Different DL-amino acids were studied as inducers of D-amino acid oxidase (DAAO) and for their influence on the growth of Trigonopsis variabilis. DL-amino acids with non-polar side groups were found to be the befit inducers of DAAO. Maximum increase in the growth of Trigonopsis variabilis (gram dry weight per liter culfure) was observed with DL-methionine (2.39 g/l) followed by DL-serine (2.22 g/l) and DL-alanine (2.21 g/l).
The antibacterial actions of two amino acid oxidases, a D-amino acid oxidase from hog kidney and a L-amino acid oxidase from the venom of Agkistrodon halys, were investigated, demonstrating that both enzymes were able to inhibit the growth of both Gram-positive and Gram-negative bacteria, and that hydrogen peroxide, a product of their enzymatic reactions, was the antibacterial factor. However, hydrogen peroxide generated in the enzymatic reactions was not sufficient to explain the degree to which bacterial growth was inhibited. A fluorescence labeling assay showed that both of these two enzymes could bind to the surfaces of bacteria. To the best of our knowledge, this is the first report regarding the antibacterial activity of the D-amino acid oxidases.
The cytotoxicity of animal venoms (snakes, insects and marine animals) was measured against SNU-1 (stomach cancer cells) by dye uptake assay (MTT method). And also L-amino acid oxidase (AAO) activity of the venoms was compared. Among them, the venom from Ophiophagus hannah (king cobra) showed a strong AAO activity as well as a high potent cytotoxicity. Cytotoxic protein having a AAO was then partially purified by HPLC-GPC and two fractions (Fr. I and Fr. II) were collected. The $IC_{50}$ values of Fr. I and Fr. II were 0.19 ${\mu}g/ml$ and 1.36 ${\mu}g/ml$, respectively. The results suggested that the cytotoxicity of king cobra venom may be due to its AAO activity.
The cytotoxicity of crude insect drugs was measured using HeLa cells originating from human cervix and uterine cancer. using the dye uptake assay in order to find potential anticancer agents. Three kinds of extracts (buffer, methanol and ethylacetate) were prepared from 26 insects and used as raw materials for the activity assay. Among these, the buffer extracts from Tabanus, Mylabris and Huechys showed a potent anticancer activity, and those from Catharsius, Red ant, Scorpion, Tabanus and Vespae Nidus showed a strong L-amino acid oxidase (AAO) activity as well as cytotoxicity. In contrast, buffer extracts from Gryllotalpa orientalis and Apriona germari larvae showed greater/more rapid Hela cell growth than that of other insects.
Trigonopsis variabilis는 버l타락탐 항생제인 cephalosporin C (ceph C)를 ${\alpha}$-keto-adipyl-7 a aminocephalosporanic acid(AKA-7 ACA)로 생변 환하는 강력한 D-amino acid oxidase 효소를 갖고 있다. 본 연구는 이 D-AAO 효소의 유전자를 추출하기 위하여 polymerase chain reaction (PCR)을 사용하였다. PCR 단편을 콜로닝하기 위하여 Taq D DNA polymerase, Klenow, T4 DNA polymerase I, Alkaline phosphatase Calf Intestinal와 T4 kinase 의 효소반응을 이용하여 4가지의 방법을 샤용한 결 과, blunt - end 의 PCR fragment 를 phosphoryl lation하고 blunt -end의 pUC18 plasmid를 dephos phorylation 한 후 ligation 한 것 이 가장 좋은 클로 닝 효율을 보였다. Ceph C에 대한 D-AAO 효소의 활성은 재조합 E. coli의 세포추출액과 permea bilized cells에서 모두 확인할 수 있었다.
Sixteen kinds of naturally occurring phenolic compounds including 5 stilbenes, 7 flavonoids and 4 anthraquinones were examined in the inhibitory activity against rat liver AADC(aromatic L-amino acid decarboxylase) in vitro, using 5-hydroxytryptophan as a substrate. Three hydroxystilbenes, resveratrol 1, rhapontigenin 3 and piceatanol 5, which were known to be monoamine oxidase A inhibitors, exhibited a significant inhibition against AADC($IC_{50}$=20, 8 and $5\;{\mu}M$, respectively). By the comparison of the activity of each phenolic compound, it was suggested that the 3',4'-dihydroxyphenyl group of stilbenes or flavones was the best pharmacophore for the AADC inhibitory activity.
Characterization of Polyphenol oxidase (PPO) in Perillae Folium, particullarly inhibitor studies were investigated. This enzyme was stable at pH 5.0 and the residual activity of PPO at ${\geq}$ ph 5.5 was estimated to be very low. PPO activity was decreased slightly by adding amino acid with catechol as a substrate, particullary PPO activity was inhibited markedly by cystein, histidine, lysine and arginine. In the absorption spectra of the product formed when catechol was oxidized by PPO, with a ${\lambda}_{max}$ at 410nm, the peak shifted toward ${\lambda}_{max}$ 520nm by addition of L-proline. At relatively low concentrations($10^{-3}M$), sulfite and dithiothreithol completely inhibited PPO activity. Inhibition of PPO activity by amino acids and inhibitors increased or decreased depending on the pH used to measure it.
멜라닌 색소의 생합성 과정에 관여하는 것으로 알려져 있는 효소 및 관련 인자와의 상관성을 검토하기 위하여 자연산 정상넙치와 양식산 백화넙치의 육질과 표피, 미립자 사료와 생물먹이인 Artemia 및 Rotifer에 대하여 단백질의 함량, 멜라닌 색소생성에 관여하는 효소의 활성, 아미노산 조성 및 비타민A와 C의 함량을 비교하였다. 정상넙치표피는 육질에 비하여 단백질의 함량이 높았으나, 백화넙치인 경우는 대체로 비슷한 값이었다. 사료중의 단백질 함량은 미립자 사료 중 Cl이 가장 높았다. catechal oxidase의 활성은 기질과 조효소 농도의 증가와 더불어 증가하였으며, 백화 유무에 관계없이 거의 유사한 값으로 나타났다. 그리고 L-dopa oxidase활성도 동일한 결과였다. 정상넙치의 유리아미노산 함량은 백화개체에 비하여 높았으며, 표피의 경우는 정상넙치가 백화넙치에 비하여 7.5배 가량 높은 값을 나타내었다. 필수아미노산의 조성으로 비교했을 때, 미립자 사료는 Artemia와 Rotifer보다 우수한 단백질원이었다. 그리고 정상넙치의 함황아미노산의 함유량은 백화넙치의 6.3배에 달하였다. 비타민A는 정상 및 백화넙치의 육질과 표피에서 검출되지 않았으나 비타민C는 정상인 넙치표피가 백화넙치 표피에 비해 약 7.8배였으며, 미립자 사료는 100.83mg/100g으로서 사료 중 가장 높았다. 따라서 넙치표피의 멜라닌색소의 생성에는 기질인 방향족 아미노산과 함황아미노산이 큰 영향을 미치는 것으로 판단되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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