• 농약과학회지
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• 제14권4호
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• pp.446-455
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• 2010

주요 농업해충인 담배거세미나방에 대하여 높은 생물활성을 보이는 Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki KB099 균주의 내독소단백질의 특성이 검토되었다. 이 균주의 내독소단백질은 효소 처리 없는 SDS-PAGE 결과 HD-l 균주에서는 일부 용해되어 130 kDa과 60 kDa의 두 개의 단백질밴드가 나타났으나 KB099균주에서는 용해되지 않고 130kDa의 밴드만이 관찰되었다. KB099균주의 내독소단백질에 감수성 해충인 담배거세미나방의 중장액으로 소화하였을 때에는 약 60 kDa 단백질밴드가 형성됨을 확인하였다. 또한 두 균주의 각각의 내독소단백질에 감수성해충의 소화액으로 반응시켰을 때 생물활성이 약했던 HD-l균주는 약6시간 만에 주요 밴드가 사라지는데 비해 활성이 강한 KB099균주는 12시간이상 까지도 활성밴드가 유지되다가 24시간 정도에서 밴드가 사라졌다. KB099균주가 생산하는 내독소단백질 유전자의 탐색을 위한 PCR실험에서 Cry1Aa, Cry1Ab, Cry1Ac, Cry1C, Cry1D 그리고 Cry1I 등 6개의 유전자가 존재함을 확인하였다.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제28권1호
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• pp.43-53
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• 1986

해충의 미생물적 방제를 위한 미생물살충제 중 특히 주목되어지는 Bacillus thruingiensis살충제를 개발함에 있어서 우리나라와 같은 양잠국가에서는 누에에 대한 피해가 우려되므로 익충인 누에에 대해서는 비교적 저독성이고 목적해충에 대해서는 맹독성인 균주를 선발하기 위한 기초자료를 얻고자 plasmid영동상에 의해 확인된 3종의 B.t.균주 kurstaki. aizawai, dendrolimus를 이용하여 Renograffin 이중층법에 의해 분리된 내독소 단백질 및 포자와 내독소 단백질 혼합물 각각을 누에와 흔불나방에 대해 독성을 검정하여 아래와 같은 연구결과를 얻었다. 1. plasmid의 전기영동상을 분석한 결과 kurastaki가 150-1.5Md 사이에 10개, dendrolimus가 75-33Md 사이에 4개, aizawai가 62-4.2Md사이에 6개 band가 나타났다. 2. 누에와 흔불나방에 대한 독성검정결과는 아래와 같다. i)dendrolimus가 누에에 있어서는 가장 저독성이고 목적해충인 흰불나방에 대해서는 kurstaki와 대등한 우수한 살충력을 나타내었다. ii)공시충에 따라 균주간에 독성차이가 크게 나타났으며 kurstaki가 공시충에 따른 독성차이가 가장 작고 비교적 독성이 높은 것으로 나타났다.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제34권1호
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• pp.41-48
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• 1992

해충의 미생물적 방제를 위하여 Bacillus thuringiensis 살충제(BT제) 개발에 관한 기초자료를 얻고자 3균주의 공시균주인 B. thuringiensis var. kurstaki, B. thuringiensis var. dendrolimus, B. thuringiensis var. aizawai와 3종의 공시충으로 누에, 흰불나방, 배추흰나비의 유충을 이용하고 B. thuringiensis 내독소단백질을 alkalidyddor 또는 공시된 3종의 곤충소화액으로 처리하여 전기영동을 비교하여 아래와 같은 결과를 얻었다. 1. 3균주의 B. thuringiensis에서 생산된 내독소단백질은 alkali 또는 곤충의 소화액 처리에 따라서 변화되는 뚜렷한 차이가 없는 것으로 나타났다. 2. 각 균주의 내독소단백질의 분자량은 B. thuringiensis var. aizawai가 130kDa, B. thuringiensis var. kurstaki가 140kDa, 130kDa, 그리고 B. thuringiensis var. dendrolimus가 140kDa의 부분에 2band로 나타났으며, 이들 내독소단백질은 alkali 용액이나 숙주곤충의 소화액으로 처리시 활성화되어 40-65kDa의 저분자 단백질로 전환되었다. 또한 숙주곤충소화액에 따라 내독소단백질의 활성화 속도에 약간의 차이가 있는 것으로 확인되었다.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제36권2호
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• pp.157-161
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• 1994

B. thuringiensis subsp. kurstaki Cry-B에서 cryIA(b) 유전자 promoter 조적을 받는 cryIA(c) 유전자와 그 자신의 promoter 조절을 받는 cryIIA 유전자의 발현 여부와 내독소 단백질의 형태를 관찰하기 위하여, 이들 두 내독소 단백질 유전자를 B.thuringiensis - E. coli shuttle vector를 이용하여 발현벡터 pKC1A와 pKC2A를 각각 제작하였다. 발현벡터 pKC1A와 pKC2A를 B. thuringiensis subsp. kurstaki Cry-B 균주에 형질전환시키고, 이들 형질전환체로부터 각각 bipyramid형과 cuboid형의 정상적인 내독소 단백질이 발현되었음을 확인하였다.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제35권2호
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• pp.120-128
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• 1993

B. t k HD-1 균주에 0.002% SDS와 0.5$\mu$g/ml EtBr을 처리한 결과, 9개의 cry- 변이균주를 분리하였으며 또한 B. t k HD-1균주와 B. cereus 569균주를 혼합배양하는 방법으로 mating 실험을 수행하여 B. t k HD-1으로부터 일부 plasmid가 전이된 11개의 cry+ B. cereus와 2개의 cry=B. cereus를 분리하고 plasmid수와 분자량을 조사하였다. B. t k HD-1의 경우 9개의 plasmid가 존재하였고 일부 plasmid가 curing된 B. t k HD-1변이균주의 경우 29Md plasmid나 44Md plasmid가 반드시 존재하였으나, cry- 변이균주에는 29Md 이상의 모든 plasmid가 소실되어 내독소 단백질 합성에 관여하는 유전자가 기억된 plamid를 결정하였다.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제35권2호
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• pp.129-133
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• 1993

Bacillus thruingiensis var. kurstaki HD-1의 내독소 단백질 유전자의 발현기작을 규명하기 위하여 이 균으로부터 내독소 단백질 유전자가 존재하는 것으로 확인된 29Md와 44Md plasmid를 분리한 후, Sau3AI 제어효소로 부분절단하고, pBR322 BamHI site에 ligation하여, E. coli HB101 strain에 transformation시켜, 3,000여개의 Ampr/Ters한 colony를 얻어 면역학적 방법과 살충적 검정으로 통해 재조합 균주 KC1을 얻었다. PKC1 plasmid DNA는 vector DNA를 포함하여 약 12kb 정도의 크기를 가지며, B. t k HD-1 내독소 단백질과 이동도가 같거나 일치하는 132kd, 117kd의 KC1 specific band 2개를 얻었다. KC1 cell extract를 첨식한 결과 약 80% 치사율을 보였다.

• 한국응용곤충학회지
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• 제28권2호
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• pp.69-75
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• 1989

B. thuringiensis subsp. kurstaki HD-1을 아밀라제 생산배지에 $32^{\circ}C$로 24시간 배양하였을 때 아밀라제 활성은 0.40 units/ml 였고, 50mM EDTA에 의하여 활성이 억제되었으며, 기본배지에 soluble starch와 $Ca^{2+}$, $Mg^{2+}$, $Mn^{2+}$을 첨가했을 때 활성이 비교적 높았고, pH6.5와 7.0 사이에서, 온도 $55^{\circ}C$에서 비교적 활성이 높았다. 아밀라제 생산을 위한 최적 배지로는 0.2% soluble starch, 1.0% bacto-peptone, 0.3% beef extract, 0.5% NaCl, 0.3% $K_{2-}$$KH_{2}PO_{4}$, 0.012% CaCl.$2H_{2}O$, 0.005% $MnSO_{4}$.$H_{2}O$, 0.03% $MgSO_{4}$.$7H_{2}O$이었다. 효소 용액을 에 $HPO_{4}$, 0.1% 탄올 침전시켜 5ml의 0.1M 인산염 완충액에 용해한 용액의 비활성은 2.01 units/mg였고, starch에 대한 효소의 Km 값은 0.80 mg/ml였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제16권2호
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• pp.168-173
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• 1988

곤충치사 독소를 생성하는 Bacillus thuringiensis serovar. kurstaki HD1과 HD73 균주에 대한 내독소 단백질의 특성을 규명하기 위하여 독소단백질의 항체 생산성, 항원 안정성, 정량 및 교차반응실험을 수행하였다. 곤충치사 내독소 단백질에 대한 항체는 토끼 마리당 약 2mg의 내독소 항원을 4회 주사했을 때 급격히 증가하여 6~7회 투여시에 최대치의 항체가 생성되었다. 내독소의 항원 안정성을 ELISA로 조사했을 때 5일 이내는 안정하였으나 9일 이후는 급격히 감소하였다. 간접 ELISA에 의한 B. t. k. HD1과 HD73 내독소의 정량 감도는 각각 50$\mu\textrm{g}$/$m\ell$, 400ng/$m\ell$이었다. HD1과 HD73 균주의 내독소 단백질에 대한 항혈청은 B. t. serovar israelensis 와 침강반응이 일어나지 않았다. B. t. k. 균주의 동일 아종간 내독소 단백질에 대한 항체의 교차반응에서 HD1 내독소 항체는 HD73 균주의 내독소 항원과 부분적으로 반응하였으나 HD73 내독소 항체는 HD1 항원과 100% 반응하였다.

• Journal of Microbiology
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• 제45권6호
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• pp.553-557
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• 2007

In order to detect and identify the most toxic Bacillus thuringiensis strains against pests, we isolated a B. thuringiensis strain (Bn1) from Balaninus nucum (Coleoptera: Curculionidae), the most damaging hazelnut pest. Bn1 was characterized via morphological, biochemical, and molecular techniques. The isolate was serotyped, and the results showed that Bn1 was the B. thuringiensis serovar, kurstaki (H3abc). The scanning electron microscopy indicated that Bn1 has crystals with cubic and bipyramidal shapes. The Polymerase Chain Reactions (PCRs) revealed the presence of the cry1 and cry2 genes. The presence of Cry1 and Cry2 proteins in the Bn1 isolate was confirmed via SDS-PAGE, at approximately 130 kDa and 65 kDa, respectively. The bioassays conducted to determine the insecticidal activity of the Bn1 isolate were conducted with four distinct insects, using spore-crystal mixtures. We noted that Bn1 has higher toxicity as compared with the standard B. thuringiensis subsp. kurstaki (HD-1). The highest observed mortality was 90% against Malacosoma neustria and Lymantria dispar larvae. Our results show that the B. thuringiensis isolate (Bn1) may prove valuable as a significant microbial control agent against lepidopteran pests.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제14권4호
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• pp.325-328
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• 1986

The lethality to Pieris raepi larvae and the safety tests to mice of the endotoxin crystals and the pesticide of B thuringiensis serovar kurstaki were carried out. The LD50 of the endotoxin (3.9$\times$10$^9$ spores/$m{\ell}$) appeared to be 1$\mu$g and that of the pesticide (2.6$\times$10$^9$ spores/$m{\ell}$) was about 9 $\mu$g. When the endotoxin solution and the pesticide were injected to the mice's intraperitoneal cavities, 10 to 20% of the mite were dead. Also in the case of intracerebral injection 20% of the mice were dead at the doses of 7.8$\times$10$^3$ spores and 100% of the mice were dead at the concentration of 7.8$\times$10$^8$ spores. but the mice in the oral, subcutaneous and inhalation treatment groups were safe and healthy. When the pesticide applied to the cabbage field for raepi larvae, 52 to 65% of the larvae in the field were killed in 4 days postapplication.