• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제28권11호
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• pp.1532-1536
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• 2015

To verified the target genes of miR-34c, bioinformatics software was used to predict the targets of miR-34c. Three possible target genes of miR-34c related to spermatogenesis and male reproductive development: zinc finger protein 148 (ZNF148), kruppel-like factor 4 (KLF4), and platelet-derived growth factor receptor alpha (PDGFRA) were predicted. Then, the expression of miR-34c and its target genes were detected in swine testicular tissue at different developmental stages by quantitative polymerase chain reaction. The results suggested that the expression of PDGFRA has the highest negative correlation with miR-34c. Then immunohistochemical staining was done to observe the morphology of swine testicular tissue at 2-days and 3, 4, 5-months of age, which indicated that PDGFRA was mainly expressed in the support cells near the basement membrane during the early development stages of testicular tissue, but that the expression of PDGFRA was gradually reduced in later stages. Therefore, western blot analyzed that the highest expression of PDGFRA was generated in 2-days old testicular tissues and the expression levels reduced at 3 and 4-months old, which correlated with the results of immunohistochemical staining. In conclusion, PDGFRA is a target gene of miR-34c.

• 생명과학회지
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• 제20권5호
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• pp.729-735
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• 2010

본 연구의 목적은 생약복합제제인 SH21B의 adipogenesis 억제 효능에 대한 상세한 분자적 메커니즘을 3T3-L1 지방세포를 이용하여 밝히는 데 있다. 실험에 사용된 SH21B는 7가지 생약성 천연물질인, 황금, 행인, 마황, 석창포, 포황, 원지 및 하엽으로 이루어졌다. 최근, 본 연구진에 의해 3T3-L1을 이용한 in vitro 연구와 마우스를 이용한 in vivo 연구에서 SH21B의 adipogenesis 억제효능이 밝혀진 바 있다. 본 연구에서는 3T3-L1 지방세포가 분화될 때 작용하는 다양한 지방세포형성 조절자들의 유전자 발현이 SH21B에 의해 어떻게 변하는지 살펴보고자 하였다. 실시간중합효소반응(real time PCR) 기술을 이용하여 SH21B를 처리한 지방세포와 그렇지 않은 지방세포를 비교한 결과, 최종마커인 ADIPOQ와 SLC2A4의 유전자 발현이 SH21B에 의해 급격하게 감소함을 알 수 있었다. 최종마커의 발현을 유도하는 핵심전사인자인 $PPAR{\gamma}$와 C/$EBP{\alpha}$의 유전자 발현 역시 SH21B의 처리 시 유의하게 억제되었다. 좀 더 상세한 분자적 메커니즘을 규명하기 위해, 핵심전사인자의 상위에 위치한 다양한 조절자들의 유전자 발현을 분석하였다. 그 결과, 여러 지방세포형성 유도조절자 중, Krox20과 KLF15의 유전자 발현이 SH21B 처리에 의해 유의하게 감소된 반면, C/$EBP{\beta}$와 KLF5의 유전자 발현은 SH21B 처리에 영향을 받지 않았다. 그리고 지방세포형성 억제조절자인 KLF2와 CHOP의 유전자 발현은 SH21B 처리에 의해 유의하게 증가되었다. 이러한 결과들은 SH21B의 지방세포형성 억제효능이 지방세포의 분화에 작용하는 다양한 상위조절자 중 지방세포형성 유도조절자인 Krox20과 KLF15 그리고 지방세포형성 억제조절자인 KLF2와 CHOP 등의 유전자 발현이 변화되면서 일어나는 복합적인 반응의 결과임을 제시한다.

• 생명과학회지
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• 제19권12호
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• pp.1802-1807
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• 2009

Platycodi radix의 주요 성분으로 항염증, 항고지혈 및 항종양 등 다양한 약리적 기능을 가지는 platycodin D는 최근 비만 및 지방세포형성(adipogenesis)을 억제하는 효과를 가진다고 보고되고 있다. 본 연구에서는 adipogenesis의 상위단계에 위치한 다양한 pro-adipogenic regulators와 anti-adipogenic regulators의 발현이 platycodin D에 의해 어떻게 변화되는지 분석하였다. Real-time PCR을 이용한 mRNA 발현의 정량적 분석에서 adipogenesis의 marker라 불리는 ADIPOQ와 GLUT4의 mRNA 발현은 platycodin D의 처리에 의해 유의적으로 감소되었다. 또한 terminal marker의 발현을 조절하는 PPAR$\gamma$와 C/EPB$\alpha$의 mRNA 발현 역시 platycodin D에 의해 유의하게 억제되었다. Platycodin D의 지방세포 억제 효과에 대한 상세한 분자적 메커니즘을 규명하기 위해, PPAR$\gamma$와 C/EPB$\alpha$의 상위 조절자들의 mRNA 발현 변화를 분석하였다. Pro-adipogenic regulators에 대한 platycodin D의 효과를 분석한 결과, C/EBP$\beta$와 C/EPB$\delta$의 mRNA 발현은 platycodin D에 의해 변화가 없었던 반면, KROX20과 KLF15의 mRNA 발현은 각각 초기 분화(2일)와 후기 분화(4일)에서 platycodin D에 의해 유의한 감소를 보였다. 또한, 대표적인 anti-adipogenic regulators인 CHOP의 mRNA 발현은 초기분화에서 platycodin D에 의해 유의하게 증가한 반면, 또 다른 anti-adipogenic regulators인 C/EBP$\gamma$의 mRNA 발현은 platycodin D에 의해 영향을 받지 않았다. 따라서 adipogenesis 과정에서 platycodin D는 pro-adipogenic regulators인 KROX20, KLF15와 anti-adipogenic regulator인 CHOP의 mRNA 발현에 영향을 주어 PPAR$\gamma$와 C/EPB$\alpha$를 조절하는 것으로 보여진다. 결론적으로, platycodin D에 의한 adipogenesis 억제 효과는 KROX20, KLF15 등의pro-adipogenic regulator와 CHOP 등의 anti-adipogenic regulator의 상호작용을 통해 나타나는 결과라 사료된다.

• Molecules and Cells
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• 제38권10호
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• pp.886-894
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• 2015

Macrophages are divided into two subpopulations: classically activated macrophages (M1) and alternatively activated macrophages (M2). BCG (Bacilli Calmette-$Gu{\acute{e}}rin$) activates disabled $na{\ddot{i}}ve$ macrophages to M1 macrophages, which act as inflammatory, microbicidal and tumoricidal cells through cell-cell contact and/or the release of soluble factors. Various transcription factors and signaling pathways are involved in the regulation of macrophage activation and polarization. We discovered that BCG-activated macrophages (BAM) expressed a new molecule, and we named it Novel Macrophage Activated Associated Protein 1 (NMAAP1). 1 The current study found that the overexpression of NMAAP1 in macrophages results in M1 polarization with increased expression levels of M1 genes, such as inducible nitric oxide synthase (iNOS), tumor necrosis factor alpha (TNF-${\alpha}$), Interleukin 6 (IL-6), Interleukin 12 (IL-12), Monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1) and Interleukin-1 beta (IL-$1{\beta}$), and decreased expression of some M2 genes, such as Kruppel-like factor 4 (KLF4) and suppressor of cytokine signaling 1 (SOCS1), but not other M2 genes, including arginase-1 (Arg-1), Interleukin (IL-10), transforming growth factor beta (TGF-${\beta}$) and found in inflammatory zone 1 (Fizz1). Moreover, NMAAP1 overexpression in the RAW264.7 cell line increased cytotoxicity against MCA207 tumor cells, which depends on increased inflammatory cytokines rather than cell-cell contact. NMAAP1 also substantially enhanced the phagocytic ability of macrophages, which implies that NMAAP1 promoted macrophage adhesive and clearance activities. Our results indicate that NMAAP1 is an essential molecule that modulates macrophages phenotype and plays an important role in macrophage tumoricidal functions.