Adenoviral vectors are among the most promising vectors available for human gene therapy. However, the use of recombinant adenoviral vectors, including replicationcompetent adenovirus (RCA), raises a variety of safety concerns in relation to the development of new therapies based on gene therapy. To examine how organic compounds change in rat plasma following the injection of adenovirus, $\beta$-galactosidase expressing recombinant adenovirus (designated rAdLacZ) or RCA, we investigated the content of fatty acids (FAs), which are important biochemical indicators in pathological conditions. Pattern recognition analysis on the level of FAs in rat plasma is described for the visual discrimination of adenovirus infection groups from normal controls. Plasma FAs from four control rats (normal group), and from four rats with rAdLacZ infection and six rats with RCA infection (the two abnormal groups), were examined by gas chromatography-mass spectrometry in selected ion monitoring modes as their tert-butyldimethylsilyl derivatives. In total, 20 FAs were positively detected and quantified. The results of the Student's t-test on the normal mean of two abnormal groups, the levels of three FAs (p<0.05) from rAdLacZ group and eleven FAs (p<0.05) from RCA group were significantly different. When star symbol plotting was applied to the group mean values of 20 FAs after normalization to the corresponding normal mean values, the resulting eicosagonal star patterns of the two infected groups were distorted into similar shapes, but were distinguishable from each other. Thus, these approaches will be useful for screening and monitoring of diagnostic markers for the effects of infection following the use of adenoviral vectors in gene therapy.
Two air vents situated on a heat transport pipe in district heating system were exposed to the same environment for 10 years. However, one air vent was more corroded than the other. It also had a hole on the top of the front-end pipe. Comparative analysis was performed for these air vents to identify the cause of corrosion and establish countermeasures. Through experimental observation of the damaged part and analyses of powders sampled from air vents, it was found that corrosion was initiated at the top of the front-end pipe. It then spread to the bottom. Energy dispersive X-ray spectroscopy results showed that potassium and chlorine were measured from the corroded product in the damaged air vent derived from rainwater and insulation, respectively. The temperature of the damaged air vent was maintained at 75 ~ 120 ℃ by heating water. Rainwater-soaked insulation around the front-end pipe had been hydrolyzed. Therefore, the damaged air vent was exposed to an environment in which corrosion under insulation could be facilitated. In addition, ion chromatography and inductively coupled plasma measurements indicated that the matrix of the damaged front-end pipe contained a higher manganese content which might have promoted corrosion under insulation.
녹차중(綠茶中)의 L-ascorbic acid를 정량(定量)함에 있어서 흔히 사용되고 있는 DNP법(法)을 적용할 때 불순물(不純物)에 의한 방해(妨害)여부와 그의 제거방법(除去方法)에 대하여 검토(檢討)한 결과(結果)는 다음과 같다. 즉, DNP법(法)으로 AsA를 측정시 ethyl glyoxal, diacetyl, caffeine둥 불순물질 및 아미노산(酸)들이 방해하였으며, 이들 물질을 제거하는 수단으로 브롬산화(酸化)후 o-phenylenediamine을 반응시킨 다음 chloroform으로 추출제거(抽出除去)하고 Amberlite $IR-120(H^{+})$로 아미노산(酸)을 제거(除去)한 후에 DNP법(法)으로 비색정양(比色定量)하면 L-ascorbic acid 함량(含量)을 정확히 측정(測定)할 수 있었다. 또한 분석소요시간(分析所要時間)이 TLC법(法)에 비해서 현저히 단축되고 재현성(再現性)도 좋아서 녹차중(綠茶中)의 ascorbic acid 정량(定量)에는 본법(本法)이 적합함을 확인하였다.
선행연구에서 카스파제-3 효소가 DEVD 기질을 완전히 절단하는 반면 IETD 기질은 DEVD의 약 50%정도만을 부분적으로 분해한다는 사실을 보고하였다. 본 연구에서는 정제된 폴리-단백질이 카스파제-3 단백질 분해효소의 기질에 따른 차별적인 분해활성에 의해 프로세싱 되는 양상을 분석하였다. 모델 단백질로서 GST, MBP, RFP 세 종류의 단백질을 DEVD 및 IETD 펩타이드로 연결시킨 폴리-단백질을 제작하였으며, 폴리-단백질은C-말단에 6개의 히스티딘 태그가 결합되도록 클로닝 되었다. IMAC 크로마토그래피를 이용하여 분리 및 정제된 재조합 단백질은 SDS-PAGE 분석을 통해 분자량이 약 93 kDa으로 나타났으며, 카스파제-3 효소의 처리에 의해 각각 MBP:RFP, MBP 그리고 GST 3종류의 단백질 절편으로 절단 및 분리되었다. 이 연구를 통해 단백질 분해효소와 기질 간의 반응성의 차이를 이용하여 폴리-단백질을 정량적으로 프로세싱 할 수 있다는 예를 보여주었다.
PIeurotus ostrealus의 배양액에서 syringic acid에 의해 유도되는 peroxidase의 활성이 추정되었다. 본 효소는 DEAE Sephadex A-50 이온교환크로마토그래피와 Sephadex G-150 첼 여과크로마토 그래피를 통하여 순수분리 되었다. 순수분리된 효소는 당함량이 35.7%인 당단백젤이었으며. SDS-linear polyacrylamide gradient gel 전기영동과 젤여과크로마토그래피에 의해 분자량(Mr) 72.400인 2개의 동일한 소단위체로 이루어진 이합체로 판명되었다. 본 효소는 흡광 스펙프럼의 분석결과, iron protoporphyrin IX의 구조를 갖는 2개의 heme을 조효소로 가지고 였는 것으로 추정되였다. 본 효소의 등전점은 4.26 이었고 $H_2O_2$에 대한 $K_m$값은 $7.2{\mu}M$이었다. 본 효소의 반응 최적온도는 $40^{\circ}C$, 최적 pH는 3.5에서 4.0 사이였다. Ferulic acid와 sinapic acid에 대한 본 효소의 친화도(Km)는 horseradish peroxidase에 비해 각각 2.4. 12.3배 더 높은 것으호 계산되었다.
Odaba, Mehmet;Garipacan, Bora;Dede, Semir;Denizli, Adil
Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
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제6권6호
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pp.402-409
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2001
Different bioligands carrying synthetic adsorbents have been reported in the literature for protein separation, We have developed a novel and new approach to obtain high protein ad-sorption capacity utilizing 2-methacrylamidohistidine(MAH) as a bioligand. MAH was synthe-sized by reacting methacrylocholride and histidine, Spherical beads with an average size of 150-200㎛ were obtained by the radical suspension polymerization of MAH and 2-hydrosyethyl-methacrylate(HEMA) conducted in an aqueous dispersion medium. p(HEMA-co-MAH) beads had a specific surface area of 17.6㎡/g . Synthesized MAH monomer was characterized by NMR. p(HEMA-co-MAH) beads were characterized by swelling test, FTIR and elemental analysis. Then Cu(II) ions were incorporated onto the beads and Cu(II) loading was found to be 0.96 mmol/g.These affinity beads with a swelling ration of 65% and containing, 1.6 mmol MAH/g were used in the adsorption/desorption of human serum albumin(HSA) from both aqueous solutions and hu-man serum. The adsorption of HSA onto p(HEM-co-MAH) was low(8.8 mg/g). Cu(II) chelation onto the beads significantly increased the HSA adsorption (56.3 mg/g). The maximum HSA ad-sorption ws observed at pH 8.0 Higher HSA adsorption was observed from human plasma(94.6 mgHSA/g) Adsorption of other serum proteins were obtained as 3.7 mg/g for fibrinogen and 8.5mg/g for γ-globulin. The total protein adsorption was determined as 107.1mg/g. Desorption of HSA was obtained using 0.1 M Tris/HCl buffer containing 0.5 M NaSCN, High desorption rations(up to 98% of the adsorbed HSA) were observed. It was possible to reuse Cu(II) chelated-p(HEMA-co-MAH) beads without significant decreases in the adsorption capacities.
Rhizopus oryzae CJ-2114의 polygalacturonase 생성을 위한 최적조건은 수분이 60% 함유된 밀기울 배지에 1% albumin, 0.2% (NH$_4$)$_2$C$_2$O$_4$, 1% sorbitol을 첨가하여 96시간 배양시 최대활성을 나타내었으며, Sep-hadex G-75 및 G-150을 사용한 gel filtration과 DEAE-cellulose에 의한 이온교환 크로마토그라피를 통하여 이 효소를 11.13배 정제할 수 있었고, 수율은 40.3% 였다. 정제효소는 polyacrylamide gel 전기 영동에 의하여 단일밴드로 확인되었으며 분자량은 SDS-polyacryl-amide 전기영동에 의하여 47,000정도로 측정되었다. 효소의 결정구조는 표면이 거친 기둥모양을 형성하고 있었으며 아미노산 조상은 17종류로써 glutamic acid 함량이 198.74mg/g enzyme로 가장 많았다.
저염상태에서 속성 발효를 통한 멸치 어간장의 대량 생산을 위하여 시중 어간장에서 단백질 분해효소 생산이 우수한 균주를 분리 동정하여, B. amyloliquefaciens HTP-8로 명명하였다. 효소생산을 위한 배양 최적온도, 초기 pH, 그리고 배양시간은 각각 $30^{\circ}C$, pH 7.0과 3일이었다. Jar fermenter 배양시 pH를 7.0으로. 조절한 경우가 조절하지 않은 경우에 비해 효소활성이 최대에 이르는 시간이 단축되었다. 효소의 부분정제는 조효소액을 80% ammonium sulfate에 의한 염석과 CM-Sephadex C-50을 이용하여 정제한 결과, 수율이 0.4%, 정제배수가 43.0배였다. 정제효소의 최적 pH와 온도는 pH 10.0과 $50^{\circ}C$였으며, pH 7.0~l2.0의 pH 범위와 $40^{\circ}$ 이하에서 안정하였다. 금속이온 중 $Ag^{+}$ /, $Ba^{2+}$ /에 의하여 효소활성이 저해되었다. 한편, 본 효소는 PMSF에 의하여 선택적으로 활성이 억제됨으로써 활성부위에 serine을 가진 serine protease에 속하는 것으로 판단되었다.
In this study, the chemical compositions of $PM_{2.5}$ samples collected at the Redwood National Park IMPROVE site in California from March 1988 to May 2004 were analyzed to provide source identification and apportionment. A total of 1,640 samples were collected and 33 chemical species were analyzed by particle induced X-ray emission, proton elastic scattering analysis, photon induced X-ray fluorescence, ion chromatography, and thermal optical reflectance methods. Positive matrix factorization (PMF) was used to develop source profiles and to estimate their mass contributions. The PMF modeling identified five sources and the average mass was apportioned to motor vehicle (35.8%, $1.58\;{\mu}g/m^3$), aged sea salt (23.2%, $1.02\;{\mu}g/m^3$), fresh sea salt (21.4%, $0.94\;{\mu}g/m^3$), wood/field burning (16.1%, $0.71\;{\mu}g/m^3$), and airborne soil (3.5%, $0.15\;{\mu}g/m^3$), respectively. To analyze local source impacts from various wind directions, the CPF and NPR analyses were performed using source contribution results with the wind direction values measured at the site. These results suggested that sources of $PM_{2.5}$ are also sources of visibility degradation and then source apportionment studies derived for $PM_{2.5}$ are also used for understanding visibility problem.
본 연구에서는 미지 대사물질 동정을 위해 GC-TOF/MS의 양이온 화학적 이온화 방법(positive chemical ionization, $CI^+$)을 이용, 정확한 질량 값(accurate mass)과 동위원소 비(isotope ratio) 측정을 위한최적 조건을 확립하였다. 분자이온 $[M+H]^+$ 세기를 증가시킬 수 있는 high mass tune 방법이 사용되었으며, 화합물들의 분리 및 감도에 따른 검출조건이 고려되어 졌다. 24종의 trimethylsilyl (TMS)기로 유도체화 된 표준 대사물질들을 분석한 결과 $[M+H]^+$의 경우 이론 값 과의 절대평균오차는 6.8 ppm이였으며, 동위원소 비(M+1/M, M+2/M)의 경우는 각각 1.5%와 1.7%였다. 얻어진 질량 값과 동위원소 비를 원소조성 알고리즘에 적용한 결과 21개의 화합물의 구조식이 2순위 내에서 일치하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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