• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제18권12호
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• pp.1953-1957
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• 2008

Recombinant Lactobacillus strains have been constructed using gene splicing by overlap extension (SOE). Primers were designed of which one end of an amplified product contained complementary sequences for an end of other amplified fragment. For efficient matching, we used an asymmetric PCR step that was effective at generating an excess of strands that would anneal in the final PCR. CP12, a recombinant fragment consisting of the integrase gene and attachment site of the bacteriophage A2, was constructed and inserted into the genome of Lactobacillus casei ATCC 393, yielding Lb. casei ATCC 393::XCP12. Another recombinant Lb. casei strain was constructed, where the egfp gene was a part of the construction. The EGFP produced from Lb. casei ATCC 393::XCEGFP14 was detected by Western blot hybridization. This simple and widely applicable approach has significant advantages over standard recombinant DNA techniques for Lactobacillus species.

• Journal of Animal Science and Technology
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• 제48권5호
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• pp.719-726
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• 2006

본 실험은 가수분해 시킨 유청단백질과 Lb. casei HY2782의 세포 추출물을 인간 전립선 세포에처리하여 세포 내 glutathione 농도 상승효과와 산화제 tbutyl hydroperoxide (TBHP)에 의한핵산 손상 방지 효과를 알아보기 위한 실험으로 전립선 세포 RWPE1 cells와 PC3MMM2 cells에 hydrolyzed WPI(500g/m)를 48시간 동안 처리 시, 가수분해 시키지 않은 WPI 보다 각각 28.2%, 38.4%씩 GSH 농도가 증가하는 것을 유의적으로 확인할 수 있었고(p<0.05), 카제인의 경우 RWPE1 cells and PC3MMM2 cells에 처리 시 가수분해 시킨 카제인과의 유의차가 보이지 않았으며 (p<0.05), glutathione 합성저해제인 Buthionine sulfoximin (BSO) 처리 시 Glutathione 농도가 현저하게 낮아지는 것을 확인할 수가 있었다(Anderson, 1998). 전립선 세포 RWPE1 cells 와 PC3MMM2 cells에 Lb. casei HY2782 세포 추출물 처리 시 PC3MMM2 cell에서는 GSH의 농도가 유의적으로 증가하는 것을 확인 할 수 있었고(p<0.05), RWPE1 cell에서는 증가 성향을 확인 할 수가 있었다.가수분해 시킨 유청단백질과 Lb. casei cell 세포추출물 처리 시 산화제에 의한 세포의 DNA 손상 억제정도와 사멸율의 변화를 확인 한 결과, 가수분해 WPI를 처리 후 Oxidant tbutyl hydroperoxide (TBHP)(500mM)를 이용하여 PC3MMM2 세포에 산화적인 스트레스를 주었을 시, TBHP만 처리한 구에서는 62.0%의 생존율을 나타내었고, glutathione 합성저해제인 BSO를 첨가시킨 처리구에서는 33.7%의 생존율을 나타내었다. 가수분해 시킨 WPI와 카제인 처리구에서는 각각 86.7%, 63.6%의 생존율을 나타내었고, WPI와 BSO를 함께 처리한 구에서는 71.5%의 생존율을 나타내었다. 이는 BSO에 의해 GSH의 생성이 저해되어 나타난 결과로 보여지며(Anderson, 1988), 가수분해시킨 WPI 가 가수분해 시킨 카제인보다는 높은 생존율을 나타내는 것을 유의적으로 확인할 수가 있었다. (p<0.05) Lb. casei 세포 추출물처리에 의한 생존율에서는 가수분해시킨 WPI와 유사한 수준의 82.4%의 생존율을 보였다. 가수분해시킨 유청단백질과 Lb. casei cell 세포추출물에 의한 세포에서의 glutathione 농도 증가에 의해 산화제에 의한 DNA의 손상이 적었던 것으로 사료되어지고, 이로 인해 생존율이 높았던 것으로 판단된다.

• Preventive Nutrition and Food Science
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• 제14권2호
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• pp.162-167
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• 2009

Various fermented foods were screened in search of food-grade bacteria that produce bacteriocins active against Gram-negative pathogens. An isolate from a mold-ripened cheese presented antibacterial activity against Gram-positive and Gram-negative bacteria. The most active isolate was identified as Lactobacillus casei by a biochemical method, ribotyping, and membrane lipid analysis, and was designated as OSY-LB6A. The cell extracts of the isolate showed inhibition against Escherichia coli p220, E. coli O157, Salmonella enerica serovar Enteritidis, Salmonella Typhimurium, and Listeria monocytogenes. The antibacterial nature of the cell extract from the isolate was confirmed by eliminating the inhibitory effects of acid, hydrogen peroxide, and lytic bacteriophages. The culture supernatant and cell extract retained antibacterial activity after heating at $60{\sim}100^{\circ}C$ for $10{\sim}20$ min. The activity of the cell extract from Lb. casei was eliminated by pronase and lipase. Finally, the cell extract showed a bactericidal mode of action against E. coli in phosphate buffer solution, but it was bacteriostatic in broth medium and food extracts.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제18권2호
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• pp.255-258
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• 2005

Several commercial yogurt starter cultures (L. acidophilus LA5, L. casei 01, L. acidophilus LA100, L. bulgaricus LB207 and L. rhamnosus GG744) were investigated for antioxidant activity by using in vitro assays. From the results of the present work, all strains tested showed varying degrees of antioxidant activity. L. bulgaricus LB207 showed the highest antioxidant activity, with a linoleic acid peroxidation inhibition of 81.3%. Hydroxy radical scavenging activity, ferrous iron chelating activity, reducing power and superoxide dismutase (SOD) activity were also studied. L. bulgaricus LB207 showed the highest hydroxy radical scavenging activity and L. casei 01 showed the highest chelating activity. L. bulgaricus LB207 and L. acidophilus LA100 showed good reducing power. All the strains in this study showed low SOD activity. The results of the present work suggest that antioxidant activity of L. bulgaricus LB207 due to its strong hydroxy radical scavenging activity and reducing power.

• Food Science and Biotechnology
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• 제17권6호
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• pp.1221-1227
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• 2008

The application of the cellulase gene (celA) as a selection marker of food-grade integration system was investigated in Lactobacillus (Lb.) casei, Lactococcus lactis, and Leuconostoc (Leu.) mesenteroides. The 6.0-kb vector pOC13 containing celA from Clostridium thermocellum with an integrase gene and a phage attachment site originating from bacteriophage A2 was used for site-specific recombination into chromosomal DNA of lactic acid bacteria (LAB). pOC13 was also equipped with a broad host range plus replication origin from the lactococcal plasmid pWV01, and a controllable promoter of nisA ($P_{nisA}$) for the production of foreign proteins. pOC13 was integrated successfully into Lb. casei EM116, and pOC13 integrants were easily detectable by the formation of halo zone on plates containing cellulose. Recombinant Lb. casei EM 116::pOC13 maintained these traits in the absence of selection pressure during 100 generations. pOC13 was integrated into the chromosome of L. lactis and Leu. mesenteroides, and celA acted as an efficient selection marker. These results show that celA can be used as a food-grade selection marker, and that the new integrative vector could be used for the production of foreign proteins in LAB.

• 한국식품과학회지
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• 제47권2호
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• pp.204-210
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• 2015

본 연구에서는 시중에 유통 중인 한국전통 발효주인 막걸리로부터 유산균을 분리하였다. 분리된 유산균을 동정하기 위해 16S rRNA 부분을 PCR하여 RFLP법으로 패턴을 분류하여 그룹을 나누었다. 유산균 총 수를 확인한 결과 F를 제외한 모든 샘플에서 $10^6CFU/mL$ 이상으로 확인되었고, 효모균의 수는 약 $10^7-10^8CFU/mL$로 기존의 연구와 비교해 보았을 때, 대체적으로 차이가 거의 없는 것을 확인하였다. 나누어진 패턴을 토대로 염기서열 분석 결과 총 5종의 유산균을 확인 할 수 있었고, 5종의 유산균은 Lb. plantarum/pentosus, Lb. casei/paracasei/rhamnosus, Lb. crustorum, Lb. brevis, Lb. fermentum으로 확인되었다. 기존 연구에서 막걸리로부터 동정된 유산균으로는 Lb. pseudomesenteroides, Lb. paracasei, Lb. arizonensis, Lb. plantarum, Lb. harbinensis, Lb. parabuchneri, Lb. brevis, Lb. hilgardii, Lb. fermentum이 있는데, 선행 연구들과의 가장 큰 차이점으로는 Lb. crustorum이 분리되었고, 우점종으로 확인된 Lb. plantarum/pentosus와 Lb. casei/paracasei/rhamnosus와 같은 경우 다양한 subspecies가 존재함을 확인할 수 있었다. 또한 Lb. plantarum, Lb. brevis, Lb. paracasei 에서 GABA가 생성됨을 확인할 수 있었다. 본 연구를 통해 막걸리로부터 유산균을 분리, 동정하고, 분리한 유산균의 GABA 생성능력을 규명함으로써, 차후 유산균 분리 및 다양한 기능성 물질 탐색을 할 수 있을 것이라 사료된다.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제6권3호
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• pp.119-126
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• 1991

Penicillium citrinum의 생육과 citrinin 생성에 젖산균이 미치는 영향을 조사하기 위하여 Penicillium citrinum을 치이즈 열성균인 Lactobacillus casei 및 Lactobacillus Bulgaricus와 혼합배의를 실시하였다. 즉 glucose를 7% 첨가한 APT 배지에 공식균을 각각 독립배의한 경우(Pc, Lb 및 Lc) , Penicillium citrinum 과 Lactobacillus spp.를 동시에 접종, 배양한 경우(ST; Pc＋Lb 및 Pc＋Lc) , Lactobacillus spp.를 접종하여 3일간 배양한 후 Penicillium citrinum을 접종하여 배양한 경우(LbPc 및 LcPc), 그리고 Penicillium citrinum을 접종하여 3일간 배양한 후 Lactobacillus spp.를 접종하여 배양한 경우 (PcLb 및 PcLc)로 구분하여 각각 30℃에서 15일간 정식 배의하면서 경시적으로 (0, 3, 6, 9, 12, 15일) 배의 액의 pH와 산도를 측정하고 공식균의 생육과 citrinin 생성을 비교하였다. 그 결과 , 균의 생육은 혼합배의 의 경우 Penicillium citrinum의 성장이 크게 둔화되었고 특히 젖산균을 먼저 접종한 군(PcLb 및 PcLc)의 경우 더욱 현저히 나타났다. Citrinin의 생성은 곰팡이 대조군(Pc)과 곰팡이를 먼저 접종한군(PcLb 및 PcLc) 에서는 비슷한 함량을 보였으나 곰팡이와 세균을 동시 접종한 경우 (ST) 감소되었고, 특히 Lactobacillus spp. 배양 후 Penicillium citrinum을 접종한 군(LbPc 및 LcPc)에서는 citrinin 생성이 나타나지 않아 Penicillium citrinum의 생육과 citrinin 생성이 경쟁적으로 작용하는 microflora에 의해 큰 영향을 받는 것으로 나타났다.

• The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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• 제20권6호
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• pp.621-628
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• 2016

Hypertension can be caused by various factors while the predominant causes include increase in body fluid volume and resistance in the circulatory system that elevate the blood pressure. Consumption of probiotics has been proven to attenuate hypertension; however, the effect is much strain-dependent. In this study, a newly isolated Lactobacillus casei (Lb. casei ) strain C1 was investigated for its antihypertensive properties in spontaneously hypertensive rats (SHR). Lactic acid bacteria (LAB) suspension of 11 log colony-forming unit (CFU) was given to SHR (SHR+LAB, n=8), and phosphate buffer saline (PBS) was given as a control in SHR (SHR, n=8) and in Wistar rats as sham (WIS, n=8). The treatment was given via oral gavage for 8 weeks. The results showed that the weekly systolic blood pressure (SBP), mean arterial pressure (MAP), diastolic blood pressure (DBP) and aortic reactivity function were remarkably improved after 8 weeks of bacterial administration in SHR+LAB. These effects were mostly attributed by restoration of wall tension and tensile stress following the bacterial treatment. Although not statistically significant, the level of malondialdehye (MDA) in SHR+LAB serum was found declining. Increased levels of glutathione (GSH) and nitric oxide (NO) in SHR+LAB serum suggested that the bacterium exerted vascular protection through antioxidative functions and relatively high NO level that induced vasodilation. Collectively, Lb. casei strain C1 is a promising alternative for hypertension improvement.

• 한국식품영양과학회지
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• 제45권10호
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• pp.1476-1480
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• 2016

본 연구는 젖산균 배양상등액(ELAM)의 항균 효과 및 저온저장 돈육의 보존성과 품질 변화를 확인하기 위해 시행되었다. 현재까지 그 항균능력이 연구되지 않은 Lactobacillus sicerae를 비롯해 두 종의 젖산균인 Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei의 비교를 통해 그 항균력과 보존제로서의 가능성을 확인하였다. 본 연구에 사용된 3종의 ELAM은 모두 돈육등심의 14일간 저온저장 후의 품질에 큰 영향을 주지 않는 것으로 확인되었다. 돈육의 일반성분, pH, TBARS, 육색에 중대한 변화를 초래하지 않았으며 이와 대조적으로 L. sicerae는 다른 두 종의 젖산균 ELAM 처리군에 비해 3종의 병원성 미생물(Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus)에 대한 성장 억제 능력과 돈육접종 후 14일간의 저온저장 후의 미생물 수에서 유의적(P<0.05)으로 우수한 효과를 나타내는 것으로 관찰되었다. 본 연구의 예비연구에서 ELAM 처리 돈육의 보수력과 가열감량에도 유의적인 변화가 없는 것으로 관찰되어 앞으로 L. sicerae의 사용 안전성 및 독성에 대한 추가 연구가 있을 시 안전하고 효율적인 자연친화적 육류보존제로서의 사용 가능성의 전망이 매우 밝다고 판단된다.

• 생명과학회지
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• 제23권1호
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• pp.44-54
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• 2013

본 연구에서는 한약재를 Lactobacillus속 균주로 발효시켜 기능성물질을 확인하고자 하였다. 선행연구를 통해 선별한 발효에 사용한 10가지 한약은 100% methanol로 추출하여 Lactobacillus속 균주와 MRS배지를 첨가하여 사용하였고 발효 후 ethyl acetate로 추출하여 사용하였다. 10가지 중 붉나무를 Lb. brevis KCTC 3498로 발효하고 ethyl acetate로 추출한 추출물에서 마우스 해마 유래 세포주인 HT22 세포에서 glutamate로 유발된 산화적 손상으로부터 세포 보호효과가 우수했으며, 이는 heme oxygenase-1 단백질 발현에 의한 것 임을 밝혔다. 또한, 뇌세포 보호에 heme oxygenase-1 발현의 주요 기전인 Nrf2 핵 내의 전사와 직접적인 연관이 있음을 확인하였다. 붉나무의 발효 전과 후의 항균, 항산화 효과 비교 실험에서는 붉나무를 Lb. plantarum subsp. plantarum KCTC 3108, Lb. fermentum KCTC 3112, Lb. brevis KCTC 3498 균주로 각각 발효한 한약재는 발효 전보다 항산화 활성이 높아지거나 비슷한 수준으로 나타났다. Lb. plantarum subsp. plantarum KCTC 3108, Lb. casei KCTC 3109로 발효한 붉나무 발효액과 ethyl acetate 여액층은 Bacillus subtilis PCI 219, Escherichia coli KCTC 1682, Shigella flexneri KCTC 2517, Vibrio parahaemolyticus KCTC 7471, Pseudomonas aeruginosa KCTC 2004에 모두 항균활성을 보였다. 붉나무를 Lb. brevis KCTC 3498로 발효하여 ethyl acetate로 추출한 추출물은 B. subtilis PCI 219, E. coli KCTC 1682, S. flexneri KCTC 2517, V. parahaemolyticus KCTC 7471 균주에서 발효한 추출물이 단순 붉나무 추출물보다 높은 항균활성을 보였다.