It has been known that Ganoderma lucidum and Lentinus edodes have anticancer activity and immune enhancing activity. These two mushrooms were grown in liquid culture and harvested. From these mycelia, DNA was isolated and EtBr-CsCl density gradient ultracentrifugation was performed to purify it further. Then mitochondrial DNA was isolated by bisbenzimide-CsCl density ultracentrifugaton. Mitochondrial DNA of Ganoderma lucidum was digested by restriction enzymes, EcoR I, Hind Ⅲ, and Pst I, then electrophoresed. It showed 12, 22, 4 fragments. Mitochondrial DNA of Lentinus edodes was digested by EcoR I. Electric pattern showed 6 fragments. 4 fragments had appeared by Pst 1 digested mitochondrial DNA. Hind ill couldn't digest mitochondrial DNA of Lentinus edodes. Mitochondrial DNA of fusants was isolated to compare to those of parents. The results showed that fusant P₂S₄has new, recombined mitochondrial DNA. But P₂S₄had the same DNA that Ganoderma lucidum had.
경기도 광릉에서 채집한 자실체로부터 분리한 Lentinus edodes IY105균을 배양하여 얻은 균사체를 알칼리로 추출하여 얻은 물질이 면역계와 sarcoma 180이 이식된 mouse에 미치는 영향을 검토하였다. Lentinus edodes IY105 배양균사체의 알칼리 추출물은 항보체활성과 alternative complement hemolytic 활성을 가지고 있었고, carbon clearance 활성을 가지고 있었고, carbon clearance 활성을 나타내는 것으로 보아 mouse의 망내계에 존재하는 macrophage를 활성화시켜 이 물질에 대한 탐식기능을 증가시킴을 알수 있었다. 또한, 이물질은 mouse의 용혈반 형성 세포수를 증가시키는 것으로 보아 항체생산 자극효과가 있는 것으로 추측되었으며, 종양세포인 sarcoma 180이 이식된 mouse의 암을 50 정도 억제하는 효과를 나타내었다. 알칼리 추출물의 성분을 분석한 결과, 당 17, 단백질 42로 구성된 단백질다당체가 주성분으로 단백다당체는 16종의 아미노산과 52종류의 당으로 구성되어 있었다.
표고버섯 균사체가 항당뇨 효과에 미치는 영향을 검토하기 위해 당뇨가 유발된 흰쥐에 표고버섯 균사체을 7일간 급여시킨 후 혈장 glucose, total cholesterol, triglyceride 및 ALT, AST 활성을 관찰하였고, 표고버섯 균사체 생장의 최적 배양 조건을 조사하였다. 균사체 생장을 위한 최적의 pH와 온도는 5와 $30^{\circ}C$로 나타났으며, 발효조배양시에는 최대 균사체 생장(8.13g/l)이 진탕배양일 때보다 6일 단축되었다. Hypoglycemic 효과에서 혈장 glucose는 당뇨 유발군에서 표고버섯 균사체 급여군이 대조군보다 23.0%가 유의하게 감소하였으며, 혈장 total cholesterol과 triglyceride는 20.3%와 27.1%로 낮게 나타났다. 또한 혈장 ALT와 AST 활성은 당뇨 대조군에 비해 표고버섯 균사체 급여군이 29.6%와 34.3% 낮은 활성을 보였다.
Differential display of reverse transcription(DDRT)-PCR was conducted to have a profile of the differentially expressed genes during the formation of fruiting body of Lentinus edodes. The lines of L. edodes(ImHyup-1) employed were cultivated in the artificial blocks of sawdust, and the fruiting body was induced from the mycelia or the mass protruded from the brown surface of the sawdust blocks. RNAs were prepared from the four different developmental stages; mycelial, primordial, and stipes and pileus of fruiting body. The fragments of cDNA were synthesized from the combinations of the arbitrary primers and 3' one anchored Oligo-dT primer. Twelve combinations using the primers have been tested, and among them nineteen bands were identified as differentially expressed. Those genes were further analyzed by DNA sequencing and followed by homology search. Characterization of one clone was conducted as a preliminary data and more are under investigation.
This study investigated the effects of mycelia of Lentinus edodes mushroom-cultured Glycyrrihiza radix(LMG) on cancer cell lines and sarcoma 180(S-180), as well as on human mast cells. In an anti-cancer tests using Hep3B(hepatic cancer cell), MCF-7(breast cancer), and HeLa(uterine cancer) cells, LMG extract exhibited greater anti-proliferation effects than Glycyrrihiza glabra(GG) extract. LMG extract multiplication restraining effects were 60% that of ethanol at 3 mg/mL extract also displayed tumor suppressive effects in mice injected with S-180 cells. The growth-inhibition rates against tumor cells were 56% for LMG and 37% for GG. When LMG was added to human mast cells, the Intensity of RT-PCR products using primers($FC{\varepsilon}RI\;c-kit$) decreased. significantly compared with that of control. These results suggest that Lentinus edodes Mushroom-Cultured Glycyrrhiza glabra has an anti-proliferation effects against cancer cell lines(Hep3B, MCF-7 and HeLa) and S-180 tumors and will be also beneficial in treating allergic reactions.
Mycelia of Pleurotus ostreatus, Phellinus linteus, Ganoderma lucidum and Lentinus edodes were cultured in the selected cereals to generate functionally active cereals. The optimum water contents for the mycelial growth were 50%(wt/wt) for brown rice, barley and soybean and 75% for wheat and corn, respectively. P. ostreatus grew well in the most cereals while the mycelial growth of P. linteus, G. lucidum and L. edodes in soybean were siginificantly retarded. The contents of β-glucan and glucosamine in the mycelial cereals were determined. Wheat cultured with mushroom mycelia showed high ß-glucan content. Especially, wheat with G. lucidum contained the highest value of 26.16%. Soybean cultured with G. lucidum showed two-fold increase in glucosamine content with 9.63% of total mass while wheat showed 7.91%. Overall, wheat cultured with G. lucidum was the best functional cereal in terms of β-glucan and glucosamine contents.
인삼박의 가용성 추출물을 용출시킨 후 남은 잔여 묵인 인삼박에 상황버섯, 영지버섯, 운지버섯, 표고버섯 균사체를 접종ㆍ배양하여 얻어진 인삼박 균사체 추출액의 전자공여능 및 간암세포(Hep3B)와 고형암(S-180)의 증식에 미치는 영향을 조사하였다. 인삼박 균사체의 전자공여능은 500-10,000ppm 범위에서 농도가 진할수록 높게 나타났으며 운지가 4종류의 균사체 추출물 중 가장 높았다. 간암세포의 형태변화 및 증식 억 제 에 미 치 는 영 향은 에 탄을 추출물이 물 추출물보다 효과적이었으며, 60% 에탄을 추출물 5,000 ppm에서 상황, 영지,운지에 비해 표고가 99.1%로 가장 강한 세포증식억 제 효과를 나타내었다. S-180 고형 암 억제효과는 대조군에 비해 운지가 65%로 가장 컸으며 영지 61%, 표고 56%, 상황 59%의 고형암 억제효과를 나타내었다. 따라서 인삼박을 이용하여 배양된 버섯 균사체가 간암세포와 고형암의 증식 억제에 효과적인 것으로 관찰되므로써 항암물질의 자원으로서 그 활용성이 기대된다고 하겠다.
한국산 표고버섯 산련 1호를 C/N비가 13.1인 버섯 완전액체배지에서 배양하여 균사체를 증식시킨 후 생리활성을 보이는 단백다당체를 추출하였다. 표고버섯 균사체 액체배양시 생성되는 단백다당체는 균사체 세포벽에 약 80%가 존재하고, 약 20%정도는 세포밖으로 분비하는 것으로 나타나 단백다당체의 추출은 균사체가 함유된 배양액 전체를 이용하여 추출하는 것이 높은 수율을 얻을 수 있었다. 그리고 균사체로부터 단백다당체의 추출방법으로 열수추출 및 glass bead mill로 세포벽을 파쇄한 후 열수추출, cellulase 처리 후 열수추출을 비교한 결과 물리적으로 세포벽을 파쇄한 후 60분간 열수추출하는 것이 배양액 100 mL당 약 930 mg의 조단백다당체가 추출되어 수율이 가장 높았다. 추출한 조단백다당체를 사용하여 protease 처리, 그리고 DEAE-cellulose 및 Sephadex G-100 column chromatography를 통하여 단백다당체를 정제한 후 단계별 시료에 대한 mouse leukemic cell인 $P_{388}$의 증식억제는 53.7, 62.2, 93.7, 97.4%로 정제도가 높아짐에 따라 증가하는 것으로 나타났다. Sephadex G-100 column으로 처리한 정제 단백다당체를 TLC/FID로 분석한 결과 단일 peak로 나타나 순수물질임을 확인하였다. 그리고 단백다당체의 성분을 분석한 결과 다당함량은 46.1%로 구성단당류는 glucose 및 galactose, xylose, mannose로 구성되어 있었고, 단백질은 약 7.3%로 주로 proline 및 glycine의 함량이 높았으며 methionine 및 leucine은 거의 없는 것으로 밝혀졌다. 그외에 무기질로서 Na, K, Zn, Ca 등이 존재하는 것으로 나타났다.
국내에서 자생하고 있는 75균주의 고등균류를 액체배양하여 얻은 다당류를 $CCl_4$에 의해 독성이 유발된 초대배양 간세포에 가하여 간세포 독성에대한 다당류의 보호효과를 glutamic pyruvate transaminase(GPT)활성을 측정하여 검색한 결과는 다음과 같다. 75균주의 고등균류 중 간세포 보호효과를 나타낸 것은 60균주로 Ganoderma lucidum 15균주 중 13균주, Lentinus edodes 7균주 중 5균주, Pleurotus ostereatus 1균주, Coriolus versicolor 5군주 중 4균주, Lyophyllum spp. 2균주, Grifori frondosa 7균주, Agaicus spp. 3균주, Schizophyllum commune 16균주 중 14균주, Cordyceps spp. 18균주 중 11균주등이었다. 상기 고등균류 중 GPT활성이 80%이하로 나타나, 비교적 간세포 보호효과가 우수한 것은 Ganoderma lucidum IY003 및 IY009, Lentinus edodes IY103, Lyophyllum sp. IY402, Agaicus sp. IY701 및 IY703, Schizophyllum commune IY804, IY810 및 IY818, Cordyceps sp. IY902등 10균주였으며, 이들의 GPT활성은 각각 80.0%, 75.5%, 78.2%, 75.2% 73.6%, 75.0%, 75.1%, 77.7%, 77.5% 및 78.4%로 나타났다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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