We studied the influence of culture conditions on the acid tolerance of Lactobacillus casei YIT 9018 in artificial gastric juice with respect to relative amount of membrane bound ATPase and their biochemical characteristics. With raising incubation temperature from 30.5$\circ$C to 40.5$\circ$C and lengthening incubation time from exponential phase to late stationary phase, the acid tolerance of L. casei YIT 9018 was increased. As acid tolerance enhanced, C$_{18:1}$ content of membrane fatty acid was reduced and C$_{19:0 cyclo}$ was enriched but the others were not changed greatly. At high ATPase activity, proton permeability was relatively low but this phenomenon did not correspond to acid tolerance. In conclusion, it was considered that changes of C$_{18:1}$ and C$_{19:0 cyclo}$ were closely related to the acid tolerance of L. casei YIT 9018.
Lactobacillus casei HY 2782, prophage cured strain was characterized to be stable as much as L casei YIT 9018, parent strain. By southern hybridization, it was confirmed that the temperate phage was incorporated in chromosomal DNA of L. casei YIT 9018 as a prophage. It was also proved that the prophage was cured from chromosomal DNA of L casei HY 2782. The growth rate, lactic acid producing ability, carbohydrates fermentation, and enzymatic activity of L. casei HY 2782 were found to be similar to those of L. casei YIT 9018. When L casei HY 2782 was used as a host, the multiplicity of infection (M.O.I.) of the temperate phage for L. casei HY 2782 was 1.0~5.0. Restriction enzyme analysis of pLC90 plasmid from L. casei HY 2782 was shown that the size was an approximately 68.22 kb. The plasmid profiles, genomic DNA patterns, and cellular fatty acids composition of L. casei HY 2782 were similar to those of L casei YIT 9018. And the major fatty acids composition of these strains were C$_{14;0}$,C$_{16;1}$, C$_{16;0}$, C$_{18;1}$ and C$_{19;cyclo-}$ 10 sets of arbitrary primer in the PCR were screened to find differentiation against two strains of L. casei. Among them, b$_{5}-1/17-1 primer was produced an approximately 1.3 kb DNA band of only L casei YIT 9018. And b$_{5}-2/17-2 primer was produced an approximately 1.0 kb DNA band of only L casei HY 2782.
A shuttle vector, pSHvec, was constructed for Lactobacillus casei (L. casei) YIT 9018 and JM1O9 by recombinant DNA technology. This vector contained the $\beta$-lactamase II gene from Bacillus cereus as a selection marker and replication origins for both Gram(+) and Gram(-) strains. It could transform the wild type L. casei YIT 9018 as well as E. coli JM109 and transformed cells were selected based on antibiotics resistance. The ability of L. casei YIT 9018 for curd formation in 11% skim milk was maintained even after transformation with pSHvec. The vector was stable as long as antibiotics were added to the medium. These results could contribute to the study of lactic acid bacteria for the industrial purpose at a genetic level.
Prophage cured strain derivatives from Luctobacillirs araei YIT 9018 were isolated from thermoinducible mutant of the parent lysogenic strain. Two thermoinducible mutants were isolated from L. casei YIT 9018 strain treated with N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine. Prophage cured strains were selected after heat induction of thermoinducible strains at $42^{\circ}C$ for 30 min in MRT medium containing anti- 4 FSV serum. The prophage cured strains, L. casei HYM 1213 and L. casei HYM 4024, could be used an indicator strain for temperate phage $\phi$ FSW. The growth, lactic acid producing ability and carbohydrates fermentation of L. casei HYM 1213 were similar to the parent L. cmei YIT 9018 strain, but A. casei HYM 4024 was not. One of the prophage cured strain, L. cmei HYM 1213, could be used industrially .to produce lactic acid beverages because this strah could not induce the virulent phage$\phi$FSV. The physiological characterization of L. casei HYM 1213 strain was similar to the parent L. casei YIT 9018 strain.
The cured mutant strains (CW, CSM, CEM, CAM) we obtained from Lactobacillus casei YIT 9018 spontaneously and by ethidium bromide treatments. The lactose fermenting ability of those mutants was tested and plasmid was found to have some functions in lactose metabolism. Plasmid (PLC) has been detected in Lactobacillus casei YIT 9018, but has not been detected in mutants CSM, CEM, CAM. These plasmid curred mutants showed a decrease in the ability to produce lactic acid from lactose.
In this study characterization of spontaneous Lac$^-$ mutant of Lactobacillus casei YIT 9018 was investgated. The frequency of occuring the spontaneous Lac$^-$ mutant cells from stok culture strains was approximately 0.5% in MRS Media and 0.29% in 10% nonfat dried milk, ohterwise, that from pure Lac$^+$ colony it was 0.25% in MRS Media and 0.1% in l0% nonfat dried milk. In the physiological deference the spontaneous Lac$^-$ mutants were defective in lactose and/ or galactose-fermenting ability and also needed longer time for coagulation of nonfat dried milk than wild type.
The broad-host plasmid PAM $\beta_1$ of Streptococcus faecalis DS 5 which codes for erythromycin resistance and lactose utilization was transferred into L. casei M-3 (lac-mutant) by conjugation, but was not transferred by protoplast fusion and protoplast transformation. For conjugal transfer of plasmid PAM $\beta_1$ the method of membrane filter mating was more efficient than that of agar surface mating. The rate of acid production of transconjugant C-1, C-3 was similar to L. casei YIT 9018. The proteolytic activity of transconjugant C-3 was increased 20% higher than that of wild type. Plasmid PAM $\beta_1$ was detected by a11 of the transconjugants. The transconjugants expressed lactose ulitization and erythromycin resistance.
In vivo protective and in vitro inhibitory activities of Lactobacillus casei YIT 9018. against typical enteritis causing Salmonella enteritidis KU101 and IgA level after challenge have been determined. In order to identify the strains of lactobacilli the sequences of 16S-23S rRNA intergenic spacer region were determined. All the test strains of Lactobacillus spp. inhibited Salmonella enteritidis, the intensity varied depending upon the species of lactobacilli. Effects on the survival rate of the mouse after challenge with Salmonella enteritidis KU101 on feeding Lactobacillus spp. have shown the highest survival rate in L. helveticus CU 631 followed by L. casei YIT 9018 and L. johnsonii C-4 and the lowest in control mice. The higher level of total Ig A concentration in the intestinal fluid of lactobacilli fed mice than control mice was observed. The sequences of 16S-23S rRNA intergenic spacer region of seven strains of Lactobacillus casei could be utilized as a strain identification, those sequences showed some degree of difference in homology.
Effects of feeding seven strains of Lactobacillus spp. on the level of cell glutathione sulphydryl (GSH) in spleen, liver and erythrocyte of the ICR mice and on the level of immunoglobulin M in the spleen were determined. The level of cell glutathione sulphydryl in the spleen was dependent on the strain of Lactobacilli, it was significantly higher in the mice fed with L. casei CU 001, L. rhamnosus CU 02, L. acidophilus NCFM and L. casei YIT9018 (p>0.05). The level of cell glutathione sulphydryl in the liver increased in the mice fed with L. casei YIT9018, L. acidophilus NCFM, L. casei CU 001 (p>0.05), the level of glutathione sulphydryl of the erythrocyte showed significantly higher value than control mice when fed with L. acidophilus NCFM, L. casei YIT9018, L. casei CU 001 (p>0.05). The level of immunoglobulin M in the spleen of ICR mice expressed as the plaque count revealed significantly higher value than the control mice when fed with L. casei CU 001, L. acidophilus NCFM and L.casei YIT 9018.
Kim, Gyung-Tae;Lee, Jeong-Jun;Suh, In-Young;Na, Seog-Hwan;Baek, Young-Jin
Microbiology and Biotechnology Letters
/
v.19
no.2
/
pp.147-152
/
1991
In order to study effect of the phage ${\phi}$ FSV on the growth of lactic acid bacteria, Lactobacillus casei YIT 9018(wild type strain with prophage) or L. casei HYM 1213 (prophage cured strain) was infected with various concentrations of phage ${\phi}$ FSV (called Lac S21) or wild type virulent phage (called Lac J-1). When L. casei YIT 9018 was infected with Lac S21 under the concentration of $6.0{\times}10^6$ pfu/ml, the growth and lactic acid production of the strain were normal and the number of phages decreased. But L. casei HYM 1213 was susceptible to Lac S21. Regardless of the concentration of the phage infection, the number of phages increased rapidly into $10^9$ to $10^{10}$ pfu/ml at 2 day cultures and was maintained $10^7$ to $10^9$pfu/ml phage until 6 day cultures. The lactic acid production of L. casei HYM 1213 infected with Lac S21 was abnormal. Therefore, phage ${\phi}$ FSV had an evil effect on growth of L. casei HYM 1213, but not L. casei YIT 9018. On the other hand Lac J-1 caused abnormal fermentation to either L. casei YIT 9018 or L. casei HYM 1213.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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