SMB 크로마토그래피를 위한 예비 실험으로서 L-ribose와 L-arabinose의 혼합물의 분리 특성을 $NH_2$ 컬럼을 사용하여 확인하였고 두 성분 분리 최적 조건으로 Acetonitrile과 증류수의 조성이 85/15 (v/v)에서 실험을 수행하였다. PIM(Pulse input method)과 Aspen chromatography 전산모사를 통해 L-ribose와 L-arabinose가 선형 흡착등온식을 따르는 것을 알 수 있었으며 각 성분의 Henry상수를 추산하였고 다음과 같다. $$C_{S,Ribose}=3.51{\cdot}C_{M.Ribose}$$$$C_{S,Arabinose}=5.07{\cdot}C_{M.Arabinose}$$ 이를 바탕으로 SMB 크로마토그래피의 최적 운전조건을 수립하기 위하여 Triangle 이론에 의한 운전 조작변수를 추산함으로서 $m_2\;=\;3.51$, $m_3\;=\;5.07$일 때 즉, 삼각형에서 꼭지점의 조건에서 L-ribose와 L-arabinose의 순도가 각각 85, 80% 정도로 두 성분의 분리에 있어서 가장 효과적인 운전 조건임을 확인 할 수 있었다.
The use of L-carbohydrates and their corresponding nucleosides in medicinal application has greatly increased. For example L-ribose has been much in demand as the starting material for curing hepatitis B. High performance liquid chromatography (HPLC) method was studied for the analysis of ribose and arabinose fractions from ion exchange chromatography (IEC). Dowex Monosphere 99 Ca/320 resin was packed in IEC to separate ribose and arabinose under various operating conditions. $NH_{2}$ and sugar HPLC columns were then used to analyze the fractions from the IEC column. Pulse input method (PIM) was also used to measure adsorption isotherms of ribose and arabinose in the Dowex column and HPLC columns. Experimental results and simulations by ASPEN chromatography were compared with fair agreement.
D-Ribose is a five-carbon sugar used for the commercial synthesis of riboflavin, antiviral agents, and flavor enhancers. Batch fermentations with transketolase-deficient B. subtilis JY1 were carried out to optimize the production of D-ribose from xylose. The best results for the fermentation were obtained with a temperature of $37^{\circ}C$ and an initial pH of 7.0. Among various sugars and sugar alcohols tested, glucose and sucrose were found to be the most effective for both cell growth and D-ribose production. The addition of 15 g/l xylose and 15 g/l glucose improved the fermentation performance, presumably due to the adequate supply of ATP in the xylose metabolism from D-xylulose to D-xylulose-5-phosphate. A batch culture in a 3.7-1 jar fermentor with 14.9 g/l xylose and 13.1 g/l glucose resulted in 10.1 g/l D-ribose concentration with a yield of 0.62 g D-ribose/g sugar consumed, and 0.25 g/l-h of productivity. Furthermore, the sugar utilization profile, indicating the simultaneous consumption of xylose and glucose, and respiratory parameters for the glucose and sucrose media suggested that the transketolase-deficient B. subtilis JY1 lost the glucose-specific enzyme II of the phosphoenolpyruvate transferase system.
L-리보스는 항바이러스 약의 출발물질로 근래 관심의 대상이다. 이 물질은 에피머 반응에 의해 L-아라비노스로 부터 얻을 수 있다. 몰리브덴 산화물이나 몰리브덴산 촉매 그리고 메탄올/물 용액에서 에피머 반응을 수행하였다. 반응 온도, 메탄올 분율, 촉매종류를 선정하여 최적 반응을 찾고자 하였다. 이온교환크로마토그래피를 이용하여 에피머 반응물을 분리하였고 L-리보스 HPLC 크로마토그램에서 반응수율을 계산하였다. Sodex 이온교환 HPLC 칼럼과 Phenomenex $NH_2$ HPLC 칼럼을 분석의 편의성 면에서 비교하였다. 20% 메탄올, $60^{\circ}C$, 그리고 40 g/L 몰리브덴산 조건에서 21% 최대수율을 얻었다.
Kim, Sung-Han;Lee, Sang-Jun;Sun, Won-Suck;Oh, Sung-Wook;Kim, Jung-Han
Archives of Pharmacal Research
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제22권6호
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pp.619-623
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1999
$2^{l},3^{l}$-dideoxyisoguanosine was synthesized from guanosine via intermediate 6-[(4-methyl-phenyl)thio]-2-oxo-9-($2^{l},3^{l},5^{l}$-tri-O-acetyl-$\beta$-D-ribofuranosyl)-2,3-dihydropurine (4). The 2-oxo, 6-amino and $5^{l}$-hydroxy triprotected isoguanosine derivative was utilized to reduce high polarity and promote poor solubility of intermediates. The protecting groups for oxo and 6-amino were easily removed in reduction of olefin in ribose without additional reaction steps.$2^{l},3^{l}$-Vicinal diol in ribose sugar moiety was transformed to olefin with Bu3SnH by radical reaction via bisxanthate. Removing $5^{l}$-O-TBDMS protecting group gave final product, $2^{l},3^{l}$-dideoxyisoguanosine (12) in a 10% overall yield.
${\text\tiny{D}}-Allose$ is a potential medical sugar because it has anticancer, antihypertensive, antiinflammatory, antioxidative, and immunosuppressant activities. Allose production from fructose as a cheap substrate was performed by a one-pot reaction using Flavonifractor plautii ${\text\tiny{D}}-allulose$ 3-epimerase (FP-DAE) and Clostridium thermocellum ribose 5-phosphate isomerase (CT-RPI). The optimal reaction conditions for allose production were pH 7.5, $60^{\circ}C$, 0.1 g/l FP-DAE, 12 g/l CT-RPI, and 600 g/l fructose in the presence of 1 mM $Co^{2+}$. Under these optimized conditions, FP-DAE and CT-RPI produced 79 g/l allose for 2 h, with a conversion yield of 13%. This is the first biotransformation of fructose to allose by a two-enzyme system. The production of allose by a one-pot reaction using FP-DAE and CT-RPI was 1.3-fold higher than that by a two-step reaction using the two enzymes.
신호배열 돌연변이인 rbsB 103는 전구체 리보스 결합단백질을 세포질내에 축적시키고, rbsB 106 복귀유전자는 이 전구체를 숙성 가능하게 하여 페리플라슴으로 수송되게 한다.(Iida el at., 1985, Park, el at., 1988). 본고에서는 rbsB 유전자의 세 allele, rbsB, rbsB 103와 rbsB 106를 이들이 코딩하는 단백질을 대량생산 하그l자 람다 P 프로모터 조절하에 클론하고 나아가서 다섯종의 단백질을 순수정제하였다.. 전구체 단백질의 pI는 8.0, 숙성단백질의 $P_{L}$는 7.5임을 밝혔다. 순수정제된 단백질의 아마노 말단의 아미노산 배열을 결정하여 DNA 염기서열로부터 밝혀진 아미노산 변화를 확인하였다.
본 연구는 10 주 동안 건강한 20대 성인 남녀 14명을 대상으로 D-리보오스 함유 비율이 다른 설탕 (D-리보오스 5%, 10%, 14% 함유) 섭취가 혈당 반응과 GI에 미치는 영향을 분석하여 혈당 저감화 효과를 확인하고자 하였다. 설탕과 D-리보오스함유 설탕의 혈당반응값을 비교하였을 때 D-리보오스 함유 설탕인 RB5, RB10, RB14 순으로 낮아졌으며 RB10, RB14는 설탕에 비해 유의적으로 낮은 혈당반응값을 보였다. 백설탕, RB5, RB10, RB14의 GI는 각각 67.39, 67.07, 47.57, 45.62로 설탕과 RB5는 중 GI 식품으로, RB10과 RB14는 저 GI 식품으로 분류되었으며, RB10, RB14의 GI는 설탕과 RB5의 GI에 비해 유의적으로 낮았다. 혈당 변화에 따른 Cmax를 보면 포도당 61.73 mg/dL에 비해 RB5, RB10, RB14가 각각 49.43 mg/dL, 37.25 mg/dL, 35.15 mg/dL로 유의적으로낮았으나, 설탕의 Cmax 58.18 mg/dL과 비교 시 RB10, RB14의 Cmax는 유의적으로 낮았으나, RB5와는 유의적인 차이를 보이지 않았다. 따라서 D-리보오스 함유 설탕의 혈당 상승 억제 효과는 D-리보오스를 5% 함유 시 보다는 D-리보오스를 10% 이상 함유할 때 더 효과적인 것으로 나타났다. 그러나 D-리보오스를 10%, 14% 함유한 설탕의 GI값과 혈당 변화율이 유사하게 나타나고 있으므로 D-리보오스 14% 함유보다는 D-리보오스 10% 함유하는 것이 혈당 저감화 효과 및 비용적인 측면을 고려할 때 기능성 설탕의 비율로 더 적절할 것으로 사료된다.
리보스에 대한 화학주성이 결핍되고 리보스 결합 단백칠의 수송 결핍으로 전구체 만백칠이 셔1포젤내에 축적된 rbsB 103 선호 배열 돌연변이에 대해서는 이미 보고한 바 있다(Iida et ai., 1985). 본고에서는 이 변이주로부터 리보스 화학주생이 정상인 복 귀변이주를 분리하여 분석한 결과를 보고하는 바, 이 복귀변이주에서 분리한 mini cell에서 숙성 단백질이 합성되고 이 복귀변이가 리보스 결합 단백질의 구조유전자의 아미노말단을 코딩하는 부위에 일어났음을 보였다 DNA 염기서열 분석에 의해 원래 rbsB 103 선호애열 변이 이외에 또 하냐의 변이가 일어나서 원래 돌연변이형을 상쇄한 pseudorevertant임을 확인하였다. 나아가 삼투압 충격분석으로 복귀변이주에서 합성된 숙성 리보스 결합 단백질이 페라플러슴으로 수송되었음을 보였다. 야생형에서 합성된 전구체, 숙성 리보스 결합 단백질과 복귀변이주에서 합성된 29, 32 kd 단백질의 펩티드 패턴을 H. P. L. C . 로 조사하여 그 관련성을 확인하였으며, 전구체에 고유한 두 펩티드가 돌연변이주의 경우와 비교하여 복귀변이주에서 소수성이 더 큰 것을 확인하였다. 야생형과 복귀변이주에서 합성된 전구체 단백질의 생체내 신호배열 절단속도플 비교한 결과 복귀변이주에서 그 속도가 더 느림을 알 수 있었다. 그러나 야생형과 복귀변이주에서 숙성단백질을 순수 분리정제하여 아미노산말단 아미노산 배열을 분석한 결과 복귀변이주의 신호배열내에 야생형과 다른 두 아미노산의 존재에도 불구하고 절단부위에는 변화가 오지 않음을 보였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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