is useful to develop a portable device for clinical gene diagnostic system.

• 미생물학회지
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• 제38권3호
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• pp.213-220
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• 2002

일본뇌염바이러스(Japanese encephalitis virus, JEV)의 구조단백질 capsid (C), precursor membrane (prM/M), 및 envelop (E) 단백질의 독립적인 발현을 위한 inducible expression system을 구축하였다. 발현세포주로는 BHK-21을 사용하였으며 발현의 induction에는 tetracycline analog인 doxycycline이 사용되었다. Transfectant BHK-21/IV(vector대조구), BHK21/IC(C), BHK-21/IP (prM/M),및 BHK-21/IE는 G418과 hygromycin 존재하에 클로닝되었으며 doxycycline induction에 따른 각 유전자의 mRNA 전사를 확인하였다. 세포의 성장곡선, chromatin condensation, internucleosomal DNA fragmentation, 및 flow cytometry에 의한 DNA content profile 분석을 통해 induction에 의한 각 구조단백질의 발현이 숙주세포에 미치는 영향을 조사하였다. 세 transfectants 모두 세포성장이 감소하고 chromatin이 응축되었다. 그러나 DNA fragmentation 및 DNA content profile 분석에서는BHK-21/IC만이 induction에 따라 상응하여 반응하였다. 이상의 결과는 JEV 감염에 의한 apoptotic 세포사멸 유도기전에서 capsid 단백질이 직접적이고 독립적인 영향요인이 될 수 있음을 제시한다.

• 한국전기전자재료학회:학술대회논문집
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• 한국전기전자재료학회 2007년도 추계학술대회 논문집
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• pp.105-106
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• 2007

M-DNAs based on zinc and cobalt ions were formed at the conditions of $26^{\circ}C$, 76% humidity, atmosphere, and pH 8.0. Some process parameters in synthesis of M-DNA such as synthetic temperature, concentration of metal ions, and synthetic time were varied and the electrical properties were investigated by changes of the parameters. The electrical properties of M-DNA showed the dependences on synthetic temperature, concentration of metal ions and synthetic time. The I-V characteristics rapidly increased with each increase of the parameters.

• BMB Reports
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• 제35권3호
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• pp.348-351
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• 2002

AquI DNA methyltransferase, M.AquI, catalyses the transfer of a methyl group from S-adenosyl-L-methionine to the C5 position of the outermost deoxycytidine base in the DNA sequence 5'CYCGRG3'. M.AquI is encoded by two overlapping ORFs (termed $\alpha$ and $\beta$) instead of the single ORF that is customary for Class II methyltransferase genes. The structural organization of the M.AquI protein sequence is quite similar to that of other bacterial C5-DNA methyltransferases. Ten conserved motifs are also present in the correct order, but only on two polypeptides. We separately subcloned the genes that encode the $\alpha$ and $\beta$ subunits of M.AquI into expression vectors. The overexpressed His-fusion $\alpha$ and $\beta$ subunits of the enzyme were purified to homogeneity in a single step by Nickel-chelate affinity chromatography. The purified recombinant proteins were assayed for biological activity by an in vitro DNA tritium transfer assay. The $\alpha$ and $\beta$ subunits of M.AquI alone have no DNA methyltransferase activity, but when both subunits are included in the assay, an active enzyme that catalyses the transfer of the methyl group from S-adenosyl-L-methionine to DNA is reconstituted. We also showed that the $\beta$ subunit alone contains all of the information that is required to generate recognition of specific DNA duplexes in the absence of the $\alpha$ subunit.

• Journal of Microbiology
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• 제44권1호
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• pp.42-49
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• 2006

In this study, we describe our newly-developed sensitive two-stage PCR procedure for the detection of 13 common mycoplasmal contaminants (M. arthritidis, M. bovis, M. fermentans, M. genitalium, M. hominis, M. hyorhinis, M. neurolyticum, M. orale, M. pirum, M. pneumoniae, M. pulmonis, M. salivarium, U. urealyticum). For primary amplification, the DNA regions encompassing the 16S and 23S rRNA genes of 13 species were targeted using general mycoplasma primers. The primary PCR products were then subjected to secondary nested PCR, using two different primer pair sets, designed via the multiple alignment of nucleotide sequences obtained from the 13 mycoplasmal species. The nested PCR, which generated DNA fragments of 165-353 bp, was found to be able to detect 1-2 copies of the target DNA, and evidenced no cross-reactivity with the generated DNA of related microorganisms or of human cell lines, thereby confirming the sensitivity and specificity of the primers used. The identification of contaminated species was' achieved via the performance of restriction fragment length polymorphism (RFLP) coupled with Sau3AI digestion. The results obtained in this study furnish evidence suggesting that the employed assay system constitutes an effective tool for the disagnosis of mycoplasmal contamination in cell culture systems.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제2권2호
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• pp.197-203
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• 1998

포유류 배아발생 중 DNA 메틸화는 세포분화와 유전자발현에서 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 그러나, 생쥐 착상전 초기배아 발생 중 메틸화효소에 의해 유지되는 DNA 메틸화의 중요성과 자세한 기작은 잘 이해되고 있지 않다. 이 연구에서 DNA 메틸화의 역할에 관하여 알아보기 위하여, 성숙난자와 착상전 초기배아에서 DNA 메틸전이효소의 발현양상을 조사하였다. 이를 위해, DNA 메틸전이효소를 암호화하고 있는 cDNA에서 primer를 고안하였다. Primer의 정확도와 PCR조건의 적합화를 통하여, DNA MTase 전사물이 성숙난자와 착상전 초기배아에서 검출되었다. DNA MTase의 mRNA량은 성숙난자에서 가장 높으며, 전핵시기까지 비슷한 정도로 유지되었다. 이후 8-세포기까지 지속적으로 감소하다 상실기 배아에서 다시 검출되어 포배기까지 증가하는 양상을 보였다. 그리고, RNA polymerase II 억제제를 전핵시기 배아에 처리하여, 난자와 전핵시기 배아에 다량 존재하는 전사물이 모계유래인 것을 확인하였다. 결국, 난자와 전핵시기 배아에 상대적으로 다량 존재하는 DNA 메틸전이효소의 전사물은 아마도 착상전 초기배아에서 DHA 메틸화의 유지에 필요하며, 착상전 초기배아 발생에 있어서 유전자발현과 세포분화에 영향을 줄 것임을 시사하고 있다.

• Applied Microscopy
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• 제18권2호
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• pp.167-176
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• 1988

Extrachromosomal circular DNA complexes from erythrocytes and splenocytes isolated from Carassius carassius were examined by mica-press-absorption method. The method was described that released small polydisperse circular DNA molecules in situ from the erythrocytes and the splenocytes and that allows selective observation of the small circular DNA complexes bound to cellular components. The released polydisperse circular DNA complexes were absorbed preferentially on mica in a divalent cation-free medium then processed for electron microscopy. Small circular DNAs showed a heterogeneous size distribution of $2{\sim}10{\mu}m$ with a mean contour length of $4.3{\mu}m$ for the circulating erythrocytes and that of $0.7{\sim}3.6{\mu}m$ with a mean contour of length $2.04{\mu}m$ for the splencytes. Cells contained $100{\sim}300$ copies and $300{\sim}700$ copies obtained from the erythrocytes and the splenocytes, repectively. Possible biological functional implications for size distribution of extrachromosomal circular DNAs are discussed.