• KSBB Journal
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• 제9권4호
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• pp.385-394
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• 1994

항진균물질 KRF -001의 분리정제 공정에 있어서 XAD-7 크로마토그래피, 산침전법, microfiltration 을 사용하여 crude KRF-001을 분리정재하였을 때, microfiltration 방법 이 기존의 다른 두 방법보다도 회수율이 2-3배 뒤어난 것으로 판명되었으며, 실리 카겔 크로마토그래피, $C_{18}$ 크로마토그래피법을 이용 하여 분리정제방법을 간소화할 수 있였다 또한 Bonda PAK $C_{18}$ column과 Delta PAK $C_{18}$ col­ umn을 prep HPLC에 사용한 결과, 순도 90% KRF-OOI의 대량분리 정제가 가능하여 산엽화시 이를 이용할 수 있는 기초를 확립하였다.

• KSBB Journal
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• 제9권4호
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• pp.378-384
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• 1994

KRF-OOI의 대량생산에 관한 연구를 수행하여 산 업화연구에 연결할 수 있는 자외선을 이용한 변이주 개발을 통해 모균주보다 약 2배 이상의 생산능이 높 은 lN4균주를 개발하였으며, 또한 10배까지 scale up한 발효를 통해 안정된 돌연변이주염을 확인할 수 있었다. HPLC를 이용한 KRF -001의 정성정량분석 방법을 개발함으로써 발효 중 harvest 시기를 정확 히 결정할 수 있였으며 대량발효에 따른 대량 분리 정제 방법의 전략을 수립할 수 있었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제19권6호
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• pp.614-618
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• 1991

토양세균 B.subtilis subsp. krictiensis로부터 항진균활성물질 KRF-001 복합체를 생산하기 위한 발효 조건을 조사하였다. Whey와 mannitol 등이 탄소원으로, CSL, corn gluten meal 그리고 polypeptone이 복합질소원으로 좋았다. 중온균인 생산균은 중성 pH조건에서 P.oryzae에 대한 bioactivity가 가장 높았으며, 0-10 DO의 낮은 용존산소 조건에서도 bioactivity가 유지되었다. 인산염의 농도가$ K_2HPO_4$, 0.047에서 0.097로 높아짐에 따라 1/2의 bioactivity 감소가 관찰되었다. 한편 UV 및 MNNG에 의한 돌연변이에 의해 우수균주 3개를 선별하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제19권4호
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• pp.337-342
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• 1991

전국 162개 지역에서 수집한 토양에서 분리한 5,000여종의 토양 미생물 탐색을 통해서 항진균 활성이 우수한 한개의 생산균주를 선별하고 형태학적 배양학적, 생리학적인 균주 특성을 조사하고 Bacillus subtilis로 동정하였다. 이 균주가 생산하는 항진균물질은 벼도열병균, 회색곰팡이병균, 무좀균, 캔디다균 등에 효과가 있었으며 벼의 도열병에 대한 포장에서의 활성은 tricyclazole 보다는 낮지만 kasugamycin과 대등한 방제효과를 나타내었다. 한편 국소 시험에서는 자극성이 없는 것으로 나타났으며, 급성경구 독성은 5,000mg/kg 군에서 1마리가 사망하여 $LD_{50}$ 값은 5,000mg/kg 이상으로 추정되어 KRF-001은 저독성내지 무독성 항진균물질로 유추된다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제19권6호
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• pp.598-603
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• 1991

신규 미생물 Bacillus subtilis subsp. krictiensis의 배양액으로부터 식물 및 인체 병원균에 폭넓은 항진균 활성을 나타내는 DRF-001으로 총칭되는 6개의 cyclic peptide의 복합체(A에서 F)를 분리하였다. 이 6개 peptides의 분자량은 FAB-MS 측정결과, A가 1042, B와 C가 1056, D와 E가 1070 그리고 F가 1084였다. 이 복합체의 구조를 각종 자기분석을 통해 해석한 결과, 구조 중에 1몰씩의 glutamine, proline, tyrosine, serine 및 unusal $\beta$-amino acid와 3몰의 asparagine을 공통적으로 갖고 있으나, $\beta$-amino acid의 탄소수와 말단 methyl 구조에 차이점이 있음을 알 수있었다. 구성 amino acid들의 서열과 입체구조 결정에 의하여 KRF-001의 잠정구조를 결정하였다.

• 대한수의학회지
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• 제48권1호
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• pp.53-60
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• 2008

We have investigated efficiency of a recombinant subunit Pasteurella multocida toxin (PMT) that was mixed with a vaccine consisted of inactivated whole cells of Bordetella bronchiseptica, P. multocida (types A and D). For verification of the efficacy of the vaccine, all experimental pigs (suckling piglets, sow and gilts) in the three farms were vaccinated. Antibody titers against B. bronchiseptica and P. multocida type A of the vaccinated pigs by microplate agglutination were significantly higher than those of the control pigs (p < 0.05). Similar patterns were observed in the analysis of anti- PMT neutralizing antibody by serum neutralizing method using Vero cell (p < 0.05). Anti- P. multocida type D antibody titer of the vaccinated sows and gilts by ELISA showed significant differences with those of the non-vaccinated pigs (p < 0.05). Although antibody titers increased, it was unable to find out the difference in the clinical signs between the vaccinated and non-vaccinated pigs. However, the increase in body weight of the vaccinated piglets was observed in comparison with the non-vaccinated piglets on a farm. At slaughtering of the pigs, pathological lesions in the turbinate bones of the vaccinated pigs were significantly lower than those of the non-vaccinated pigs (p < 0.001). These results suggested that efficacy of the vaccine in pigs demonstrated to protect against atrophic rhinitis in Korea.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제18권6호
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• pp.1179-1185
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• 2008

The immune-stimulating activities of Bordetella bronchiseptica antigens containing dermonecrotoxin (BBD) loaded in chitosan microspheres (CMs) have already been reported in vitro and in vivo with a mouse alveolar macrophage cell line (RAW264.7) and mice. Therefore, this study attempted to demonstrate the successful induction of mucosal immune responses after the intranasal administration of BBD loaded in CMs (BBD-CMs) in colostrum-deprived pigs. The BBD was introduced to the CMs using an ionic gelation process involving tripolyphosphate (TPP). Colostrum-deprived pigs were then directly immunized through intranasal administration of the BBD-CMs. A challenge with a field isolate of B. bronchiseptica was performed ten days following the final immunization. The BBD-specific IgG and IgA titers, evident in the nasal wash and serum from the vaccinated pigs, increased with time (p<0.05). Following the challenge, the clinical signs of infection were about 6-fold lower in the vaccinated pigs compared with the nonvaccinated pigs. The grades for gross morphological changes in the turbinate bones from the vaccinated pigs were also significantly lower than the grades recorded for the nonvaccinated pigs (p<0.001). Therefore, the mucosal and systemic immune responses induced in the current study would seem to indicate that the intranasal administration of BBD-CMs may be an effective vaccine against atrophic rhinitis in pigs.