Escherichia coli K-12 (E. coli K-12) is a representative indicator globally used for distinguishing and monitoring dynamic fates of pathogenic microorganisms in the environment. This study investigated how to most critically quantify lacZ ($\beta$-galactosidase) gene in E. coli K-12 by two different real-time polymerase chain reaction (real-time PCR) in association with three different DNA extraction practices. Three DNA extractions, i.e., sodium dodecyl sulfate (SDS)/proteinase K, magnetic beads and guanidium thiocyanate (GTC)/silica matrix were each compared for extracting total genomic DNA from E. coli K-12. Among them, GTC/silica matrix and magnetic beads beating similarly worked out to have the highest (22-23 ng/${\mu}L$) concentration of DNA extracted, but employing SDS/proteinase K had the lowest (10 ng/${\mu}L$) concentration of DNA retrieved. There were no significant differences in the quantification of the copy numbers of lacZ gene between SYBR Green I qPCR and QProbe-qPCR. However, SYBR Green I qPCR obtained somewhat higher copy number as $1{\times}10^8$ copies. It was decided that GTC/silica matrix extraction or magnetic beads beating in combination with SYBR Green I qPCR can be preferably applied for more effectively quantifying specific gene from a pure culture of microorganism.
Kim, Sun-Ju;Jung, Hyun-Jin;Chung, Bong-Chul;Choi, Man-Ho
Mass Spectrometry Letters
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v.2
no.3
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pp.69-72
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2011
Defective synthesis of the steroid hormones by the adrenal cortex has profound effects on human development and homeostasis. Due to the time-consuming chromatography procedure combined with mass spectrometry, the matrix-assisted laser desorption ionization method coupled to the linear ion-trap tandem mass spectrometry (MALDI-LTQ-MS/MS) was developed for quantitative analysis of 10 adrenal steroids in human serum. Although MALDI-MS can be introduced for its applicability as a high-throughput screening method, it has a limitation on reproducibility within and between samples, which renders poor reproducibility for quantification. For quantitative MALDI-MS/MS analysis, the stable-isotope labeled internal standards were used and the conditions of crystallization were tested. The precision and accuracy were 3.1~35.5% and 83.8~138.5%, respectively, when a mixture of 10 mg/mL ${\alpha}$-cyano-4-hydroxycinnamic acid in 0.2% TFA of 70% acetonitrile was used as the MALDI matrix. The limit of quantification ranged from 5 to 340 ng/mL, and the linearity as a correlation coefficient was higher than 0.988 for all analytes in the calibration range. Clinical applications include quantitative analyses of patients with congenital adrenal hyperplasia. The devised MALDI-MS/MS technique could be successfully applied to diagnosis of clinical samples.
A polymeric micelle drug delivery system was developed to enhance the solubility of poorly-water soluble drug, biphenyl dimethyl dicarboxylate, DDB. The block copolymers consisting of poly(D,L-lactide) (PLA) as the hydrophobic segment and methoxy poly(ethylene glycol) (mPEG) as the hydrophilic segment were synthesized and characterized by NMR, DSC and MALDI-TOF mass spectroscopy. The size of the polymeric micelles measured by dynamic light scattering showed a narrow monodisperse size distribution with the average diameter less than 50 nm. The MW of mPEG-PLA, 3000 (MW of mPEG, 2 K; MW of PLA, 1K), and the presence of hydrophilic and hydrophobic segments on the polymeric micelles were confirmed by MALDI-TOF mass spectroscopy and NMR, respectively. Polymeric micelle solutions of DDB were prepared by three different methods, i.e. the matrix method, emulsion method and dialysis method. In the matrix method, DDB solubility was reached to 13.29 mg/mL. The mPEG-PLA 2K-1K micelle system was compared with the poloxamer 407 micelle system for their critical micelle concentration, micelle size, solubilizing capacity, stability in dilution and physical state. DDB loaded-polymeric micelles prepared by the matrix method showed a significantly increased aqueous solubility (>5000 fold over intrinsic solubility) and were found to be superior to the poloxamer 407 micelles as a drug carrier.
Atherosclerosis is a chronic inflammatory disease of the arterial wall characterized by progressive accumulation of lipids, cells, and extracellular matrix. Matrix metalloproteinases(MMPs) and tissue inhibitor of metalloproteinases(TIMPS) contribute to vascular matrix remodeling in atherosclerosis, and some cytokines may play role in the synthesis or activation of MMPs or TIMPs. Material and Method: We produced experimental atherosclerotic plaques in 9 rabbits by atherogenic hypercholesterol diet for 12 weeks, and 10 other rabbits were used as control group with standard laboratory chow, At that time, 19 rabbits were sacrificed and aorta, coronary arteries and blood specimens were prepared. The expressions of MMP-9, TIMP-2 and interleukin(IL)-18, and the bioactivity of IL-6 were investigated with H&E stain, immunohistochemical stain, immunoblotting(Western blot analysis), and bioassay. Result: Serum cholesterol in the experimental group increased up to 1258$\pm$262 mg/dL(control group: 41$\pm$7 mg/dL). All experimental group showed well-developed atherosclerotic plaques in aorta and coronary artery. The expression of MMP-9 in aorta and coronary artery of the experimental group showed significant increase than that of the control group by immunohistochemistry. Among the experimental group, complicated lesions with intimal rupture or complete luminal occlusion, demonstrated stronger expression of MMP-9. Interestingly, there was no difference in expression of TIMP-2 between the experimental and the control group. These findings were confirmed by Western blot analysis. The bioassay revealed significant up-regulation of serum bioactivity of IL-6 in the experimental group(4819.60$\pm$2021.25 IU/$m\ell$) compared to that of IL-6 in the control group(27.20 $\pm$ 12.19 IU/$m\ell$). IL-18 was expressed in all atherosclerotic plaques, whereas little or no expression was detected in the control group. Conclusion: The increased MMP-9 expression along with the unchanged TIMP-2 expression seem to be contributory factors in extracellular matrix degradation in atherosclerosis. Focal overexpression of MMP-9 may promote plaque destabilization and cause complications of atherosclerotic plaques such as thrombosis with/without acute coronary syndrome. Elevation of IL-6 and IL-18 may be more than just markers of atherosclerosis but actual participants in lesion development. Identification of critical regulatory pathway is important to improve the understanding of the cellular and molecular basis of atherosclerosis and may open the way for novel therapeutic strategies.
Red beet (Beta vulgaris L.) is a root vegetable and a popular functional food ingredient of dark red-purple appearance due largely to betacyanins, principally betanine (75-95%) and its isomer, isobetanine (15-45%). This study developed an analytical method for beet red in terms of betanine and isobetanine in processed food products labeled with beet red as a food additive. High Performance Liquid Chromatography-Diode Array Detector (HPLC-DAD) was used with a C18 column. Linearity, limit of detection (LOD), limit of quantitation (LOQ), accuracy, precision and uncertainty in measurement were calculated for method validation. Matrix-matched calibration was applied to the candy, ice cream, and cocoa product, respectively, and R2 was ≥0.9998, showing a high level of linearity. The LOD and LOQ were 0.16 to 0.32 and 0.48 to 0.97 mg/L, respectively. As a result of repeated intra-day and interday experiments to validate the accuracy and precision of the analytical method, the recovery rates were 96.0-103.1% and 100.0-102.2%, respectively and the RSD% was 0.5-3.3% and 0.9-3.8%, respectively. Moreover, the measurement uncertainty was estimated to be 1.71-12.43% depending on the matrix and the measured concentration. In this study, betanine and isobetanine were quantified (8.4-3,823.4 mg/kg) by applying the developed analytical method to processed food products (n= 26; e.g., candy, ice cream, and other processed foods) labeled with beet red as a food additive.
Journal of Korean Society of Industrial and Systems Engineering
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v.3
no.3
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pp.55-58
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1980
Today, L.P. model has often been used in solving economic and managemental phenomena. But in case of adopting L.P. model in dealing with practical economic and managemental problems there is a possibility that we have difficulties in solving these problems because of greatness of model size, cost for collecting data, cost for adjusting matrix, and etc. In this respect "Decomposition Algorithm for L.P." has been used in overcoming the difficulties above stated. In this paper therefore, I will try to introduce and them criticize Dantzig -Wolfe's "Decomposition Method" and Kornai - Liptak's "Two - Level Planning".ot;Two - Level Planning".uot;.
Journal of the Korean Data and Information Science Society
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v.18
no.3
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pp.827-832
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2007
Several partial orders on integral partitions have been studied with many applications such as majorizations, capacities of quantum memory and embeddabilities of matrix algebras. In particular, the embeddability, stable embeddability and strong-stable embeddability problems arise for finite dimensional irreducible modules over a complex simple Lie algebra L. We find a sufficient condition for an L-module strong-stably embeds into another L-module using formal character theory.
This study confirmed the potential of Punica granatum L. extract for functional activity verification and cosmetic development. The electron-donating ability of Punica granatum L. extract was shown 60.6% at a 1,000 ㎍/ml concentration. Its ABTS+ radical scavenging ability was shown 93.9% at a 1,000 ㎍/ml concentration. Additionally, the inhibitive effects of elastase and collagenase inhibition effects were measured as 30% and 47.2%, respectively, at a 1,000 ㎍/ml concentration. To determine the effect of Punica granatum L. extract on the proliferation of fibroblasts (CCD-986sk), cell viability was measured using a 3-[4,5-dimethyl-thiazol-2-yl]-2,5-diphenyl-tetrazoliumbromide (MTT) assay. As a result, survival rates of 130% or higher at a 500 ㎍/ml concentration or less were confirmed. According to the results of Western blot with Punica granatum L. extract, the expression inhibition rates of matrix metalloproteinase-1 (MMP-1), matrix metalloproteinase-2 (MMP-2), and matrix metalloproteinase-3 (MMP-3) were decreased by 23.2%, 81.9%, and 69.2%, respectively, at a 100 ㎍/ml concentration. Based on the results above, O/W liquid crystal cream with 0.1% Punica granatum L. extract was prepared. The stabilities were tested at 4, 25, 45, and 50℃. By checking the pH, change over time, and stability by temperature, it was confirmed that all were stable for one month. Thus, Punica granatum L. extract shows potential as a natural material for cosmetics.
We compute explicitly the matrices represented by Toeplitz operators on the Hardy space over the unit circle with respect to a special orthonormal basis constructed by author in terms of their symbols. And we also find a necessary condition for the matrix generated by the product of two Toeplitz operators with respect to the basis to be a Toeplitz matrix by a direct calculation and we finally solve commuting problems of two Toeplitz operators in terms of symbols. This is a generalization of the classical results obtained regarding to the orthonormal basis consisting of the monomials.
In [1], it was shown that for $n\geq 2$ the least number of nonzero entries in an $n\times n$ orthogonal matrix is not direct summable is 4n-4, and zero patterns of the $n\times n$ orthogonal matrices with exactly 4n-4 nonzero entries were determined. In this paper, we construct $n\times n$ orthogonal matrices with exactly 4n-r nonzero entries. furthermore, we determine m${\times}$n sparse row-orthogonal matrices.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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