미성숙 종자로부터 추출된 전체 RNA를 이용하여 합성한 cDNA와 LMW-GS 특이 프라이머세트를 이용하여 43개의 LMW-GS 유전자를 분리하였다. 각각의 유추 아미노산은 상동성이 높은 20개의 시그널 펩타이드, N-말단 영역, 반복서열영역 그리고 C-말단 영역을 가지며 C-말단 영역에 분자내 혹은 분자간 이황화 결합을 형성하는 전형적인 8개의 시스테인을 가지고 있었다. 이들 시스테인의 위치는 첫번째, 일곱번째를 제외하고는 보존되어 있었다. Ikeda 분류법과 비교할 경우, 이들은 각각 그룹 1, 2, 3 또는 4, 5, 7, 10(이중 그룹 2와 5가 가장 많음) 그리고 11에 속하며 그룹 6, 8, 9 그리고 12에 속한 단백질은 탐지되지 않았다. 이들 43개 LMW-GS 유전자들을 Lasergene Version 7.0을 이용하여 DNA 염기서열 수준에서 계통도를 분석한 결과 Ikeda 그룹의 분류법과 일치하였다. 단백질 수준에서 LMW-GS들을 확인하기 위해 2DE로 이들 단백질을 분리하여 이들의 N-말단 아미노산 서열을 분석하였다. 7개 스팟의 N-말단 아미노산 서열을 확인할 수 있었고 이중 2개는 N-말단 아미노산 서열이 세린으로 시작하는 LMW-s 타입이었고 5개는 N-말단 아미노산 서열이 메티오닌으로 시작하는 LMW-m 타입이었다. 이들 서열은 Ikeda 그룹의 분류법에 따르면 그룹 1, 2, 3, 3/4, 5 그리고 10이었다. 이들 LMW-GS 단백질 중 2개는 Glu-D3 그리고 3개는 Glu-B3에 의해 encoding 되었고 나머지는 확인이 불가능 하였다. 그룹 6, 7, 8, 9, 11, 그리고 12의 스팟은 확인할 수 없었다. N-말단 아미노산 서열들과 클로닝된 LMW-GS 유전자군을 비교해 보면 그룹 1, 2, 3/4, 5 그리고 10이 모두 유전자와 단백질 수준에서 존재하고 있음을 확인하였다. 본 연구는 다양한 LMW-GS 유전자들을 분리, 동정하였고 이들의 해당 단백질을 확인할 수 있었다. 이러한 결과는 밀가루 품질 향상을 위한 육종 프로그램에 도움이 될 것이다.
목초의 내하고성을 증진시킬 목적으로 이용하고자 하는 내열성 유전자 (BcHSP17.6)의 발현양상을 배추에서 조사하였다. BcHSP17.6 단백질을 항원으로 한 항체를 생산하여 항원-항체 반응으로 확인한 결과, 생산된 항체는 항원과 결합하므로서 항체가 정상적으로 생산되었음을 확인하였다. 이 항체를 이용하여 다양한 heat shock (HS) 조건에서 15-~18-kD low molecular weight heat shock proteins (LMW HSPs)가 축적되는지를 조사하였다. 이들 LMW HSPs는 $35^{\circ}C$ 처리에서 나타나기 시작하였으며, $40^{\circ}C$에서 4시간 처리하였을 때 total protein 100 mg당 $1.56{\mu}g$이 축적되어 최대치를 나타내었다. 또한 합성된 이들 LMW HSPs는 HS 처리후 24시간이 경과되어도 거의 변함이 없었으며, $40^{\circ}C$ 보다 높은 온도 조건에서는 축적량이 감소하였다. 이와 같이 일단 합성된 LMW HSPs가 장시간 동안 감소하지 않는다는 사실로부터, 이들 HSPs들이 식물체가 내열성을 가지도록 하는데 관여하며, 더 나아가서 배추가 정상 생육온도보다 더 높은 치사온도에서도 살아남을 수 있도록 하는데 중요한 역할을 하는 것으로 사료된다.
Montazeri, Hamed;Bouzari, Saeid;Azadmanesh, Kayhan;Ostad, Seyed Nasser;Ghahremani, Mohammad Hossein
Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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제16권17호
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pp.7575-7582
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2015
Cyclin E, a key coordinator of the G1 to S transition in the cell cycle, may be deregulated in several malignancies, including breast cancer. The most significant aberration in cyclin E is its elastase mediated proteolytic cleavage into tumor specific low molecular weight isoforms (LMW-Es). LMW-Es are biochemically hyperactive and biologically drive tumorigenesis in transgenic mouse models. Additionally, expression of LMW-Es has been correlated with poor survival in breast cancer cases. Here we determine whether expression of LMW-Es in a breast cancer cell line that is naturally devoid of these deregulated forms would alter their progression through each phase of the cell cycle. The results revealed that LMW-Es expression resulted in an increased doubling time, concomitant with a predominant increase in the population in the S phase of the cell cycle. Moreover, downregulation of p53 in LMW-Es cells resulted in additional shortening of the doubling time and enrichment of cells in the S and G2/M phases of the cell cycle. Furthermore, expression of LMW-Es sensitized cells to ${\beta}$-estradiol (E2) mediated growth and changed expression patterns of estrogen receptor and Bcl-2. Intriguingly, expression of LMW-Es could surpass anti-apoptotic effects raised by p53 upregulation. Taken together these studies suggest that overexpression of LMW-Es in collaboration with p53 loss results in altered g rowth properties of MCF-7 cells, enhancing the oncogenic activity of these ER positive breast cancer cells.
본 연구는 예로부터 식용 및 약용으로 널리 이용되어지는 버섯의 기능성 소재로서의 타당성을 검증하기 위하여 버섯 추출물의 유효성분 함량(polyphenol, $\beta$-glucan)과 저분자 및 고분자 분획물의 항산화 활성, 혈전용해 활성, 면역증강 및 항염증 활성 등을 측정하였다. 그 결과 전체 수율은 식용버섯이 약용버섯보다 높게 나타났으며, $\beta$-glucan의 함량은 표고버섯(33.5%)이 가장 높게 나타났다. Polyphenol 함량은 약용버섯인 상황버섯(LMW)이 233.23 mg/g로 가장 높게 나타났으며, 애느타리버섯(LMW) 12.18 mg/g, 송이버섯(LMW) 11.72 mg/g 순으로 확인되었다. 버섯 추출물의 항산화 능력을 측정하기 위한 전자공여능 측정 결과는 ascorbic acid 0.5 mg/mL에서 95.91%의 저해율을 나타낸 것에 비하여 상황버섯(LMW, 10 mg/mL)이 80.74%의 억제활성을 나타내었다. SOD 유사활성 측정에서는 대부분의 버섯 추출물에서 큰 차이를 나타내지 않았으며, 아질산염 소거능 측정에서는 pH의 감소에 따라 소거능이 증가하였고, 상황버섯(LMW)이 가장 높은 소거능을 나타내었다. 이처럼 버섯 추출물의 항산화능력 측정에서 phenol성 물질을 많이 함유하고 약용버섯으로 사용되는 상황버섯이 식용버섯(송이버섯, 새송이버섯, 양송이버섯, 느타리버섯, 애느타리버섯, 표고버섯, 팽이버섯) 보다 LMW 분획에서 우수한 항산화 능력을 갖는 것을 알 수 있었다. 그러나 혈전용해 활성을 측정한 결과에서 대부분의 LMW 분획물들은 혈전용해 활성을 갖지 않았으며, 송이 버섯(HMW, 50 mg/mL)이 60.4%의 가장 높은 혈전용해 활성을 나타내었다. 또한 RAW 264.7 cell을 이용한 대식세포 활성능(NO 생성)을 측정한 결과 LMW 분획에서는 대식세포 활성능력이 거의 없는 것으로 조사되었으며, 대조군인 LPS 500 ng/mL를 첨가한 상태에서 $32.9\;{\mu}M$의 NO를 생성하는 것과 비교하여, 표고버섯(HMW, $500\;{\mu}g/mL$) $39.86\;{\mu}M$, 송이버섯 $35.17\;{\mu}M$의 NO 생성능을 나타내었다. 또한 약용버섯인 상황버섯(HMW)은 NO 생성능력이 거의 나타나지 않았다. 반면에 RAW 264.7 cell로부터 LPS에 의해 유도된 NO 생성 저해활성을 측정한 결과 상황버섯(LMW) $500\;{\mu}g/mL$의 농도에서 NO의 생성을 100% 저해하였고, 새송이버섯(LMW)은 $50\;{\mu}g/mL$에서 58.14%, $500\;{\mu}g/mL$에서 67.79%의 저해활성을 나타내었다. 이상의 결과로부터 phenol 성분을 다량 함유하고 있는 상황버섯(LMW)은 일반적인 식용버섯에 비해 항산화능이 우수함을 알 수 있었으며, 혈전용해능력(송이버섯, I)과 면역증강(표고버섯, VII) 그리고 항염증(새송이버섯, II)에서는 식용버섯의 HMW 분획물이 우수한 활성을 나타내는 것을 확인하였다.
Low molecular weight phosphotyrosine protein phosphatase (LMW-PTP) has been implicated in modulating the EphB1-mediated signaling pathway. In this study, we demonstrated that the EphA8 receptor phosphorylates LMW-PTP in vitro. In addition, we discovered that mixing these two proteins leads to EphA8 dephosphorylation in the absence of phosphatase inhibitors. Finally, we demonstrated that LMW-PTP, modified by the EphA8 autokinase activity, possesses enhanced catalytic activity in vitro. These results suggest that LMW-PTP may also participate in a feedback-control mechanism of the EphA8 receptor autokinase activity in vivo.
돼지고기에서 분리한 bacteriocin 생성능이 우수한 젖산균을 동정하기 위하여 이미 알려진 몇가지 젖산균을 참고균으로 하여 10% denaturing polyacrylamide gel에 전기영동으로 전개한 5S rRNA 와 tRNA 등 150개 이하의 핵산으로 구성된 저분자량 RNA(Low Molecular Weight RNA : LMW RNA) profiles에 나타난 15~25개의 밴드 양상이 균에 따라 차이점을 보여 동정에 효과적으로 이용할 수 있었다. 새로 분리한 젖산균은 참고균과는 다른 균종이었다. APT, TSB, MRS의 3종류 다른 배지에서 배양하여도 LMW RNA profiles에는 차이가 없었으며, 겔상의 밴드 전개거리를 3개의 표준 분자량 물질을 이용하여 만든 표준곡선을 사용하여 상대핵산단위(relative nucleotide units : RNU)로 나타낸 밴드의 양상을 도표화 하는 것이 profiles를 서로 비교 하는데 편리하였다.
To determine an increased acid tolerance of an adipic acid-resistant mutant Leuconostoc mesenteroides(ANaM100) developed for use as a Kimchi starter, proton permeability of cytoplasm, activities of H+-ATPase, Mg++ release and fatty acid composition of cytoplasmic membranes of strain ANaM100 were studied and compared with those of its wild type (LMw). The value of protons permeability of LMw after an acid shock at pH 5.0 was 5.4 min., while the value of ANaM100 cells was 8.4 min. at the same pH. The pH of maximal specific activ-ities of ATPase originated from the LMw and ANaM100 were 0.87 unit/mg protein at pH 6.0 and 0.92 unit/mg pro-tein at pH 5.5, respectively. The release of magnesium ion from ANaM100 was observed about 12.8% at pH 4 after 2 hours, while the wild strains of LMw released Mg++ about 27.6% under the same conditions. The content of C19:0,cyclo and C18:1 in a membrane fatty acid of ANaM100 was higher and lower, respectively than that of LMw. These results indicated that acid tolerance of adipic acid-resistant strain, ANaM100 was significantly improved in comparison with that of its wild type, LMw. In addition, the strain ANaM100 was adipic resistance based on the result of growth of the strain in comparison with that of strain LMw in a broth containing adipic acid.
We characterized a cDNA clone for a low molecular weight heat-shock protein (LMW HSP) from tobacco named TLHS-l. Nucleotide sequence determination of TLHS-1 identified an open reading frame for 159 amino acids. To the upstream of the open reading frame, a sequence of 124 nucleotides was determined. To the 3' downstream of the open reading frame, 212 nucleotides were identified which carried poly(A)-tail. Comparison of the open reading frame and hydropathy plot of TLHS-1 with the previously reported class I LMW HSPs showed high identity which classified TLHS-1 as a class I LMW HSP cDNA clone. We proposed that there are six consensus regions in class I LMW HSPs. RNA blot hybridization for TLHS-1 showed a typical expression pattern of heat-shock-inducible gene from three common tobacco cultivars. The open reading frame of TLHS-1 was overexpressed in Escherichia coli. TLHS-1 protein confers thermal protection of other proteins in vitro and in vivo. Thermal induced aggregation of citrate synthase was reduced by purified TLHS-1 protein, and thermal death rate at $50^{\circ}C$ was reduced in E. coli expressing TLHS-l. From these data, we can expect that TLHS-1 acts as a molecular chaperone.perone.
In this paper we investigated the behavior of low molecular weight silicone fluids in silicone rubber by W treatment with solvent-extraction and GPC. It was shown that LMW quantity which was extracted by solvent-extraction was decreased in UV treatment time. $200{\sim}450\;g/mol$ distribution of LMW silicone fluid was contributed to recovery. It was similar to result from corona discharge. Morphological analysis was investigated by scanning electron microscope(SEM) and X-ray diffraction (XRD). The behavior of LMW silicone fluids in silicone rubber which was contributed to recovery was discussed.
본 연구에서는 레몬 머틀 잎 열수 및 에탄올 추출물을 이용하여 항산화 활성과 NO 소거능 및 RAW 264.7 세포에서의 항염증 활성에 미치는 영향을 확인하였다. 레몬 머틀 열수 및 에탄올 추출물의 총 페놀 함량은 각각 207.44와 $331.54{\mu}g\;TAE/mg$이었고, DPPH radical 소거능은 0.5 mg/ml 농도에서 각각 90.69%와 92.50%로 나타났으며, SOD 활성은 1 mg/ml 농도에서 각각 106.22%와 103.58%로 나타났다. 아질산염 소거능 분석에서는 열수와 에탄올 추출물 1 mg/ml 농도, pH 1.2에서 81.06%와 91.03%로 에탄올 추출물의 소거능이 높은 것으로 나타났다. 레몬머틀의 항염증 활성을 측정하기 위하여 대식세포에 LPS를 처리하여 세포 내 NO 생성을 유도한 후 열수 및 에탄올 추출물을 처리하여 각각의 추출물이 NO 활성에 미치는 영향을 분석한 결과 각 추출물 모두 농도 의존적으로 감소하였다. 또한 LPS에 의해 증가된 iNOS 단백질 발현 또한 농도 의존적으로 감소하였다. 이상의 결과에서와 같이 레몬 머틀 잎은 항산화 및 항염증 효과가 있는 것으로 나타났기에 천연물 소재로서의 활용도가 높을 것으로 생각된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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