• 제목/요약/키워드: Ion-Exchange Chromatography

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담배나방 (Helicoverpa assulta)의 발생중 Major Haemolymph Protein(MHP)의 변화 및 특성 (Ontogeny and Characterization of Major Haemolymph Protein(MHP) in Helicoverpa assulta)

  • 유종명;조시형;이형철
    • 한국동물학회지
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    • 제39권3호
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    • pp.307-316
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    • 1996
  • 담배나방 (Helicoverpa assulta)의 발생기간 중 존재하는 major haemolyruph protein (MHP)을 확인하였으며, 그 발생에 따른 변화상 및 물리화학적 특성을 조사하였다. MHP는 유충-용-성충의 발생단계에서 확인되었으며, 그 함량은 유충의 성장에 따라 증가하여 용기와 성충기 동안에도 높게 유지되고 용초기와 성충 초기에서 일시적인 감소를 보여, 총 혈림프 단백질의 농도 변화와 유사한 변화양상을 보였다. ammonium sulfate precipitation, gel filtration 그리고 ion exchange chromatography를 통해 정제한 MHP의 전기영동 분석 결과, 단일 구성소 단위 (69 kDa)가 hexamer를 이룬 분자량 414kDa의 glycolipoprotein (pI 5.9)인 것으로 확인되었다. MHP의 아미노산 조성에 있어서 18.27 mole % 의 tryptophan, 7.47 mole % 의 tyrosine and 6.51 mole % 의 phenylalanine이 검출되어 다른 곤충류의 저단백질들에 비해 비교적 높은 aromatic amino acid의함량을 보였다. 지방체, 장, 말피기관 단백질의 전기영동 및 이들 단백질과 anti-MHP간의 immunodiffusion test 결과 MHP는 지방체에 존재하고 있음이 확인되었다.

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Pseudomonas sp. KP-364가 생산하는 Keratinolytic Pretense의 정제 및 성질 (Purification and some Properties of Keratinolytic Protease Produced by Pseudomonas sp. KP-364.)

  • 전동호;강상모;권태종
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제31권3호
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    • pp.224-229
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    • 2003
  • 경기도 일대의 가금류 공장부근 토양로부터 keratinolytic protease 생산성이 우수한 균주 KP-364를 선별하여 본 효소를 정제하고 일반적인 특성을 조사하였다. 본 효소는 ulkafiltration, ammonium sulfate fiactionation, DEAE-cellulose ion-exchange chromatography, Sephadex G-150 gel filtration 등을 통하여 정제되었으며 회수율은 25.2%이었다 SDS-PAGE와 gel filtration으로. 단일성과 분자량을 추정한 결과 전기영동 상에 단일 band를 나타내었으며 분자량은 약 36,000 dalton이였으며 1개의 subunit로_구성되어 있었다. 효소반응의 최적조건을 검토한 결과 최적 pH는 6.5, pH 3.0에서 10.0까지 90%이상의 활성을 나타냈으며 반응 최적 온도는 $37^{\circ}C$이였고 $60^{\circ}C$에서 1시간동안 80%이상의 활성을 유지하였다. 정제된 효소의 활성은$ FeSo_4$, KCI, $Li_2$$SO_4$를 첨가하였을 때 증가하였으며 $Ag_2$$SO_4$, $CuCl_2$, $HgCl_2$에 의해 저해되었다. 또한 EDTA, EGTA에 의해 저해되는 것으로 보아 metalloprotease의 일종이라고 판단되며 $Li^{ +}$를 cofactor로 함유하고 있는 것으로 조사되었다.

Penicillium sp. CB-20이 생성하는 Polygalacturonase의 생산 및 정제 (Production and Purification of Polygalacturonase from Penicillium sp. CB-20)

  • 조영제;임성일;이우제;최청
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제17권5호
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    • pp.440-446
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    • 1989
  • Penicillium sp. CB-20의 polygalacturonase 생성을 위한 최적조건은 탄소원으로 펙틴을 사용하여 16 시간 배양시 최대 활성을 나타내었으며, Sephadex G-25, G-75 및 G-150을 사용한 gel filtration과 DEAE-cellulose, DEAE-Sephadex A-50에 의 한 ion exchange chromatography를 통하여 이 효소를 약 30배 가량 정제할 수 있었고, 수율은 2.31%였다. 정제효소는 polyacrylamide gel electrophoresis에 의하여 단일 밴드로 확인 되었으며, 분자량은 SDS PAGE에 의하여 21,000 정도로 측정되었다. 효소의 결정구조는 마름모꼴을 형성하고 있었으며 아미노산 조성은 17종류로써 glutamic acid, glycine, hlstidine의 함량이 비교적 많았다.

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Two-Dimensional Electrophoresis를 이용한 한우 난소의 황체단백질 특성 분석

  • 우제현;정학재;김봉기;최재혁;박민영;양병철;박수봉;성환후;권무식
    • 한국동물번식학회:학술대회논문집
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    • 한국동물번식학회 2003년도 학술발표대회 발표논문초록집
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    • pp.85-85
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    • 2003
  • 한우 난소의 황체는 다양한 세포들로 구성되어 있으며 난소의 생식기능유지와 임신유지에 중요한 인자가 복잡하게 관련되어 있으며 이들 황체에서 분비하는 단백질은 황체기능에 필수적으로 중요한 작용을 한다. 본 연구는 난소의 황체일령에 따른 단백질 분비 패턴을 조사함으로써 황체세포의 기능과 임신 유지에 관련되는 인자들을 조사하기 위하여 수행하였다. 한우에서 채취한 난소에서 황체를 분리, 황체시기별(전기, 중기, 말기)로 구분하여 cytosol을 분리 정제하였다. 황체시기별로 분리된 황체 단백질의 성분을 분석하기 위해 ion-exchange chromatography를 이용하여 단백질 패턴을 조사, 추출된 fraction을 단백질 정량후 SDS-PAGE를 실시하였다. 그 결과 중기에서의 단백질의 농도가 가장 높았으며, 특히 단백질 패턴 또한 다른 양상을 보였다. 시기별로 구분한 각각의 fraction을 SDS-PAGE로 조사했을 때 중기와 말기황체 cytosol의 fraction 3번과 4번에서 다른 양상을 보였으며 SDS-PAGE에서 120kb, 95kb, 34kb, 25kb 등의 단백질 밴드를 확인할 수 있었다. 초, 중기황체에서만 특이하게 검출되는 단백질 band를 확인할 수 있었으며 이 들 단백질을 구체적으로 확인하기 위하여 Two-Dimensional electrophoresis를 이용하여 실험을 수행하였다. 시기별로 분리된 황체를 일반적인 IEF단백질 분리법으로 cytosol을 회수한 후 IPG-system을 이용하여 1차원 전기영동을 한 후, SDS-PAGE로 이차원 전기영동을 실시하였다. 이차원 전기영동 결과, SDS-PAGE의 결과와 비슷한 위치에 부분적으로 다른 spot의 양상을 보였다. 특히 기능황체에서의 특이적 발현 spot을 확인할 수 있었다. 이러한 결과들로부터 황체의 progesterone분비기능의 역할을 수행하기 위한 단백질들이 전, 중기에 발현된다는 것을 알 수 있고 퇴행황체에서는 발현이 안되고 있는 것을 알 수 있다. 이러한 결과를 토대로 다른 양상을 띤 spot을 분리하여 어떤 단백질인지를 분석하여 각각의 황체단백질의 특성을 규명할 수 있을 것으로 사료된다.

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Polychlorinated Biphenyl에 의한 백서간 Cytochrome P-$450_{LMII}$에 대한 Monoclonal Antibody 생성에 관한 연구 (Production of Monoclonal Antibody to Polychlorinated Biphenyl Induced Cytochrome P-450 LMII in Rat Liver)

  • 김정희;김재룡;이기영
    • Journal of Yeungnam Medical Science
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    • 제3권1호
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    • pp.103-110
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    • 1986
  • Polychlorinated biphenyl(PCB)에 유도된 rat liver cytochrome $P_{450LMII}$을 Balb/c mouse에 주사하여 면역된 spleen cells과 $SP_2$ myeloma cell을 polyethylene glycol(PEG 3500)으로 세포융합 시켜 얻은 fused cell을 계속 배양하여 cloning을 반복하고 ELISA로 확인하여 monoclonal antibody(Mab)를 생산하는 hybrid cell을 얻었으며 mouse 복강내에 hybrid cell(${\times}10^7$)을 주사하여 ascites를 모아 cellulose ion exchange chromatography로 Mab을 정제하였으며 $I^{125}$로 label 시킨 Mab는 $CP_{450LMII}$ 항원과 hybridization시켜 binding을 관찰하였으며 SDS-polyacrylamide 전기영동에서 분자량 55,000 및 110,000인 두 개의 band를 관찰하였다.

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파의 Acid Phosphatase의 특성 (Characterization of Acid Phosphatase from Welsh Onion)

  • 김기남;김석지;김석환;박인식
    • 한국식품과학회지
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    • 제28권4호
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    • pp.663-667
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    • 1996
  • 파로부터 acid phosphatase를 Sephacryl S-200 gel filtration과 CM-Sepharose CL-6B ion exchange chromatography를 이용하여 부분정제하였다. p-nitrophenyl phosphate를 기질로 사용했을 경우에 최적pH는 5.5, 최적온도는 $60^{\circ}C$였다. 효소의 활성화 에너지는 4.86kcal/mole이었다. 효소는 pH 6.0에서 가장 안정하였으며, $50^{\circ}C$ 이하에서 대체로 안정하였다. 효소는 p-nitrophenyl phosphate를 기질로 가장 잘 이용하였으며, 5'-IMP와 5'-GMP는 기질로 거의 이용하지 못하였다. 효소는 p-nitrophenyl phosphate를 기질로 했을 경우에 $K_{m.app.}$값이 0.87mM이었다 $Cr^{+++},\;Zn^{++},\;Cu^{++}$이온은 효소의 활성을 저해하였으며, 또한 molybdate와 metavanadate 이온이 효소의 활성을 저해하였다. 그리고, NaCl의 농도가 높을수록 효소의 활성을 저해하였다.

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다랑어(Thunnus) 추출물 중의 Histidine 함유 저분자 펩타이드 및 산화촉진물질 함량에 미치는 추출방법의 영향 (Effects of Extraction Methods on Histidine-containing Low-molecular Weight Peptides and Pro-oxidants Contents in Tuna Thunnus Extracts)

  • 김홍길;송호수
    • 한국수산과학회지
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    • 제50권6호
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    • pp.684-693
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    • 2017
  • We investigated methods for extracting histidine-containing low-molecular-weight (LMW) peptides such as anserine, carnosine and histidine from the edible meat of tuna byproducts. Extracts were treated by several methods including heat treatment ($80^{\circ}C$, 10 min), DOWEX ion exchange (IEC), ultrafiltration (UF), and carboxymethyl (CM)-cellulose column chromatography (IEC+CMC); then the levels of protein, total iron, histidine, carnosine, and anserine were measured. Extracts treated with IEC+CMC using CM-cellulose were analyzed for total iron, protein, histidine, and anserine content, which were $6.27{\pm}0.26mg/mL$, $5.20{\pm}0.21{\mu}g/mL$, 0.80 mg/mL, 0.208 mg/mL, and 4.40 mg/mL, respectively, in yellowfin tuna; and $9.05{\pm}0.82mg/mL$, $4.06{\pm}0.20{\mu}g/mL$, 1.62 mg/mL, 0.012 mg/mL, and 7.28 mg/mL in bigeye tuna. By comparison in IEC-UF treated extracts, protein, total iron, and histidine content decreased by 43%, 73%, and 27% in yellowfin and 0.4%, 54%, and 23% in bigeye tuna, wheres carnosine and anserine content increased by 22% and 17%, respectively. Freeze-dried (FD) extracts exhibited similar trends as non-dried extracts, i.e., dipeptide content increased with purification steps, whereas pro-oxidant (total iron and protein) content decreased. IEC+CMC treated FD extracts had the highest anserine, content, and the greatest reductuion in pro-oxidants.

우유로부터 Osteopontin의 분리.정제 및 특성에 관한 연구 (Purification and Properties of Osteopontin from Bovine Milk)

  • 최기원;김동운;이수원
    • Journal of Animal Science and Technology
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    • 제45권3호
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    • pp.491-498
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    • 2003
  • 본 연구는 우유로부터 OPN을 분리 정제하여 그 특성을 규명하기 위해서 수행되었다. 먼저 ion-exchange와 hydrophobic chromatography를 이용하여 우유로부터 OPN을 분리 정제하였다. OPN의 분자량은 SDS-전기영동 상에서 약 60,000dalton이었고, NH2-terminal amino acid sequence를 확인한 결과 Leu-Pro-Val-Lys-Pro- Thr-Ser 순이었다. OPN을 35주령된 SCWL를 이용하여 산란계를 면역 시키고, 형성된 anti- OPN IgY 항체를 분리․정제한 후 ELISA test로 항체가를 측정하였다. 또한 RID test을 이용하여 OPN 함량에 따른 정량곡선을 작성하고, 이 곡선에 의해 우유 중 OPN 함량을 정량하였다. 그 결과 원유, 탈지유, 시유에서 각각39.78, 31.74, 37.48${\mu}g$/$m\ell$을 함유하고 있는 것으로 나타났다. 또한 OPN의 Ca 가용화 능력을 검정한 결과 OPN이 CPP와 poly-glutamic acid 보다 더 우수한 것으로 나타났다.

Cellulolytic Enzymes from Acrophialophora nainiana

  • Punnapayak, Hunsa
    • 한국미생물생명공학회:학술대회논문집
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    • 한국미생물생명공학회 2005년도 2005 Annual Meeting & International Symposium
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    • pp.245-247
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    • 2005
  • A cellulolytic fungus isolated from Agave plantation in northeastern Thailand was identified as Acrophialophora nainiana. The fungus was capable of growing at pH between 3 - 7 and 25 - 45 $^{\circ}C$, with the optimum conditions at pH 5.0 and 40 $^{\circ}C$. The wild isolate produced cellulases, comprising of exoglucanase (0.019 U/mg protein), endoglucanase (0.366 U/mg protein), and ${\beta}$-glucosidase (0.001 U/mg protein). Mutations with UV and NTG produced the UV 10-2 mutant with cellulases activities including exoglucanase (0.093 U/mg protein), endoglucanase (0.585 U/mg protein), and ${\beta}$-glucosidase (0.013 U/mg protein). Purification of the enzymes with ultrafiltration, ammonium sulfate precipitation, and ion-exchange chromatography yielded the maximal cellulase specific activities of 2.736 U/mg protein (exoglucanase), 0.235 U/mg protein (endoglucanase), and 0.008 U/mg protein (${\beta}$-glucosidase). The mutant's cellulases were the most active at pH 5.0 and 60 $^{\circ}C$. Ion-exchange chromatography revealed that A. nainiana UV 10-2 cellulases were comprised of two peaks with one peak showing the single endoglucanase activity while the other peak showed a mixture of the three enzyme activities. Production of A. nainiana UV 10-2 cellulases using banana leaf stalk as the sole carbon source gave comparable yields to that of the pure ${\alpha}$-cellulose. The enzymes were used in the simultaneous saccharification and fermentation (SSF) of plant residue (Coix aquatica) along with Kluveromyces marxianus to produce ethanol. Moreover, when the enzymes were used in the bioscouring process of fabric, the desiravle traits of textile processing including immediate water absorbency, increased in whiteness and reduction of yellowness of the treated fabric were observed.

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Streptomyces속 균주가 생성하는 Alkaline Protease의 생산 및 정제 (Production and Purification of Alkaline Protease from Streptomyces sp.)

  • 최청;정영건;성삼경;최광수;이재성;조영제;권오진
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제20권2호
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    • pp.169-177
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    • 1992
  • 토양으로부터 alkaline protease 생성능이 강한 Streptomyces griseus HC-1141을 분리하였으며, 효소생산의 최적 배양조건은 0.5 casein, 0.05 ammonium chloride, 0.1 ferrous sulfate, 2.0의 lactose, pH 8.0에서 84시간 배양했을 때이다. 효소의 정제는 ammonium sulfate 침전, DEAE-cellulose ion exchange chromatography, Sephadex G-150 gel filtration, crystallization으로 하여 53.23배 정제할 수 있었으며 polyacrylamide gel 전기영동상 단일밴드를 나타내었다.

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