연구는 어류에 각종 생약재를 투여하였을 때 나타나는 방어 능력의 변화와 질병에 대한 예방 효과를 밝히고자 수행되었다. 실험의 내용은 인삼(Panax ginseng), 구기자(Lycium chinense), 하수오(Polygonum multiflorum), 오미자(Schizandra chinensis)의 첨가 사료를 나일틸라피아에 일정 기간 투여한 후 실험어의 성장, 비특이적 방어 능력 및 생리학적 기능에 미치는 영향을 조사한 것이다. 실험에 사용한 각종 생약재 중에서 체중의 증가는 구기자 3% 투여구가 가장 높게 나타났다. 보체의 살균 능력은 모든 실험구에서 살균력이 12주째에 증강되었고 보체의 용혈 능력도 모든 생약재 투여구에서 대조구 보다 높고 특히 인삼 2% 투여구에서 가장 높게 나타났다. 그러나 라이소자임의 용균능력과 신장의 부착 식세포 활성 산소 생성 능력은 구기자 3% 투여구가 가장 높았다. 그리고 나일틸라피아에 병원성을 지닌 Edwardsiella tarda 균주로 공격 실험한 결과 구기자 3% 투여구가 생존율이 85%로 가상 높았다. Hematocrit, hemoglobin, total protein, glucose, GOT, GPT와 같은 혈액의 생리학적 지표 성분을 분석한 결과 생약재를 첨가한 사료를 먹인 실험어는 대조구와 차이가 없으며 생리적 기능 면에서 나쁜 영향을 주지 않는 것으로 조사되었다. 따라서 인삼, 구기자, 하수오, 오미자 등과 같은 생약재는 그 종류에 따라 나일틸라피아의 성장률, 각종 비특이적 면역력을 증강시키는 능력과 병원성 세균에 대한 저항력의 증강 효과에 차이가 있지만 장기간 투여하여도 생리 기능에 문제를 야기하지 않는 것을 알 수 있었다. 모든 실험 결과를 종합해 보면, 실험에 사용한 각종 생약재 중에서 구기자는 가장 경제적이며, 각종 면역 기능 증강 효과가 뛰어나므로 새로운 사료내 첨가물로서의 충분한 가치가 있으며, 양식 어가에 많은 도움을 줄 것으로 생각된다.
항진균 활성균주를 선발하는 과정에서 DM3 균주를 대천 바닷가에서 수집된 진흙 시료로부터 분리하였으며 API 50CHB kit를 이용하여 동정한 결과 Bacillus licheniformis로 동정되었다. 이 균주는 12종의 식물병원성 진균에 대해 항균활성을 나타내었다. 감마선($^{60}Co$)을 조사하여 항진균 활성 결핍 돌연변이체(mDMB)를 유도한 후, 이차원전기영동으로 단백질을 분석한 결과 DM3와 mDM3에만 존재하는 각각 4종과 3종의 단 단백질을 확인할 수 있었다. 2-DE 결과 B. licheniformis DM3에서 spot 1은 serine hydroxymethyltransferase(45.0kDa), spot 2는 hypothetical protein(40.7 kDa), spot 3는 NifU protein homolog(15.4 kDa), 그리고 spot 4는 resolvase(12.5 kDa)와 상동성을 지닌 단백질로 동정되었고 B. licheniformis mDM3에서만 발현된 spot 5는 lysozyme(18.1 kDa)과 spot 6, 7은 alkyl hydroperoxide reductase(15.6 kDa)으로 동정되었다. B. licheniformis DM3에서 이들 단백질들의 항진균 활성 관련 여부를 규명하기 위해서 더 연구가 진행되어야 할 것으로 사료된다.
In the study, we investigated the effect of Taurine-FTM, which is a commercially available fishery nutritional supplements complex, on anti-hepatotoxicity stressed with thioacetamide (TAA) and innate immune responses in olive flounder. To investigate the change in liver toxicity, firstly, TAA (30 ppm/100 g of fish) was intraperitoneally (i.p.) administered 12 hr after the intramuscular (i.m.) injection of Taurine-FTM (0.02 ml/100 g of fish)(Taurine/TAA). Secondly, Taurine-FTM was i.m. injected 24 hr after the administration of TAA (TAA/Taurine). Finally, TAA was administered simultaneously with Taurine-FTM (TAA+Taurine). All blood samples were collected 24 hr after injection. GOT level in group Taurine/TAA appeared similar to the control, whereas group TAA/Taurine and TAA+Taurine showed significantly increased (p<0.05) levels compared to the control. In GPT level, group Taurine/TAA and TAA/Taurine showed elevated levels compared to the control, whereas no significant difference was observed between group TAA+Taurine and the control. Serum ACH50 activity was significantly (p<0.05) augmented 24 hr after Taurine-FTM injection compared to the control group, whereas no significant increase was observed 48 hr after Taurine-FTM injection. On the other hand, serum lysozyme activity elevated in an acute stressed condition appeared significantly down-regulated 24 and 48 hr after Taurine-FTM injection compared to the control. In conclusion, i.m. injected Taurine-FTM augmented flounder serum complement activity and decreased a possible handling stress resulting in reducing a serum lysozyme activity and recovering hepatotoxicity. Thus, it is assumed that i.m. injection of Taurine-FTM mixed with antibiotics or available vaccines could be utilized as an anti-hepatotoxic recipe in fish culture industry.
본 연구에서는 1% 마늘 추출액을 사료에 첨가하여 항균력 시험, 혈액학적 분석 및 어류질병 원인체들 (Viral Hemorrhagic Septicemia Virus, Vibrio anguillarum, Streptococcus iniae, Edwardsiella tarda)에 대한 비특이적 면역반응을 조사하였다. 사료에 1% 마늘 추출액을 첨가하여 4주간 넙치에 섭이시킨 후 V. anguillarum, S. iniae, E. tarda을 인위 감염시켜 2주간 누적 폐사율을 관찰하였다. 공격 실험 결과 E. tarda를 제외한 모든 시험구에서 대조구에 비해 낮은 누적 폐사율이 관찰되었다. Hematocrit, glucose, total protein, lysozyme activity 및 macrophage activity에서는 대조구에 비해 유의적으로 높은 수치를 관찰하였다. 3가지 어병세균 (V. anguillarum, S. iniae, E. tarda)을 이용하여 마늘 항균력 및 MIC를 측정한 결과, 이전에 보고된 마늘 분말보다 1% 마늘 추출물에서 더 효과적인 결과를 관찰하였다. 이러한 결과는 마늘 추출물이 넙치의 V. anguillarum, S. iniae, E. tarda에 대한 비특이적 면역반응 및 질병저항력을 증가시키는 것으로 사료된다.
This study has been performed to investigate the potential effects of by-product discarded after probiotics production (BPPP) on growth performance, immune gene expression, innate-immunity status, and disease resistance of carp, Cyprinus carpio. For 3 weeks, carp were fed four diets containing different levels of BPPP at 0, 0.1, 0.2 and 0.5% per kg of normal diet. Every 7 days of feeding, immune-related gene expression, serum lysozyme activity and ACH50 were analyzed. Growth rates and challenge test with E. tarda were conducted after 3 weeks of BPPP feeding. Both lysozyme activity and ACH50 were significantly (p<0.05) increased in all BPPP supplemented groups compared to the control at every 7 day for 3 weeks of feeding trial. The gene expression of pro-inflammatory cytokines, IL-1β and TNF-α was significantly (p<0.05) up-regulated until 21 days of feeding in all groups except for 0.2% group on day 7 post feeding. The anti-inflammatory cytokine IL-10 gene expression was only significantly (p<0.05) increased in 0.1% group on day 7 and decreased (p<0.05) on day 14 in all BPPP supplemented groups. On day 21, the IL-10 gene expression was augmented (p<0.05) in all groups. SOD gene expression was significantly (p<0.05) increased compared to the control on day 14 and 21 post feeding, whereas no significant difference was observed on day 7. In challenging test, 0.2%, 0.1%, 0.5% and control group showed 80%, 70%, 60% and 40% of survival rate, respectively. Feed conversion rate was only improved in 0.5% group. In conclusion, the present study indicates that dietary BPPP suplementation improved growth performance, innate immune response and bactericidal activity in carp.
Using Bacillus subtilis spore display system, with cotG as an anchoring motif, levansucrase from Zymomonas mobilis, was displayed on the outer surface of Bacillus subtilis spore. Flow cytometry of DB104 (pSDJH-cotG-levU) spore, proved the surface localization of CotG-LevU fusion protein on the spore compared to that of DB104. Enzymatic activity of DB104 (pSDJH-cotG-levU) spore showed more than 1.5 times higher levansucrase specific activity compared to that of the host spore, which is a remarkable increase of enzymatic activity considering the existence of sacA (sucrase) and sacB (levansucrase) in the Bacillus subtilis chromosome. The spore integrity, revealed by sporulation frequency test after heat and lysozyme treatment of spore, did not changed at all in spite of the CotG-LevU fusion protein incorporation into the spore coat layer during spore formation process. These data prove again that Bacillus subtilis spore could be considered as good live immobilization vehicle for efficient bioconversion process.
A serine proteinase was purified from Acanthamoeba culbertsoni by 41~80% ammonium sulfate fractionation, ion exchange chromatography, affinity chromatography and gel filtration chromatography. The molecular weight of the purified enzyme was estimated to be 108.0 kDa by gel filtration chromatography and 54.0 kDa by SDS-PAGE. Therefore, the purified enzyme seemed to be a dimer. Isoelectric point was 4.5. The enzyme activity was highly inhibited by the serine proteinase inhibitors diisopropyl fluorophosphate (OFP) and phenylmethyl sulfonylfluoride (PMSF). It had a narrow pH optimum of 6.5~7.5 with a maximum at pH 7.0. These data suggested that the purified enzyme was a neutral serine proteinase. Optimal temperature was $37^{\circ}C$. It was stable for at least 16 h at $4^{\circ}C$ and $37^{\circ}C$, but it was rapidly inactivated at $65^{\circ}C$ The activity of the purified enzyme was not influenced significantly by $Mg^{2+}$, $Mn^{2+}$, $Zn^{2+}$ or $Ca^{2+}$. However, the enzyme activity was highly inhibited by $Hg^{2+}$ The enzyme degraded type I collagen and fibronectin, but not BSA, hemoglobin, lysozyme, immunoglobulin A or immunoglobulin G.
본 연구는 양식 넙치, Paralichthys olivaceus에서 희석 백신의 장시간 처리 효과를 조사하였다. 넙치에 상업용 에드워드 백신 (5㎎/ℓ)을 $10^0$, $10^{-1}$, $10^{-2}$ and $10^{-3}$로 희석하여 2분 (short immersion, SI)과 24시간 (prolonged immersion, PI) 침지한 다음 시험어의 비특이적 면역계 (혈청 라이소자임, 살균능)와 특이적 면역계 (응집항체가)의 활성과 Edwardsiella tarda 공격에 대한 방어력의 변화를 조사하였다. 그 결과 에드와드 백신을 $10^{-1}$과 $10^{-2}$로 희석하여 장시간 침지 투여 시험구가 고농도 백신의 단시간 침지 시험구에 비하여 혈청 라이소자임 활성과 보체의 살균능이 높았으며 에드워드균 감염에 대한 방어력도 높았다. 따라서 희석 백신을 장시간 침지 처리하는 방법은 백신 효과를 높일 수 있을 것으로 기대된다.
양식 잉어류에서 심각한 피해를 야기하고 있는 VSNCV에 대한 백신을 제작하여 잉어에 투여한 후 특이적 및 비특이적 면역반응을 조사하였다. 백신은 포르마린처리백신 (FKV)과 가온처리백신 (HKV)를 제작하여 건강한 잉어에 0.2㎖씩 복강주사 하였으며, 2주 후 동일한 방법으로 boost 처리하였다. 백신 투여 후 비특이적 면역반응 중 혈청 라이소자임 활성과 대식세포의 chemiluminescent (CL) reponses은 1차 주사 후 및 boost 처리 후 2일째부터 7일째까지 유의적인 증가를 나타내었으며, 이후 대조구 수준으로 감소하였다. ELISA법으로 항체가를 조사한 결과 대조구를 제외한 FKV와 HKV 투여구에서 주사 후 2주 째부터 boost 처리 후 6주 째까지 유의적으로 증가하였으며, 그 중에서도 boost 처리 후 2주 째 최고치를 나타내었다. 각 시험구별로 boost 처리 후 2주 째에 VSNCV로 공격 실험한 결과 FKV 투여구에서는 20%의 누적폐사율을 나타내어 방어력이 인정되었으나, HKV 투여구에서는 70%의 누적폐사율이 나타나 방어효과가 거의 없는 것으로 나타났다.
Two studies were conducted to investigate the effects of dietary nucleotides (NT) on the growth performance, hematological parameters, and innate immune responses of red seabream Pagrus major. In Expt I, six experimental diets were formulated: a control, four that contained each NT at a level of 0.15% (inosine monophosphate, IMP; adenosine monophosphate, AMP; guanosine monophosphate, GMP; and uridine monophosphate, UMP), and one with a 1:1:1:1 mixture of NTs (IMP, AMP, GMP, and UMP). In Expt II, five experimental diets were formulated that contained 0, 0.1, 0.2, 0.4, and 1.0% IMP (commercial product). Triplicate groups of juvenile (initial body weight 33.1 g) and growing (initial body weight 120 g) red seabream were fed one of the experimental diets to apparent satiation for 8 weeks in Expt I and 12 weeks in Expt II. In Expt I, fish fed diets with NT had higher growth performance than the control group. The nitroblue tetrazolium and lysozyme activities were higher in fish fed the mixed-NT diet, and lowest in the control group. In Expt II, the final body weight and feed utilization of fish fed the 0.1% IMP diet were significantly higher than those of fish fed the control or 1.0% IMP diets. Diet palatability was improved significantly when 0.1% IMP was added. The lysozyme activity was higher in fish fed diets with 0.4-1.0% than in the control group. These results suggest that supplementation of 0.15% IMP and Mixed-NTs in diet can enhance the growth and immune responses in juvenile red seabream. The optimum IMP level appears to be 0.2% in practical feed formulation for growing red seabream.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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