앞서 본 연구실에서는 도롱뇽(Hynobius leechii) 다리 재생 과정중 기존의 조직들이 와해되고 조직 및 그 구성 세포의 분화 양성이 소멸되는 탈분화 과정중 시소솜 acid phosphatase의 활성도가 급격히 증가함을 보고한바 있다. 본 연구에서는 다리 재생 과정에서 이 효소의 시간적, 공간적 분포 및 발현 양상을 알아보기 위해 단일 항체를 만들었다. 리소솜 acid phosphatase에 대한 22단일 항체균중 5항체군이 탈분화 조직과 강한 면역반응을 보였으며 이들의 시간적, 공간적 반응 양상은 조직의 탈분화 상태와 일치하였다. 이 결과는 탈분화 과정시 증가하는 리소솜 acid phosphatase의 활성도가 이 효소의 시간적, 공간적 분포 및 발현 양상과 밀접히 연관되어 있음을 반영하며 탈분화 과정중 이 효소의 역할이 매우 중요함을 시사하고 있다. Immunoblotting 결과 이들 단일 항체군은 리소솜 acid phosphatase의 monomer인 53kDa밴드를 인식하였다. 한편 도롱뇽의 리소솜 acid phosphatase에 대한 단일 항체와 타종의 LAP에 대한 cross-reactivity를 immunoblot으로 조사한 결과 양서류인 axolotl(Ambystoma mexicanum)과 Xenopus laevis에서는 유사한 분자량 band에서 반응이 나타났으나 그외 생쥐, 초파리, C.elegans에서는 cross-reactivity가 없는 것으로 조사되었다. 이러한 결과들은 본 연구에서 만들어진 단일 항체가 한국산 도롱뇽의 리소솜 acid phosphatase를 특이적으로 인식하며 나아가 양서류내에서는 이 효소의 상동서이 높음을 시사하고 있다.
본 연구는 체외 충격파 치료를 이용하여 신경 손상 흰쥐의 신경재생에 미치는 영향을 알아보았다. 본 연구에서는 체중이 230~280g고 생후 6주의 Sprague-Dawley계 수컷 흰쥐 30마리를 사용하였다. 무작위 추출방법을 이용하여 좌골신경 손상 후 체외 충격파 치료를 받는 실험군(n=15)과 좌골신경 손상 후 체외 충격파 치료를 받지 않는 대조군(n=15)으로 나누어 실험을 실시하였다. 본 연구에서 체외충격파 치료를 적용하기 위해서 체외 충격파 치료기(OPTIMUS, SALUS TALENT 3, Korea)를 이용하였으며 낮은 출력(low intensity)을 이용하여 오른쪽 후지의 좌골신경 압좌 부위에 적용하였다. 본 연구에서는 다트피쉬 소프트웨어를 이용하여 환측 후지의 입각기 시간과 보폭거리를 측정하였다. 환측 후지의 입각기 시간과 보폭거리의 그룹 간 변화량 비교에서 체외 충격파 치료를 적용한 실험군과 체외 충격파 치료를 적용하지 않은 대조군 사이에는 통계학적으로 유의한 차이가 있었다. 결론적으로 체외 충격파 치료는 신경재생에 긍정적인 영향을 미친다.
High level, major limb amputation above the wrist and ankle joint has some characteristic problems because of the large muscle mass and poor potential for nerve regeneration. As an adjunct method to reduce warm ischemic time prior to bony stabilization, temporary vascular shunting by simple catheterization has been performed, which has not been associated with any significant complication and has improved on success rate in replantation surgery. The authors have experienced 198 cases replantation of amputated limbs and digits from September, 1983 at the Korea medical center, Guro hospital, of which, 13 cases of successful replantation of amputated limbs by avulsion injury above the wrist and ankle joint level, which is generally considered as contraindication, were followed up for average 4.5 years(minimum 1.5 to maximum 8.4 years) on terms of survival rate, function and appearance. The clinical analysis upon these cases is to be presented with review of references.
Background: This study was undertaken to observe the functional changes of the hind limb and histopathological changes in the sciatic nerve after an injection of alcohol or phenol, which are commonly used neurolytic agents, highlighting the time of recovery. Methods: Forty-eight Sprague-Dawley rats weighing 200-300 g were used for the experiment. Histopathological changes under the electron microscope, were observed in the distal part of the sciatic nerve, into which 0.1 ml of alcohol or phenol was injected. This was severed in 3 rats of each group at 10 minutes, 1 hour, 24 hours, 3 days, 1, 2, 4 and 6 weeks later. The functional changes in the hind limbs were observed for 6 weeks by noting their walking pattern. Results: Following the injection of alcohol or phenol into the right sciatic nerve, the right hind limb showed a severe pronounced motor weakness and obvious gait changes. About 2 weeks later, gradual improvement of gait changes began, and after 6 weeks, the motor weakness and gait changes were no longer perceptible in both groups. The findings of any histopathological change were similar in both alcohol or phenol groups. At 10 minutes after injection, destructive lesions were confined to the unmyelinated fibers and the myelin sheath of small the myelinated fibers. On the 3rd day and at 1 week, pathologic changes in axonal fibers and Schwann cells were in being phagocytized in spite of myelin restitution. From 2 to 4 weeks, axonal regeneration and remyelination appeared at the same time a myelin disintegration and axonolysis. At 6 weeks, neural regeneration was similar to that of the contralateral control group. Conclusions: These results suggest that functional and histopathological changes, after injection of neurolytics into the peripheral nerves, are quite similar in both alcohol and phenol groups. The progression of functional and histopathological changes become more obvious according to the time interval following the injection. Consequently, side effects that develop following the use of alcohol or phenol may begin to improve around the time that nerve regeneration occurs, i.e., two to four weeks later.
재생중인 양서류의 다리에 레티노익산을 처리하면 패턴 복제가 유발되며 이러한 현상은 탈분화 정도와 깊이 연관이 있다. 본 연구에서는 한국산 도롱뇽(Hynobius leechii)과 멕시코산 도롱뇽의 일종인 엑소로틀(Ambystoma mexicanum)의 다리 재생 과정에서 탈분화 과정에 관여할 것으로 추정되는 트립신 및 키모트립신과 유사한 단백질 분해 효소의 활성도를 재생 단계에 따라 조사해 봄으로써 이들 단백질 분해효소의 활성도와 레티노익산에 의해 증가되는 탈분화 상태의 정도사이에 상관 관계가 있는지를 알아 보고자 하였으며 다리 생산 기간중 상기 효소의 활성도 변화에 종 특이적 차이가 존재하는 지를 알아보고자 하였다. 연구 결과, 이들 효소의 활성도는 탈분화시기에서 최대에 도달함을 알수 있었고 레티노익산 처리는 트립신 유사 단백질 분해 효소의 활성도를 증가시키는 것으로 나타났다. 이러한 효과는 한국산 도롱뇽에서 두드러졌고 이는 레티노익산 처리에 의한 반응에 종 특이적 차이가 있음을 반영하는 것으로 해석 되었다. 본 연구 결과는 트립신 및 키모트립신 유사 단백질 분해 효소가 재생중인 다리의 탈분화 과정에 중요한 작용을 하고 있으며, 이들 단백질 분해 효소가 레티노익산 처리에 의한 탈분화 과정의 강화에 관여하리라는 것을 암시한다.
Nerve allografts as a bridge of regeneration is useful in the repair of peripheral nerve defect resulting from trauma, and leprosy. But immunological rejection and complicated scar formation is an unavoidable problem in the application of allogeneic nerves. This article is intended to study of the regeneration of allogeneic nerve grafts in rats with histopathologically, scanning electron microscopically. 24 adult male Sprague-Dawley rats were used as the experimental animals. A 2cm skin incision was made on the lateral aspects of limb, parallel to femur. Segments of sciatic nerve trunk taken from rats, 10mm was resected at the middle of the thigh, nerve graft was inserted between the ends of gaps with perineural and epineural suture method with 10-0 prolene. Obsrevation was made simultaneously at 3 day, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8 weeks after surgery. The results were as follows. 1. In light and electronic microscopic studies, marked degenerative change of the graft nerves were observed at 2 weeks after surgery. 2. After surgery, blood clot fromation was observed at 3 day, granualtion tissue formation was observed at 2 week, and fibrous tissue proliferation was observed at 3 week. 3. In change of nerve fiber, there were Wallerian degeneration at early stage, decrease in degeneration at 4 week but degeneration of myeline was continuded at 8 week. 4. At 4 week, schwann cells proliferate at its cut ends to join with the distal and proximal stump of the damaged nerve. 5. Fibrous scar tissues are formed at 2 weeks and increased progressively in 8 weeks, which was interrupted the regeneration of grafted nerve.
The neuroma is a tumor of nerve tissue that partially or completely severed through incomplete regeneration process. Neuromas that formed in the stump of a limb following amputation is a cause of the stump pain and can make intractable pain. The authors report a rare case of 36-year-old man with neuroma at stump, which has been recurred three times. This patient was treated with end-to-end neurorrhaphy after resecting neuroma. Follow-up at out-patient clinic showed satisfied result.
한국산 도롱뇽 유생의 다리재생에 미치는 retinoic acid의 효과를 알아보았다. 도롱뇽 유생의 다리를 distal zeugopodium 또는 distal stylopodium 부위에서 절단하고 절단 후 4일째에 복강내 주사방법으로 RA를 처리한 결과 근원위 축상에서 재생된 골격이 복제되어 근위부화한 형태를 나타내었다. RA처리에 따른 골격 재생이 평균 근위 부화정도는 처리량이 증가와 더불어 증가하였으며 또한 절단부위를 달리하였을 경우에도 영향을 받았다. 근원위 축상에서 평균 근위부화정도의 최대치에 근접한 값은 처리량을 150 $\mu$ g/g body wt.로 했을 때 얻어졌으며 이 처리량을 넘어서는 경우에는 재생의 저해 혹은 주변으로부터의 골격복제 현상이 나타났으며 그 빈도 역시 처리량의 증가와 함께 상승하였다. 이러한 실험결과는 RA처리에 의하여 유발되리라고 보여지는 positional value의 변화가 근원위축을 비롯한 3개의 주요 축상에서 점진적으로 일어남을 시사하며, zeugopodium의 복제가 stylopodium의 복제보다 쉽게 일어난다는 사실은 근원위축상에서 세포들의 RA에 대한 민감성이 동이하지 않거나 혹은 positional value의 배열양상이 직선적이 아님을 시사하고 있다.
Objectives The purpose of this study is to evaluate the bone healing effect of Dohongsamul-tang (Taohongsiwu-tang; DH) on femur fractured mice. Methods Mice were randomly divided into 4 groups (naive, control, positive control and DH). All groups except naive group were subjected to bone fracture on both hind limb femurs. Naive group received no treatment at all. Control group was fed with normal saline, and positive control group was orally medicated with tramadol. DH-treated group was orally medicated with DH. We analysed the levels of BMP2, COX2, Col2a1, Sox9, Runx2, and Osterix genes on 3, 7 and 14 days after fracture. Alkaline phosphatase, aspartate aminotransferase, alanine aminotransferase, blood urea nitrogen, creatinine, total cholesterol, and triglyceride levels were measured for safety assessment. Results In morphological, histological analysis, callus formation process of DH-treated group was faster than the control group. BMP2, Sox9 gene expression were significantly increased at 7 days after fracture compared to the control group. COX2, Col2a1 gene expression were significantly increased at 14 days after fracture compared to the control group. Total cholesterol was significantly increased by DH at 3 days. Triglyceride was significantly decreased by DH at 3, 7 days after fracture compared to the control group. Conclusions Dohongsamul-tang promoted bone healing process after fracture by stimulating the bone regeneration factors. And DH shows no hepatotoxicity, nephrotoxicity and serum lipid abnormality. In conclusion, it seems that DH helps to promote fracture regeneration after bone fracture by regulating gene expressions related to bone repair.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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