• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제31권8호
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• pp.1119-1126
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• 2018

Objective: Present investigation was aimed to study the Single Nucleotide Variants of the luteinizing hormone beta ($LH{\beta}$) gene and to analyze their association with the semen quality (fresh and post-thawed frozen semen) and luteinizing hormone (LH) concentrations in Murrah buffalo bulls. Methods: Polymerase chain reaction-single stranded conformational polymorphism (PCR-SSCP) and Sanger sequencing method is used to study genetic variability in $LH{\beta}$ gene. LH assay was carried out using enzyme-linked immunosorbent assay method. A fixed general linear model was used to analyze association of single nucleotide polymorphism (SNP) of $LH{\beta}$ gene with semen quality in 109 and LH concentrations in 80 Murrah bulls. Results: $LH{\beta}$ gene was found to be polymorphic. Total six SNPs were identified in $LH{\beta}$ gene g C356090A, g C356113T, g A356701G, g G355869A, g G356330C, and g G356606T. Single Stranded Conformational Polymorphism variants of pattern 2 of exon 1+pattern 2 of exon 2+pattern 1 of exon 3 had highly significant (p<0.01) effect on sperm concentration (million/mL), percent mass motility, acrosome integrity and membrane integrity in fresh and frozen semen whereas significant (p<0.05) effect was observed on percent live spermatozoa. SSCP variants of pattern 2 of exon 1+pattern 2 of exon 2+pattern 1 of exon 3 had highly significant (p<0.01) effect on luteinizing hormone concentrations too. Conclusion: The observed association between SSCP variants of $LH{\beta}$ gene with semen quality parameters and LH concentrations indicated the possibilities of using $LH{\beta}$ as a candidate gene for identification of markers for semen quality traits and LH concentrations in Murrah buffaloes.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제4권2호
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• pp.231-236
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• 2000

Gonadotropin-releasing hormone (GnRH)과 그 수용체가 흰쥐의 난소, 정소, 자궁, 태 반 그리고 유선 등의 생식기관에서 발현됨이 알려져 있다. 더욱이, 뇌하수체 전엽에 작용하는 GnRH의 표적 산물로 알려진 luteinizing hormone (LH)이 흰쥐 생식소에서도 발현됨이 알려졌는데, 이는 생식소 내에 GnRH-LH로 이루어진 국부 회로 (local circuit)가 존재함을 시사하는 것이다 본 연구는 LH와 그 수용체 유전자가 흰쥐 유선에서도 발현되는가를 규명한 것이다. 이를 위해 reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR)과 LH 방사면역측정법 (radioimmunoassay, RIA)을 사용하였다. RT-PCR을 시행한 결과 생식 주기중인 임신하지 않은 흰쥐 유선에서 뇌하수체 유형의 LH${\beta}$ 전사체 (exon 1-3)가 증폭되었으나 정소특이적 LH${\beta}$ exon 부분은 검출되지 않았다. 뇌하수체 glycoprotein hormone에서 공통적으로 존재하는 ${\alpha}$-subunit과 LH 수용체에 대한 전사체 역시 흰쥐 유선에 존재함이 확인되었다. 또한 기존의 보고에서 수유중인 흰쥐 유선에서만 발현된다고 알려진 GnRH가 임신하지 않은 흰쥐 유선에서도 발현됨을 확인하였다. LH 방사면역측정법을 시행한 결과 흰쥐 유선조직 추출물에서 immunoreactive LH분자들이 검출되었으며, LH standard curve와 parallelism을 보이므로 흰쥐 유선의 LH가 뇌하수체 형과 동일할 가능성을 확인하였다. 본 연구는 흰쥐 유선에서 LH subunit들과 수용체 유전자가 발현됨을 최초로 보고한 것으로서, 흰쥐 유선이 LH의 생성처이면서 동시에 작용처이며 유선에서 합성된 GnRH의 조절하에 국부적인 인자로 작용할 가능성을 시사한다.

• 한국동물학회지
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• 제37권3호
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• pp.377-384
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• 1994

The present study examines the inhibitow effect of progesterone (P) on luteinizing hormone $(LH)\beta$ subunit gene expression in anterior pituitary of ovariectomized, estradiol-treated adult rats. A single injection of P (1mg) further decreased the estradiol-Induced decrease in $LH\beta$ mRNA levels in ovariectomTzed rats in a time-dependent manner. p suppressed UIP mRNA levels at lower doses (0.1 and 1mg), but increased $LH\beta$ mRNA levels 81 a high dose (toms). The inhibitor action of P on $Uf\beta$ mRNA was restored when Ru486, a P receptor antagonist, was administered 1h before P treatment. These data clearly indicate that P inhibits gene expression of $LH\beta$ in the rift pituitary in a swersic manner with estrogen.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제26권3호
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• pp.377-381
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• 1999

Objectives: Recent studies, including our own, demonstrated that the novel expression of LH gene in rat gonads and uterus, indicating that the local production and action of the LH-like molecule. In the present study, we investigated whether human uterus also expresses the LH gene. Design: Reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) amplified the cDNA fragments coding $LH_{\beta}$ polypeptide from human endometrium but not from myometrium. Presence of the transcripts for the ${\alpha}$-subunit in human endometrium was also confirmed by RT-PCR. Results: Transcripts for $LH_{\beta}$ subunit were detected in endometrial samples from women with endometriosis. The gene for LH/hCG receptor was expressed in both endometrium and myometrium, showing good agreement with previous studies. Increased level of $LH_{\beta}$ transcript was determined in the endometrium from follicular phase compared to that from luteal phase. Conclusion: Taken together, our findings demonstrated that 1) the genes for LH subunits and LH/hCG receptor are expressed in human uterus, 2) the uterine LH expression was changed during menstrual cycle, suggesting that the uterine LH may playa local role in the control of uterine physiology and function(s).

• 대한약리학회지
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• 제30권1호
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• pp.19-28
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• 1994

흰쥐의 뇌하수체 전엽배양세포에 gonadotropin-releasing hormone (GnRH)을 처리하였을 때 시간이 경과함에 따라 GnRH농도에 비례하여 luteinizing hormone(LH)의 분비가 증가하였으며, 2시간까지 급격하게 증가하였다. 또한 GnRH를 처리하였을때 ${\alpha}$ subunit mRNA의 농도는 증가하지 않았으나 $LH{\beta}$ subunit mRNA의 농도는 GnRH 농도에 비례하여 증가하였으며, GnRH 처리후 6시간 이후부터 유의하게 증가하였다. 특히 최종농도가 $2{\times}10^{-10}M$이 되도록 GnRH를 처리하였을 때 $LH{\beta}$ subunit mRNA 농도가 2.7배 정도 최대로 증가하였다. 또한 estradiol을 단독으로 또는 GnRH와 동시에 처리하였을때 LH분비가 증가하지 않았으나 progesterone을 GnRH와 동시에 처리하였을때 LH분비가 유의하게 증가하였다. 또한 $LH{\beta}$ subunit mRNA의 농도는 estradiol및 progesterone을 단독으로 또는 GnRH와 동시에 처리하였을때 난소호르몬 농도에 의존적으로 $LH{\beta}$ subunit mRNA의 농도가 증가하였다. Estradiol에 의한 $LH{\beta}$ subunit mRNA의 증가양상은 estrogen 길항제인 LY117018에 의하여 유의하게 감소하였다. 이러한 결과로 보아 GnRH는 steady state $LH{\beta}$ subunit mRNA 농도에 영향을 미치므로써 LH분비 및 LH subunit 생합성을 조절하며 난소호르몬은 뇌하수체에 직접 작용하여 LH분비 및 LH subunit 생합성에 영향을 주는 것으로 보인다.

• 생명과학회지
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• 제27권8호
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• pp.864-872
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• 2017

eCG는 다른 포유동물에서 FSH와 LH의 활성을 나타내기 때문에 성선자극 호르몬 family에서 아주 특이적이고 많은 당쇄가 수식되어진 알파와 베타의 비공유결합으로 구성되어 있다. 유전자 재조합 $eCG{\beta}/{\alpha}$의 생물학적 기능을 규명하기 위하여 말의 LH/CGR의 포유동물발현용 벡터를 구축하였다. 재조합 $eCG{\beta}/{\alpha}$의 활성분석은 말의 LH/CGR가 일시적으로 발현되는 CHO-K1 세포와 지속적으로 발현되는 PathHunter Parental 세포를 이용하여 분석하였다. 유전자 재조합 $eCG{\beta}/{\alpha}$는 CHO-K1 부유세포의 상층으로 효율적으로 분비되었으며, 분비량은 transfection 후 1일에서 7일까지 약 200 mIU/ml이었다. Western blot 분석결과는 재조합 $eCG{\beta}/{\alpha}$의 분자량은 약 40-45 kDa으로 검출되었다. eLH/CGR가 발현되는 CHO-K1 세포에서의 cAMP분비량으로 재조합 $eCG{\beta}/{\alpha}$의 활성을 분석하였다. 그 결과 cAMP농도는 재조합 $eCG{\beta}/{\alpha}$의 농도의존적으로 증가하였다. eLH/CGR가 일시적으로 발현하는 CHO-K1 세포에서 $EC_{50}$ 값은 $8.1{\pm}6.5ng$이었다. 또한 일시적 및 지속적으로 eLH/CGR가 발현하는 PathHunter Parental 세포에서도 재조합 $eCG{\beta}/{\alpha}$의 LH 활성 분석결과 높은 활성을 나타내는 것으로 확인되었으며, 이들의 $EC_{50}$ 값은 각각 $5.0{\pm}4.7ng/ml$, $4.5{\pm}5.2ng/ml$으로 나타났다. 따라서 이러한 결과에 의하면 재조합 $eCG{\beta}/{\alpha}$는 말의 LH/CGR가 발현하는 세포에서 생물학적 활성을 나타난다는 것을 확인하였으며, PathHunter Parental 세포에서 지속적으로 발현되는 세포의 확보는 당쇄제거에 의한 재조합 eCG의 돌연변이등에 관한 기능적인 메커니즘을 밝히는데 유용할 것으로 사료된다.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제26권2호
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• pp.157-161
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• 1999

Recent studies clearly demonstrated that the novel expression of LH gene in the rat testis, and suggested the local action of the LH-like molecule. The present study was performed to analyze the expression of LH genes in the rat accessory reproductive organs. Expression of LH subunit genes in the rat uterus and epididymis was demonstrated by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) and specific LH radioimmunoassay (RIA). The $LH_{beta}$ transcripts in these organs contained the published cDNA structure, the pituitary type exons 1-3, which encoded the entire $LH_{beta}$ polypeptide. Presence of the transcripts for the ${\alpha}$-subunit in the rat reproductive tissues were also confirmed by RT-PCR. In the LH RIA, significant levels of LH were detected in crude extracts from the rat ovary, uterus and epididymis. The competition curves with increasing amount of tissue extracts were parallel with those of standard peptide, indicating that the immunoreactive LH-like materials in these tissues are similar to authentic pituitary LH molecule. In rat epididymis, the highest amount of immunoreactive LH was detected in corpus area. Our findings demonstrated that the genes for LH subunits are expressed in the rat accessory reproductive organs, and suggested that these extrapituitary LH may act as a local regulator with auto and/or paracrine manner.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제21권2호
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• pp.111-120
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• 2017

Equine chorionic gonadotropin (eCG) is a unique molecule that elicits the response characteristics of both follicle-stimulating hormone (FSH) and luteinizing hormone (LH) in other species. Previous studies from this laboratory had demonstrated that recombinant eCG (rec-eCG) from Chinese hamster ovary (CHO-K1) cells exhibited both FSH- and LH-like activity in rat granulosa and Leydig cells. In this study, we analyzed receptor internalization through rec-eCGs, wild type eCG ($eCG{\beta}/{\alpha}$) and mutant eCG ($eCG{\beta}/{\alpha}{\Delta}56$) with an N-linked oligosaccharide at $Asn^{56}$ of the ${\alpha}-subunit$. Both the rec-eCGs were obtained from CHO-K1 cells. The agonist activation of receptors was analyzed by measuring stimulation time and concentrations of rec-eCGs. Internalization values in the stably selected rat follicle-stimulating hormone receptor (rFSHR) and rat luteinizing/chorionic gonadotropin receptor (rLH/CGR) were highest at 50 min after stimulation with 10 ng of $rec-eCG{\beta}/{\alpha}$. The dose-dependent response was highest when 10 ng of $rec-eCG{\beta}/{\alpha}$ was used. The deglycosylated $eCG{\beta}/{\alpha}{\Delta}56$ mutant did not enhance the agonist-stimulated internalization. We concluded that the state of activation of rFSHR and rLH/CGR could be modulated through agonist-stimulated internalization. Our results suggested that the eLH/CGRs are mostly internalized within 60 min by agonist-stimulation by rec-eCG. We also suggested that the lack of responsiveness of the deglycosylated $eCG{\beta}/{\alpha}{\Delta}56$ was likely because the site of glycosylation played a pivotal role in agonist-stimulated internalization in cells expressing rFSHR and rLH/CGR.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제6권3호
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• pp.411-416
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• 1993

We assessed effects of ovine luteinizing hormone (oLH) and follicle-stimulating hormone (oFSH) on the granulose and theca layers from the four largest follicles, $F_1-F_4$ of hens which had been hypophysectomized 12 h before expected ovulation. Ovine LH (0.4 mg), oFSH (0.4 mg) or oLH in combination with oFSH (0.4 mg each) was injected intravenously 6 h after hypophysectomy. Progesterone, testosterone and $estradiol-17{\beta}$ levels of the granulose and theca layers which were removed 6 h after hormone injection, were measured by radioimmunoassay. Progesterone contents of $F_1-F_3$ granulosa layer at 12 h after hypophysectomy were much lower than those of control hens. This reduced progesterone level was restored partially by the injection of oLH alone for $F_1$, while no follicles responded to oFSH treatment. In contrast, the injection of oLH in combination with oFSH resulted in high progesterone content of the granulose layer from all four follicles. Progesterone content of the theca layer was negligible in all treatments. Simultaneous injection of oLH and oFSH also elevated $estradiol-17{\beta}$ level accumulating in the theca layer from all follicles, of which much higher concentrations of $estradiol-17{\beta}$ were observed when comparison were made to each of their corresponding controls. No appreciable change in testosterone contents of two layers was observed in the present experiments. These results suggest that oFSH augments function of oLH to stimulate the production of progesterone in the granulose layer and $estradiol-17{\beta}$ in the theca layer.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제25권2호
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• pp.199-205
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• 1998

흰쥐 난소에서의 Luteinizing hormonoe (LH) subunit 유전자 발현과 LH polypeptide의 존재를 조사하였다. 이를 위해 LH subunit들에 대한 역전사 중합효소연쇄반응 (RT-PCR)을 시행하고, 난소내 LH 함량을 방사면역측정법으로 정량하였다. 뇌하수체와 정소에서 공통적으로 존재하는 LH-$\beta$ subunit$(LH-\beta})$의 exon에 해당되는 primer를 사용하여 RT-PCR을 시행한 결과 흰쥐 난소에서도 뇌하수체, 정소와 같이 306 bp band가 확인되었고, 정소특이적인 exon에 해당되는 primer를 사용한 결과 정소와 난소에서 예상대로 428 bp band가 검출되었다. 또한 LH, FSH, TSH 그리고 hCG에서 공통적으로 발현되는 common $\alpha$-subunit $(C_\alpha)$의 전사물질도 PCRdml 의해 증폭되었다. 방사면역측정법에서는 LH standard curve와 난소추출물을 사용한 curve가 동일하게 sigmoid 형태를 보임으로서 흰쥐 난소내에 immunoreactive LH가 존재함이 증명되었다. 인위적으로 성적인 성숙을 유도한 PMSG 주사 동물에서 혈중 LH 수준은 주사 후 48시간에 preovulatory LH surge와 유사한 최고 수준을 나타냈으나, 난소내 LH 함량의 경우 주사 24시간 후부터 급격히 감소하여 주사 48, 72시간군까지도 낮은 수준이 유지되었다. 이 결과는 흰쥐 난소의 LH가 생리적으로 조절되고 그 조절방식이 뇌하수체에서와는 다를 가능성을 시사하는 것이다. 본 연구는 흰쥐의 난소에서 LH가 유전자가 발현됨을 최초로 보고한 것이며, LH의 경우 내분비적 경로 (endocrine; 뇌하수체로 부터의 LH)외에도 국부적 경로 (autocrine이나 paracrine; 난소내에서 합성되는 LH)를 통해 난소의 생리와 기능 조절을 담당함을 시사한다.