The protective effect of chungkukjang from Sunchang province against oxidative stress was evaluated in the cellular system using LLC-$PK_1$ renal epithelial cells. The LLC-$PK_1$ cells showed decrease in cell viability and elevation in lipid peroxidation by the treatment with the generators of nitric oxide (NO) and superoxide anion ($O_2^-$) produced by sodium nitrouprusside and pyrogallol, respectively. However, the methanol extract of chungkukjang significantly inhibited cellular loss and lipid peroxidation in a dose-dependent manner; in particular K chungkukjang (KC) exerted the strongest protective effect. In addition, the protective effect of chungkukjang from 3-morpholinosydnonimine, as a source of peroxynitrite, with simultaneous generations of NO and $O_2^-$, was also studied. Treatment with chungkukjangs significantly preserved the cell viability and inhibited lipid peroxidation caused by SIN-1 with dose-dependence. The present study suggests that chungkukjang from Sunchang province, especially KC, would have protective potential from oxidative stress induced by free radicals under cellular oxidative damage.
Objectives : The aims of this study were to investigate the cytoprotective, antioxidative and inflammation genes inhibitory effects of Patriniae Radix on the mouse LLC-$PK_1$ cells (renal epithelial cells). Methods : The cytoprotective effect of Patriniae Radix was evaluated by 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay. The antioxidative effect was measured in terms of generation amount of superoxide anion radical (${\cdot}{O_2}^-$) by 2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate (DCFDA), nitric oxide (NO) by 4,5-diaminofluorescein (DAF-2), peroxynitrite ($ONOO^-$) by dihyldrorhodamine 123 (DHR 123) and prostaglandin $E_2$ ($PGE_2$) by $PGE_2$ immunoassay on $H_2O_2$-treated LLC-$PK_1$ cells. For measuring of inflammation genes inhibitory effects, western blot was performed to detect IKK-$\alpha$, phospho-$I{\kappa}B-\alpha$, NF-${\kappa}B$ (p50, p65), COX-2, iNOS, IL-$1{\beta}$ and VCAM-1 protein level in cytosol fractions from LLC-$PK_1$ cells. Results : Patriniae Radix extract reduced the $H_2O_2$-induced cell death and inhibited the amount of $H_2O_2$-induced ${\cdot}{O_2}^-$, NO, $ONOO^-$, $PGE_2$ generation dose-dependently on the mouse LLC-$PK_1$ cells in vitro. Also Patriniae Radix extract inhibited the expression of IKK-$\alpha$, phospho-$I{\kappa}B-\alpha$, COX-2, iNOS, IL-$1\beta$ and VCAM-1 genes dose-dependently by means of decreasing activation of NF-${\kappa}B$. Conclusions : According to above results, it was identified that Patriniae Radix had the cytoprotective, antioxidative and inflammation genes inhibitory effects. So it was suggested that Patriniae Radix would be effective to the treatment for the inflammatory process and inflammation-related diseases.
잡곡밥 메탄올 추출물이 가지는 산화적 스트레스 개선 효과를 확인하기 위하여 $H_2O_2$로 유도된 산화적 스트레스에 대한 LLC-PK1 세포의 보호 효과를 조사하였다. $250{\mu}M$의 $H_2O_2$에 의한 산화적 스트레스가 유발된 LLC-PK1 세포에 시료추출물을 처리한 결과, WR, TMR, GR 순으로 $H_2O_2$ 처리군에 비해 세포 생존율이 증가하였다(P<0.05). 특히 GRS와 GRK에서 정상군에 가까운 세포 생존율을 나타내어 $H_2O_2$에 의한 산화적 스트레스로 유발된 세포 손상에 대한 잡곡밥 추출물의 보호 효과를 확인할 수 있었다. 세포 내 활성산소(ROS)의 수준과 세포 내 지질과산화물질(MDA)의 생성 억제 효과 역시 WR, TMR, GR, GRK, GRS 순으로 증가하는 것을 관찰하였다. $H_2O_2$로 인하여 세포 내 항산화 효소인 SOD, CAT와 GSH-px 등의 활성이 감소된 LLC-PK1 세포에 잡곡밥 추출물을 처리했을 때 이들 효소의 활성이 증가했으며 특히 GRK, GRS군에서 현저하게 증가되었다. LLC-PK1 세포에서 $H_2O_2$에 의해 발생하는 산화적 스트레스에 대한 보호 효과를 측정한 결과 잡곡밥 추출물은 세포 손상을 억제하고 세포 내 활성산소(ROS)의 수준과 지질과산화물질(MDA)의 생성을 억제하며, 세포 내 항산화 효소의 활성을 증가시키는 효과를 가지는 것으로 보인다. 또한 항산화 효소유전자 발현에서도 위와 비슷한 효과를 나타내었다. 이상의 결과로 잡곡밥 메탄올 추출물, 특히 기능성 물질인 카레가루와 상황버섯 추출물이 첨가된 잡곡밥은 LLC-PK1 세포에 대한 보호 작용과 in vitro에서의 항산화 효과가 높은 것으로 확인되었다.
본 연구에서는 국내산 법제 하수오 메탄올 추출물로부터 생리활성물질을 확인하였고, 추출물의 라디칼 소거능과 LLC-$PK_1$ cell을 이용한 산화적 스트레스 개선 효과를 살펴보았다. HPLC 분석 결과 4종의 생리활성물질인 2,3,5,4'-tetrahydroxystilbene 2-O-${\beta}$-D-glucoside, emodin, chrysophanol 및 rhein을 확인하였다. 특히 주요 화합물인 2,3, 5,4'-tetrahydroxystilbene 2-O-${\beta}$-D-glucoside는 115.02 mg/kg이었다. 법제 하수오 추출물의 DPPH, ABTS, hydroxyl 라디칼 소거능은 농도 의존적으로 증가하였다. 추출물의 $50{\mu}g/mL$ 처리 시 DPPH 라디칼 소거능은 48.4%, ABTS 라디칼 소거능은 57.9% 및 hydroxyl 라디칼 소거능은 81.2%로 나타내었다. 한편 LLC-$PK_1$ cell에서 각각의 NO, $O_2{^-}$, 및 $ONOO^-$ 생성물질인 pyrogallol, sodium nitroprusside(SNP) 및 morpholinosydnonimine(SIN-1) 처리에 의해 유도된 산화적 스트레스 상에서 세포 생존율은 감소하였다. 그러나 법제 하수오 메탄올 추출물은 농도 의존적으로 세포 독성을 저해하였다. 추출물의 $50{\mu}g/mL$ 처리 시 세포 생존율은 각각 82.1%(pyrogallol), 89.1%(SNP) 및 77.6%(SIN-1)였다.
채소류의 산화방지 지표로서 ORAC측정결과 산화방지 능력이 우수하다고 보고되어진 13가지 채소류를 선정하여 DPPH 라디칼 소거능을 관찰하고 이들의 phenol 함량을 분석한 결과, 비트, 가지, 케일의 DPPH 라디칼 소거능이 우수한 것으로 나타났으며, 이들은 총 phenol 함량 또한 높아 이들 사이의 양의 상관관계가 있음을 알 수 있었다 반면, 알팔파 스프라우트(alfalfa sprout), 브로컬리, 시금치 등에서는 phenol 함량은 높은 것에 비해 DPPH 라디칼 소거능은 그다지 우수하지 못했다. 또한 세포모델에서 LLC-$PK_{1}$ 세포에 radical generator인 AAPH 처리를 함으로써 채소류의 산화적 스트레스에 대한 개선효과 살펴본 결과, 가지와 컬리플라워가 높은 세포 생존율을 보여 가장 우수한 산화적 스트레스 개선 효과를 가진 것으로 나타났으며, 그 다음으로 비트,당근 등의 산화적 스트레스 개선효과가 높은 것으로 나타났다. 특히 가지는 총 phenol 함량도 높을 뿐 아니라, DPPH 라디칼 소거능과 세포모델에서의 산화적 스트레스에 대한 개선효과도 뛰어나 우수한 항산화기능성을 지닌 채소류로 사료된다.
본 연구에서는 신선초 녹즙과 돌미나리 녹즙을 다양한 실험을 통하여 산화방지 활성을 측정하였다. DPPH 라디칼, NO, $O_2{^-}$, ${\cdot}OH$ 라디칼 소거능 실험을 이용하여 유기농 및 일반농 신선초 녹즙과 돌미나리 녹즙의 산화방지 활성을 측정해 본 결과, 모든 시료군에서 높은 라디칼 소거 활성이 나타났다. 또한, 산화적 스트레스에 민감한 LLC-$PK_1$ 세포를 이용하여 유기농 및 일반농 신선초 녹즙과 돌미나리 녹즙의 산화적 스트레스 개선 효과를 살펴본 결과, 신선초 녹즙과 돌미나리 녹즙은 AAPH, SNP, 파이로갈롤과 SIN-1에 의해 유발된 산화적 스트레스(NO, $O_2{^-}$와 $ONOO^-$)에 대한 세포 생존율을 증가시키고, 지질과산화를 억제시켜 라디칼에 의한 산화적 스트레스에 대한 개선 효과가 뛰어난 것으로 사료된다. 이상의 결과로부터 신선초 녹즙과 돌미나리 녹즙은 우수한 산화방지 활성과 지질과산화 개선 효과를 나타내어 신선초 녹즙과 돌미나리 녹즙으로부터 산화방지 영양소를 충분히 섭취하는 것이 산화적 손상과 관련된 질병을 예방하는 좋은 방법이 될 수 있을 것이라 사료된다.
In this study, we investigated the antioxidative and antiaging activity of Perilla frutescens using LLC-$PK_1$ porcine renal epithelial cell and WI-38 human diploid fibroblast cell. The extract from Perilla frutescens showed strong protective effect against nitric oxide (NO) and superoxide ($O_2{^-}$)-induced oxidative stress generated by sodium nitroprusside (SNP) and pyrogallol, respectively. The result showed that P. frutescens increased the cell viability and showed scavenging activity of NO and $O_2{^-}$. In addition, the extract of P. frutescens exerted the protective effect against peroxynitrite ($ONOO^-$) induced by 3-morpholinosydnonimine. It suggests that P. frutescens would have the protective role against $ONOO^-$ itself and its precursors, NO and $O_2{^-}$. Furthermore, the aging model of hydrogen peroxide ($H_2O_2$)-treated WI-38 human diploid fibroblast was employed to investigate the anti-aging effect of P. frutescens. $H_2O_2$-treated WI-38 cells showed the loss of cell viability, however before-treatment with P. frutescens to WI-38 cells under premature senescence could delay the cellular aging process. The present study suggests the antioxidative and antiaging potential against free radical-induced oxidative damage of P. frutescens.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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