In the present study, the author investigated to the cytotoxocity in cultured rat hepatocytes of Viscum album lectin. The cytotoxcity effect in Viscum album lectin on the activity of LDH was also investigated. Viscum album lectin significantly increased LDH leakage into medium of hepatocytes treated or untreated with $CCl_4$ (p<0.001). However, Viscum album lectin significantly increased LDH leakage from $CCl_4$-induced hepatocyte (p<0.001). There was a significant increase in LDH levels relative to the control group. Histological observation basically supported the result obtained from LDH assay. The livers of rats challenged with $CCl_4$ produced a marked increased cytoplasmic vacuoles and inflammatory cells in number, while the number of necrotic cells and swollen hepatocytes did not change significnatly. Rats administered DMSO alone did not alter the normal hepatic architecture. Histological observation of liver section in rat treated 72 hrs with either Viscum album lectin $CCl_4$-induced liver damage showed number of cytoplasmic vaculoe and necrotic cell. The number of inflammatory cell increased markedly. This results suggest to the conclusion that Viscum album lectin has a effect of hepatotoxicity activator.
The focus of this study was to investigate that cellular parameters and glucose uptake might be altered by extracellular calcium and starvation. Addition of 1 mM $Ca^{++}$ to hepatocytes (equalling to the free calcium concentration of blood) significantly increased intracellular $Na^+$ and decreased $Na^+$ & LDH leakage. This pertains to the hepatocytes of control rats as well as those of rats fasted for 24 and 48. hr. These effects might be come from the membrane-stabilizing effects of calcium. But calcium had no effects on cell volumes, superoxide-formation and glucose uptake. Actually hepatocytes of starved rats showed changes in several cellular parameters. Starvation increased LDH leakage, glucose uptake and the total concentration of $Na^+$ and $Na^+$ whereas it markedly decreased cell volumes. Since total tonicity remained unchanged, intracellular $Na^+$ and $Na^+$ could contribute to a higher share of total osmolarity in starvation. Starvation increased the cytoplasmic pH because $R-NH^{3+}$ions and their corresponding counterions disappeared. This increase may be related to suppress the protonization of amino groups in proteins. Starvation decreased hepatic glycogen, a major compound that affects cytosolic volume of hepatocytes. The data indicate that starvation increases the glucose transport activity. The possible molecular basis will be discussed.
Toluene inhalation increases glutamate level and its receptor in various brain regions. In this study, nitric oxide synthase (NOS) activities were investigated in various rat brain regions using NADPH diaphorase staining method which examined histochemical changes of NOS in the neural cells. Also, in vitro LDH leakage assay and MTT test were performed to investigate the toxic influences of toluene in cultured granule cell of rat cerebellum which was significantly affected with toluene in vivo. Rats were exposed to toluene of 10000 ppm for 3 days. 7 days and 14 days by 20 min $\times$ 2 times a day. NADPH diaphorase staining was processed in the different brain regions after inhalation. NADPH diaphorase staining density was not significantly changed at 3 days inhalation group, but the density decreased in proportion to the duration of toluene inhalation. Over 30% of staining density was decreased at 14 days group which was maximum duration of inhalation in this study. The tendency of staining density decrease was significant in granule cell of cerebellum. Cell death by toluene exposure was observed in cultured cerebellar granule cell. $EC_{50}$ measured with LDH leakage assay and MTT test were 43 mM and 72 mM respectively.
The acute cytotoxicities of chloroquine sulfate, propranolol, ascorbic acid, acetylsalicylic acid and acrylamide on cultured adult rat hepatocytes were evaluated by the use of LDH leakage and NR uptake test. On the basis of $IC_{50}$ values, the rank order of cytotoxicities of these drugs in both tests was chloroquine sulfate > propranolol > acetylsalicylic acid > ascorbic acid. The $IC_{50}$ of LDH test was very similar to that of NR uptake test. Thus, we concluded that both tests are reliable and sensitive methods in detecting toxicity in adult cultured rat hepatocytes.
In vitro cell culture system has been proposed as a promising alternative model to in vivo skin irritation test. These studies were performed to screen the cytotoxicity effects of surfactants using normal human skin fibroblasts. Cell membrane integrity assessed by the leakage of lactate dehydrogenase (LDH) and mitochondrial integrity by MTT [3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyl tetrazolium bromides reduction test were affected in a dose dependent manner. The irritation potential of surfactants to human skin patch test, and the changes of capillary permeability by rabbit intradermal safety test were assessed as in vivo methods. Our results suggest that LDH leakage assay and MTT reduction test using cultured human fibroblasts could be predictive for the irritancy of various surfactants in human, and LDH assay is superior correlated with in vivo test (r=0.886) to MTT test with in vivotest (r=0.757).
본 연구는 굴 가수분해물의 간 보호 효과를 확인하는 것을 목표로 하였다. 굴은 많은 기능적 요소를 가지고 있다고 알려져 있으며 특히, 효소에 의해 생산된 가수분해물은 우수한 기능적 물질을 포함한다. 타크린으로 유발한 간세포 독성에 대한 효소별 굴 가수분해물의 보호 효과를 확인하기 위하여 HepG2세포를 이용하여 in vitro상에서 확인하였다. 사용한 샘플은 Neutrase, Flavourzyme, Protamex을 이용하여 효소 가수분해한 것이다. 타크린으로 손상을 유발한 간세포에서는 GOT와 LDH가 증가하게 된다. 굴 효소 가수분해물을 처리한 실험군에서는 아무런 처리를 하지 않은 실험군에 비하여 높은 세포 생존율을 확인할 수 있었다. 또한 GOT와 LDH 역시 감소하는 것을 알 수 있었다. 본 연구를 통하여 타크린 독성에 대한 신약, 식품의 기초 자료를 제공할 수 있을 것으로 기대된다.
In order to assess the correlation of the myocardial damage and the duration of cardiopulmonary bypass, measurement of creatine kinase [CK], lactate dehydrogenase [LDH], asparatate aminotransferase [AST], and MB band of CK [CK-MB] were carried out on the first, third, fifth, seventh, and ninth day in 44 patients following open heart surgery [POD 1,3,5,7,9]. And the patients were divided into three groups according to the duration of aortic cross clamp time [ACT]: Group I [ACT< 60 minutes. n=19], Group II [60 minutes < ACT< 90 minutes, n=7] and Group III[90 minutes > ACT, n=18]. 1. The leakage of CK in total patients increased to the highest level at POD 1, with rapid decrease and recovery at POD 7. The leakage of CK in Group III were greater than in Group I from POD 1 to POD 3 [P < 0.01]. The recovery time of CK level was shorter in Group I [POD 3] than in Group II and III [POD 7]. 2. The serum levels of LDH in total patients increased to the highest level at POD 1, with slow recovery until POD 9. The levels of LDH in Group III were higher than in Group I until POD 9 [P < 0.005]. The levels of LDH in Group I and II recovered but not in Group III. 3. The serum levels of AST in total patients increased to the highest level at POD 1, with rapid decrease and recovery at POD 7. The levels of AST in Group III were greater than in Group I from POD 1 to POD 5 [P < 0.05]. The recovery time of AST level was shorter in Group I and II [POD 5] than in Group III [POD 7]. 4. The positive cases for CK-MB in 36 patients were 22 [61.1 %] as a whole, 5[41.6%] in Group I, 4[57.1 %] in Group II, 13[76.4 %] in Group III at POD 1, and a case in each group at POD 3, and only a case in Group Ill at POD 5. It is concluded that the myocardial injury was closely related with the duration of cardiopulmonary bypass in open heart surgery.
Forty two consecutive patients who had had valve replacement with St. Jude Medical prosthesis were studied on a view point of intravascular hemolysis. Patients were consisted of 14 mitral valve replacement, and 7 aortic valve replacement, and 21 double, mitral and aortic, valve replacement. Serum LDH, indirect bilirubin, GOT, hemoglobin levels and ret-iculocyte count were pursued in postopeative 1st day, 3rd day, 7th day, 14th day and 21th day. Postoperatively, all patients were not detected paravalvular leakage on the ech-ocardiographical study. The patients with double valve replacement revealed higher levels of LDH on postopeative 14th day[P<0 05] than those with single valve replacement. Among the patients with single valve replacement, the patients with aortic valve replacement revealed slightly higher levels of entire postopeative data, but considered insignificant. There was correlation between the severity of hemolysis and the size of replaced aortic valve. In the postoperative LDH levels, the patients with small sized-aortic valve[less than 21mm in diameter] replacement revealed higher levels of postoperative 3rd day, 7th day and 14th day than those with large size[more than 23mm in diameter]. The patients with high level LDH of greater than 800 WU /L on postoperative 7th day were 61.9%[26 of 42]. The high LDH frequency of DVR was 71.4%[15 of 21], MVR 50.0%[7 of 14] and AVR, 57.1%[4 of 7]. The level of LDH declined gradualiy thereafter through postoperative 3 weeks. In conclusion, intravascular hemolysis after prosthetic valve replacement was dependent on position of valve replacement and size of valve. And this study supports the conventional valve selection and usage in our hospital. The patients with subclinical hemolysis after valve replacement should be placed on a close observation.
무지개송어 아가미상피세포를 이용하여 cortisol에 의해 유도된 세포 손상에 대항하는 아연의 보호 효과를 연구하였다. 24시간 동안 cortisol에 노출된 세포들은 농도 의존적으로 LDH 방출이 증가하였고, 세포 생존율은 감소하였다. 아연($100{\mu}M$$ZnSO_4$) 처리에 의해 이와 같은 영향이 감소하였고, 아연은 cortisol에 의해 유도된 caspage-3 활성, 즉 apoptosis에 대항하여 세포를 보호하였다. Cortisol에 의해 유도된 세포 사멸, LDH 방출과 caspase-3 활성은 glucocorticoid 수용체의 길항제인 Mifepristone(RU-486) 처리에 의해 차단되었는데, 이것은 세포 손상이 cortisol과 관련이 있다는 것을 제안하였다. 더하여 cortisol에 의해 유도된 세포 손상 모델에서 MT, GST 그리고 G6PD와 같은 항산화 유전자 발현에 대한 아연의 영향을 연구했다. MTA, MTB, GST 그리고 G6PD mRNA 수준은 아연과 cortisol을 각각 단독 처리에 의해 그리고 아연과 cortisol을 동시 처리에 의해 증가하였다. 이와 같은 증가는 아연이나 cortisol 단독 처리보다는 $100{\mu}M$$ZnSO_4$와 $1{\mu}M$ cortisol을 동시에 처리했을 때 MTA, MTB, GST 그리고 G6PD mRNA 수준이 더 높았다. 아연 처리에 의해 세포 내 자유 아연 농도가 증가하였고, 이와 같은 반응은 cortisol과 아연을 함께 처리했을 때 세포 내 자유 아연 농도가 더 증가하였다. 결론적으로 아연 처리는 간접적인 항산화 활성을 통해 cortisol에 의해 유도 세포독성 및 apoptosis를 저해하였다.
Protective effects of various natural flavonoids on carbon tetrachloride $(CCl_4)-induced$ hepatotoxicity were investigated in primary cultured rat hepatocytes. Some of these flavonoids decreased the ALT and LDH releases induced by $CCl_4$ in A dose-dependent manner. Neohesperidin, hesperetin, baicalin, baicalein and quercetin inhibited $CCl_4-induced$ alanine aminotransferase (ALT) release. In addition, quercetin, quercitrin, neohesperidin, baicalin, baicalein and naringin reduced $CCl_4$ induced lactate dehydrogenase (LDH) leakage. Among these flavonoids, quercitrin, quercetin, baicalin and baicalein possessed potent protective effects and were selected for the further investigation on lipid peroxidation. These four flavonoids inhibited dose dependently $CCl_4-induced$ lipid peroxidation. Especially, the protective effects of quercetin and baicalein were similar to silybin as a well-known hepatoprotective agent. These results suggest that these four flavonoids have significant cytoprotective effects and possibility of therapeutic effect on chemical-induced liver diseases.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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