Many studies have been conducted to improve technology for semen cryopreservation in pigs. However, computer-assisted analysis of sperm motility and morphology is insufficient to predict the molecular function of frozen-thawed semen. More accurate expression patterns of boar sperm proteins may be derived using the isobaric tags for relative and absolute quantification (iTRAQ) technique. In this study, the iTRAQ-labeling system was coupled with liquid chromatography tandem-mass spectrometry (LC-MS/MS) analysis to identify differentially expressed CM10-fractionated proteins between fresh and frozen-thawed boar semen. A total of 76 protein types were identified to be differentially expressed, among which 9 and 67 proteins showed higher and lower expression in frozen-thawed than in fresh sperm samples, respectively. The classified functions of these proteins included oxidative phosphorylation, mitochondrial inner membrane and matrix, and pyruvate metabolic processes, which are involved in adenosine triphosphate (ATP) synthesis; and sperm flagellum and motile cilium, which are involved in sperm tail structure. These results suggest a possible network of biomarkers associated with survival after the cryopreservation of Duroc boar semen.
Fu, Zhicheng;Yun, So Yoon;Won, Jong Hoon;Back, Moon Jung;Jang, Ji Min;Ha, Hae Chan;Lee, Hae Kyung;Shin, In Chul;Kim, Ju Yeun;Kim, Hee Soo;Kim, Dae Kyong
Biomolecules & Therapeutics
/
v.27
no.2
/
pp.193-200
/
2019
Ceramide metabolism is known to be an essential etiology for various diseases, such as atopic dermatitis and Gaucher disease. Glucosylceramide synthase (GCS) is a key enzyme for the synthesis of glucosylceramide (GlcCer), which is a main ceramide metabolism pathway in mammalian cells. In this article, we developed a liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) method to determine GCS activity using synthetic non-natural sphingolipid C8-ceramide as a substrate. The reaction products, C8-GlcCer for GCS, could be separated on a C18 column by reverse-phase high-performance liquid chromatography (HPLC). Quantification was conducted using the multiple reaction monitoring (MRM) mode to monitor the precursor-to-product ion transitions of m/z $588.6{\rightarrow}264.4$ for C8-GlcCer at positive ionization mode. The calibration curve was established over the range of 0.625-160 ng/mL, and the correlation coefficient was larger than 0.999. This method was successfully applied to detect GCS in the human hepatocellular carcinoma cell line (HepG2 cells) and mouse peripheral blood mononuclear cells. We also evaluated the inhibition degree of a known GCS inhibitor 1-phenyl-2-decanoylamino-3-morpholino-1-propanol (PDMP) on GCS enzymatic activity and proved that this method could be successfully applied to GCS inhibitor screening of preventive and therapeutic drugs for ceramide metabolism diseases, such as atopic dermatitis and Gaucher disease.
Synthetic azo dyes are used extensively in herbal medicines to render the medicines more visually attractive to consumers. This study developed and validated a rapid high-performance liquid chromatography (HPLC) method to determine whether synthetic colorants such as Tartrazine, Auramine O, Metanil yellow, Sunset yellow, and Orange II are used extensively in Typha orientalis. To increase the recovery of the synthetic dyes, this method employed containing 50 mM ammonium acetate in 70 % methanol at first extraction and 100 mM HCl in 70 % methanol at second extraction. Five synthetic pigments in Typha orientalis were separated by gradient elution with a mobile phase consisting of acetonitrile and 50 mM ammonium acetate in distilled water at ultra-violet (UV) detection 428 nm or 500 nm. Additionally, this study established the liquid chromatography tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) method to confirm positive samples suspected by HPLC results. The HPLC-UV method had good linearity, indicating r2> 0.999. The recoveries of the samples spiked with three different concentration ranged from 73.8~91.5 %, and relative standard deviation values indicated 0.2~5.2 %. The established LC-MS/MS could successfully identify the synthetic pigments in herbal medicine samples. The study demonstrates that Typha orientalis adulterated by yellowish synthetic dyes can be successfully distinguished when using the HPLC-UV method.
Chathuri K. Marasinghe;Hyun-Woo Kim;Won-Kyo Jung;Jae-Young Je
Korean Journal of Fisheries and Aquatic Sciences
/
v.56
no.1
/
pp.21-27
/
2023
Lotus Nelumbo nucifera seed protein (LSP) was isolated by alkaline solubilization after removing fat and phenolics by hexane and ethanol treatment. Antioxidant peptides from LSP were produced with Alcalase® and pepsin and hydroxyl radical scavenging activities were determined. LSP-Alcalase® hydrolysates showed higher hydroxyl radical scavenging activity than LSP-pepsin hydrolysates. To purify antioxidant peptides, LSP-Alcalase® hydrolysates were subjected to high performance liquid chromatography (HPLC) separation on the C18 column and the active fraction was further purified using a SuperdexTM peptide 10/300 GL column. Finally, the active fraction (F8-2) was evaluated for antioxidant activities by 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH), hydroxyl radical scavenging, and oxygen radical absorbance capacity (ORAC) assays. The EC50 values of the F8-2 were 105.81±0.02 ㎍/mL for DPPH and 32.26±0.02 ㎍/mL for hydroxyl radical and the F8-2 exhibited 7.22 μM trolox equivalent (TE)/100 ㎍ F8-2. Glutathione (GSH), which is a positive control, showed EC50 values of 19.87±0.01 ㎍/mL for DPPH and 15.95±0.03 ㎍/mL for hydroxyl radical and an ORAC value of 14.17±0.03 μM TE/100 ㎍ GSH. Finally, sixteen peptides were identified by liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). Among them, Ile-Tyr and Leu-Tyr showed higher antioxidant scores.
The current investigation entails the characterization of five degradation products (DPs) formed under different stress conditions of loteprednol using liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). In addition, this study developed a stable high-performance liquid chromatography (HPLC) method for evaluating loteprednol along with impurities. The method conditions were meticulously fine-tuned which involved the exploration of the appropriate solvent, pH, flow of the mobile phase, columns, and wavelength. The method conditions were carefully chosen to successfully resolve the impurities of loteprednol and were employed in subsequent validation procedures. The stability profile of loteprednol was exposed to stress degradation experiments conducted under five conditions, and DPs were structurally characterized by employing LC-MS/MS. The chromatographic resolution of loteprednol and its impurities along with DPs was effectively achieved using a Phenomenex Luna 250 mm C18 column using 0.1 % phosphoric acid, methanol, and acetonitrile in 45:25:30 (v/v) pumped isocratically at 0.8 mL/min with 243 nm wavelength. The method produces an accurate fit calibration curve in 50-300 ㎍/mL for loteprednol and LOQ (0.05 ㎍/mL) - 0.30 ㎍/mL for its impurities with acceptable precision, accuracy, and recovery. The stress-induced degradation study revealed the degradation of loteprednol under basic, acidic, and photolytic conditions, resulting in the formation of seven distinct DPs. The efficacy of this method was validated through LC-MS/MS, which allowed for the verification of the chemical structures of the newly generated DPs of loteprednol. This method was appropriate for assessing the impurities of loteprednol and can also be appropriate for structural and quantitative assessment of its degradation products.
Park, Hyunjin;Kim, Joohye;Kang, Hui-Seung;Cho, Byung-Hoon;Oh, Jae-Ho
Journal of Food Hygiene and Safety
/
v.35
no.2
/
pp.109-117
/
2020
This study aimed to develop an analytical method for determination of 18 dyes in livestock and fishery products by liquid chromatograph-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). The developed method was validated for linearity, accuracy, limit of quantifications (LOQ) and recovery based on the CODEX guideline (CAC/GL-71). Target matrices (beef, pork, chicken, egg, milk, flatfish, eel, and shrimp) were extracted using acetonitrile (containing 1% of acetic acid) and then, purified with C18 and primary secondary amine (PSA). Calibration linearity was obtained (r2>0.98) and LOQs were 0.002 mg/kg in animal products. The recoveries of dyes were ranged from 63 to 112% and relative standard deviations (RSDs, %) were less than 15%. The residues of 18 dyes were investigated in real samples (n=124) collected from retail markets in South Korea. As a result, a total of seven samples showed positive results for target analytes in fish samples. However, there was no violation according to the maximum residue limits set by the Korean Food Code. The proposed method will be used for routine analysis of dye residues in livestock and fishery products.
Pharmaceuticals and personal care products (PPCPs) are emerging contaminants in the aquatic environment. Many pharmaceuticals are not completely removed during wastewater treatment, leading to their presence in wastewater treatment effluents, rivers, lakes, and ground water. Here, we developed analytical methods for monitoring ten pharmaceuticals from surface water by LC/ESI-MS/MS. For sample clean-up and extraction, MCX (mixed cation exchange) and HLB (hydrophilic-lipophilic balance) solid-phase extraction (SPE) cartridges were used. The limits of detection (LOD) in distilled water and the blank surface water were in the range of 0.006 - 0.65 and 1.66 - 45.05 pg/mL, respectively. The limits of quantitation (LOQ) for the distilled water and the blank surface water were in the range of 0.02 - 2.17 and 5.52 - 150.15 pg/mL, respectively. The absolute recoveries for fortified water samples were between 62.1% and 125.4%. Intra-day precision and accuracy for the blank surface water were 2.9% - 24.1% (R.S.D.) and -16.3% - 16.3% (bias), respectively. In surface wastewater near rivers, chlortetracycline and acetylsalicylic acid were detected frequently in the range of 0.017 - 5.404 and 0.029 - 0.269 ng/mL, respectively. Surface water near rivers had higher levels than surface water of domestic treatment plants.
In this work, we isolated a surface layer protein (SLP) from a Bacillus thuringiensis (Bt) strain to evaluate it cytotoxic effects against MDA-MB-231 human breast cancer cells. AP11 was selected from a g roup of Bt strains using SLP olig onucleotides developed from Bacillus conserved regions. The AP11 strain was grown in Luria Bertani medium until the late exponential phase; an 86 kDa protein was extracted using 5 M LiCl and identified by liquid chromatography-tandem mass spectrometry. It corresponded to a multispecies SLP highly similar to previously described SLPs in Bt. The MDA-MB-231 breast cancer cells $LC_{50}$ was obtained using $0.25{\mu}g/ml$ of the isolated SLP. HaCat non-cancerous cells presented 90% survival using the same protein concentration. Our data suggest that SLP cytotoxicity against MDA-MB-231 could be induced by an interaction with the CDH11 cell membrane receptor.
Foodborne contamination and salmonellosis caused by Salmonella Enteritidis (S. Enteritidis) are a significant threat to human health and poultry enterprises. Outer membrane vesicles (OMVs), which are naturally secreted by gram-negative bacteria, could be a good vaccine option because they have many biologically active substances, including lipopolysaccharides (LPS), outer membrane proteins (OMPs), and phospholipids, as well as periplasmic components. In the present study, we purified OMVs derived from S. Enteritidis and analyzed their characteristics through silver staining and sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis. In total, 108 proteins were identified in S. Enteritidis OMVs through liquid chromatography tandem mass spectrometry analysis, and OMPs, periplasmic proteins, and extracellular proteins (49.9% of total proteins) were found to be enriched in the OMVs compared with bacterial cells. Furthermore, native OMVs used in immunizations by either the intranasal route or the intraperitoneal route could elicit significant humoral and mucosal immune responses and provide strong protective efficiency against a lethal dose (~100-fold $LD_{50}$) of the wild-type S. Enteritidis infection. These results indicated that S. Enteritidis OMVs might be an ideal vaccine strategy for preventing S. Enteritidis diseases.
Formic acid is a representative carboxylic acid that inhibits bacterial cell growth, and thus it is generally considered to constitute an obstacle to the reuse of renewable biomass. In this study, Saccharomyces cerevisiae was used to elucidate changes in protein levels in response to formic acid. Fifty-seven differentially expressed proteins in response to formic acid toxicity in S. cerevisiae were identified by 1D-PAGE and nano-liquid chromatography-tandem mass spectrometry (nano-LC-MS/MS) analyses. Among the 28 proteins increased in expression, four were involved in the MAP kinase signal transduction pathway and one in the oxidative stress-induced pathway. A dramatic increase was observed in the number of ion transporters related to maintenance of acid-base balance. Regarding the 29 proteins decreased in expression, they were found to participate in transcription during cell division. Heat shock protein 70, glutathione reductase, and cytochrome c oxidase were measured by LC-MS/MS analysis. Taken together, the inhibitory action of formic acid on S. cerevisiae cells might disrupt the acidbase balance across the cell membrane and generate oxidative stress, leading to repressed cell division and death. S. cerevisiae also induced expression of ion transporters, which may be required to maintain the acid-base balance when yeast cells are exposed to high concentrations of formic acid in growth medium.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.