• 한국식품영양과학회지
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• 제15권3호
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• pp.276-285
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• 1986

능이 [Sarcodon aspratus (Berk.) S. Ito]로부터 단백질가수분해(蛋白質加水分解) 효소(酵素)를 분리 정제하여 그 특성을 조사하였다. 본 효소는 Tri-acryl CM-cellulose, Ultrogel AcA 54, Hydroxy apatite column chromatography와 preparative isoelectric focusing 방법으로 순차 정제되었고, 정제된 효소는 PAGE상에서 단일 band를 나타내었으며 활성(活性)은 62.5O.D/mg.protein으로 조효소(粗酵素)보다 8.01배 증가하였다. 작용최적(作用最適) pH는 10.1로 alkaline protease였으며 작용최적(作用最適) 온도(溫度)는 $57^{\circ}C$부근이었다. $50^{\circ}C$ 이하의 온도(溫度)와 pH $4.0{\sim}10.8$ 범위에서 안정(安定)하였으나, $60^{\circ}C$에서 30분후 26%, $65^{\circ}C$에서는 65%가 실활(失活)되었다. $Mn^{++}$은 효소의 활성(活性)을 증가시켰으나 $Hg^{++}$와 $Cu^{++}$는 현저히 저해시켰다. SDS-PAGE에 의해 분자량(分子量)은 30,100으로 측정되었고, monomer임이 확인되었다. 등전점(等電点)은 9.80이었다.

• Korean Chemical Engineering Research
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• 제43권2호
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• pp.187-201
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• 2005

최근 전통적인 액체상 공정을 대체하는 기술로서 고체 담체와 단백질 사이의 '생물인식' 기능을 이용하는 새로운 생물공정기술이 개발되고 있다. 통상 고체 담체로는 표면에 특정한 기능기가 노출되어 있는 크로마토그래피용 담체를 사용한다. 단백질의 반응이나 상호작용이 단백질이 담체 표면에 부착되어 있는 상태에서 일어나기 때문에 이 '고체상 기술'은 액체상 기술에 비해 뚜렷한 장점을 갖고 있다. 고체상 재접힘은 변성제에 의해 용해된 내포체 형태의 재조합 단백질을 이온교환수지 표면에 흡착시켜 시작한다. 변성제를 단백질 주위로부터 서서히 제거시키면서 고유의 3차 구조로 재접힘시킨다. 재접힘이 완료되면 염 구배와 같은 전통적인 방법에 의해 재접힘된 단백질을 정제된 상태로 용출시킨다. 이 개념은 '확장층 흡착 재접힘'에도 연장 적용된다. 세포파쇄액에 변성제를 첨가하여 용해한 내포체 단백질은 확장층 흡착 크로마토그래피용 Streamline 담체에 흡착되고 세포찌꺼기와 불순 단백질들은 확장층 사이로 빠져 칼럼 밖으로 제거된다. 흡착된 목적 단백질은 고체상 재접힘 방법에 의해 재접힘 된 후 용출된다. 수년간 연구 발전되어 온이 새로운 재접힘 기술은 정제수율 향상, 공정 단계 감축, 공정 시간 및 부피 감소에 따라 생물의약공정의 경제성을 크게 향상시킬 수 있는 것으로 증명되고 있다. 본 논문에서는 실험실에서 수행한 여러 생물의약용 단백질들을 대상으로 한 연구 실험 자료를 바탕으로 고체상 재접힘 기술의 적용 사례를 서술하였다.

• 자연과학논문집
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• 제5권1호
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• pp.67-75
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• 1992

결정성 aluminosilicate 광물의 일종인 천연 zeolite는 광물학적 특성과 화학적 표면활성으로 인하여 다방면의 공업화학적 이용가치가 매우 높고 광물중 특히 가장 높은 양이온교환능을 가지고 있어 기체분자에 대한 선택적 흡착력이 큰 molecular sieve로써 흡착분리제로는 물론, 건조제, 흡습제, 이온교환체, 촉매, 증량제 그리고 폐수처리제, 경수의 연화제등으로 이용도가 날로 증가하고 있다. 국내산 천연 zeolite를 IN HCL용액과 NaCl용액으로 화학처리하여 다공성을 증가시켜 column충전제로 사용한 결과, 혼합기체 Ar, $N_2$ CO및 $CH_4$의 분리특성에 관해서 HCL용액으로 처리한 mordenite 시료는 활성화온도가 $300^{\circ}C$일 경우, CO와 $CH_4$의 분리는 곤란하나 $350^{\circ}C$에서는 분리가 용이하였고 NaCl용액으로 처리한 시료는 미처리한 것과 거의 유사하였다. Ar과 $N_2$와의 분리에는 산 또는 알칼리로 화학처리한 시료에도 별로 효과가 없었으나 HCL용액과 NaCl용액을 연속적으로 처리한 천연 zeolite는 합성 zeolite의 특성에 견줄만한 정도로 기체분리효과와 HETP값을 보여주었다. 한편 시료의 화학처리에 의한 Ar과 CO의 흡착열의 변화는 극성기체인 CO의 경우, 별로 변화가 없지만 무극성기체인 Ar은 영향을 받기가 용이하였다. 또한 carrier gas He의 유속이 대략 20~30ml min범위일때 최소의 HETP값을 가지며 column의 효능이 좋았다.

• 한국균학회지
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• 제23권4호통권75호
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• pp.332-339
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• 1995

Fomitella fraxinea의 자실체로부터 중성염 용액을 사용하여 다당류 FCW를 추출하였다. FCW를 이온 교환 크로마토그라피하여 FCW-I 과 FCW- II로 분획하였고, 이 두 분획을 겔 여과 크로마토그라피하여 흰색 분말의 FCW-Ia와 갈색 분말의 FCW-IIa를 각각 얻었다. FCW-Ia 와 FCW-IIa 의 균질성을 HPLC 와 GPC로 확인하였고, 그들의 분자량을 각각 15,000 과 8,700 으로 결정하였다. FCW-Ia에는 항암 면역 증강 활성이 없었고, FCW-IIa는 높은 활성을 나타냈다. 두 분획에서 소량의 uronic acid 가 검출되었다. GC에 의한 단당류 분석 결과 FCW-Ia는 fucose, galactose, 그리고 mannose를 갖고 있으며 그 몰비는 19.5 : 63. 2 : 25.0이었다. 단백질은 FCW-Ia에서 검출되지 않았다. 한편 FCW-IIa의 주 단당류는 glucose, galactose 및 mannose 로서 그 비는 1.0 : 0.3 : 0.4이었으며, 단백질을 0.4% 함유하고 있다. 아미노 산 분석 결과 높은 양의 glutamic acid이 검출되었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제29권7호
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• pp.1043-1052
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• 2019

Active lipase-producing bacterium Burkholderia gladioli Bps-1 was rapidly isolated using a modified trypan blue and tetracycline, ampicillin plate. The electro-phoretically pure enzyme was obtained by purification using ethanol precipitation, ion-exchange chromatography, and gel filtration chromatography. The molecular weight was 34.6 kDa and the specific activity was determined to be 443.9 U/mg. The purified lipase showed the highest activity after hydrolysis with $p-NPC_{16}$ at a pH of 8.5 and $50^{\circ}C$, and the $K_m$, $k_{cat}$, and $k_{cat}/K_m$ values were 1.05 mM, $292.95s^{-1}$ and $279s^{-1}mM^{-1}$, respectively. The lipase was highly stable at $7.5{\leq}pH{\leq}10.0$. $K^+$ and $Na^+$ exerted activation effects on the lipase which had favorable tolerance to short-chain alcohols with its residual enzyme activity being 110% after being maintained in 30% ethanol for 1 h. The results demonstrated that the lipase produced by the strain B. gladioli Bps-1 has high enzyme activity and is an alkaline lipase. The lipase has promising chemical properties for a range of applications in the food-processing and detergent industries, and has particularly high potential for use in the manufacture of biodiesel.

• 분석과학
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• 제21권5호
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• pp.412-423
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• 2008

액체크로마토그래피/텐덤질량분석법을 이용하여 말 소변에서 55 가지 염기성 약물을 동시 분석하는 고체상 추출법을 개발하였다. 본 연구에서는 다양한 종류의 약물인 베타-차단제, 베타-길항제, 항저혈압제, 중추신경흥분제, 진정제, 정신 안정제, 항우울제, 항고혈압제 등을 분석하였다. 각 성분의 분리와 정량은 LC-MS/MS의 positive ion electrospray ionization (+ESI)과 multiple reaction monitoring (MRM)으로 수행하였다. 시판되고 있는 4 가지 SPE 상품(UCT XTRACT$^{(R)}$ XRDAH, Supelco DSC-MCAX$^{(R)}$, Varian Bond Elut Certify$^{(R)}$, Waters Oasis$^{(R)}$ MCX)의 혼합형 양이온 교환 흡착제를 비교하였고 최적의 추출 조건을 확립하였다. 그 결과, UCT XTRACT$^{(R)}$ XRDAH의 흡착제에서 분석 대상약물의 상대 회수율이 terbutaline (41.3%), salbutamol (71.5%), heptaminol (70.7%), phenylpropanolamine (66.3%)을 제외하고 80% 이상의 좋은 결과를 나타내었고, 직선성은 0.9804~0.9999를 갖는 55 개의 검정곡선을 얻을 수 있었으며, 검출한계는 0.2~8.3 ng/mL임을 확인하였다.

• Journal of Nutrition and Health
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• 제19권6호
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• pp.363-373
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• 1986

This study was devised to elucidate whether soused shrimp exhibits a digestive action on boiled pork meats. and the mechanism by which sousing with a high concentration of sodium chloride preserves nutrients in foods for a prolonged pe\ulcornerriod. Protease was isolated from soused shrimp using a combination of ammonium sulfate fractionation. DEAE - cellulose ion exchange chromatography and gel filtra\ulcornertion. The isolated protease had specific activity of 1.560 units. 210 purification fo\ulcornerld with an yield of 38%. Its optimum pH and temperature were 8.0 and $43^{\circ}C$ respectively. The molecular weight of the enzyme was 35.000. The Km value of the enzyme for casein was 1.6 x $10^{-6}$ M The e=yme required the presence of cu\ulcornerpric ion to exhibit its full activity. Eighty eight percent of the enzyme activity was in\ulcornerhibited by 3.5M NaCI showing a reversibly linear decrease of the enzyme activity as NaCI concentration increased. The nature of the inhibition by NaCl was rever\ulcornersible and noncompetitive. The protease activity in soused shrimp was well preser\ulcornerved with the elapse of time at least in part due to NaCI induced suppression of autodigestion. The enzyme was denatured by acid easily. i.e. 1% of the original activity remained after staying at pH 2 for 10 minutes. which is within the norm\ulcorneral range of pH of the human stomach. Soused shrimp was observed to be one of those containing the highest protease activity compared with the other soused foo\ulcornerds such as soused oyster. squid. clam. and Pollack intestine with respect to spec\ulcornerific activities of dialized 1:4 whole homogenates(w/v) in 5 mM sodium phospha\ulcornerte - 2.4 mM j3 - mercaptoethanol buffer. pH 8.0. Casein and boiled meats including pork, beef, and chicken appeared to be the good substrates for the protease. Casein was the best. Therefore. the ingestion of boiled meats including pork together with soused sh\ulcornerrimp would help digestion of boiled pork in human not only by increasing appe\ulcornertite also by the direct proteolytic digestion of boiled meats by soused shrimp to\ulcorner some extent. And a high concentration of sodium chloride inhibited the protease activity reversibly in a remarkable degree, which ensued in a significant retardat\ulcornerion of autodigestion of protein in foods by proteases, and hereby contributed to the preservation of foods for an extended period.

• 농업과학연구
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• 제21권2호
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• pp.122-132
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• 1994

본(本) 연구(硏究)는 초유(初乳) 중(中)에 다량(多量) 존재하면서, 국소면역(局所免疫)을 담당하고 있는 것으로 알려진 Secretory immumoglobulin A (SIgA)를 분리(分離)하여 사람에게 급성위장병 및 집단 식중독을 일으키는 장독소형(腸毒素型) Salmonella속(屬) (S. enteritidis, S. typhimurium)의 성장억제효과(成長抑制效果)를 시험하였다. 우유(牛乳) 초유(初乳) 중(中)에서 분리한 SIgA를 각각 $0.1{\sim}5.0mg/m{\ell}$의 수준이 되도록 stock solution을 제조하여 성장억제효과(成長抑制效果)를 비교 검토하였으며, 한편 항균성물질(抗菌性物質로)로 알려진 egg lysozyme을 $0.5mg/m{\ell}$의 수준으로 단독(單獨) 첨가(添加) 및 SIgA와 혼합(混合) 첨가(添加)하면서, 그에 따른 성장억제효과(成長抑制效果)를 검토(檢討)하였다. 1. 우유(牛乳) 초유(初乳) 중(中)에 존재(存在)하는 SIgA는 gel filtration 및 ion exchange chromatography 방법으로 순수하게 분리(分離)할 수 없었으며, 또한 SIgA rich fraction 중(中)에는 dimeric-$IgG_1$이 상당히 혼재(混在)되어 있는 것이 확인되었다. 2. Human SIgA는 $0.5{\sim}1.0mg/m{\ell}$의 농도(濃度)에서 효과적인 성장억제효과(成長抑制效果)를 보였으며, 그 이상의 농도(濃度)에서는 억제효과(抑制效果)의 증가추세가 둔화되었다. Bovine SIgA는 농도가 증가함에 따라 점진적인 성장억제효과(成長抑制效果)를 보였으며, 특히 $2.0mg/m{\ell}$이상의 농도(濃度)에서는 뛰어난 억제효과(抑制效果)를 보여 주었다. Bovine IgG는 Salmonella속 (屬) 2균주(菌株)에 대하여 성장억제효과(成長抑制效果)를 보이지 않았다. Egg lysozyme의 성장억제효과(成長抑制效果)는 bovine SIgA와 비슷한 경향을 나타냈으며 농도(濃度)를 증가시킬수록 억제효과(抑制效果)가 증가(增加)하는 경향을 보여 주었다. 3. Human SIgA와 egg lysozyme을 단독(單獨) 또는 혼합첨가(混合添加)하면서 시간 경과에 따른 성장억제효과(成長抑制效果)를 시험한 결과, 2균주(菌株) 모두에서 egg lysozyme은 대조구(對照區)에 비하여 월등한 성장억제효과(成長抑制效果)를 나타내는 반면 human SIgA 단독(單獨) 및 egg lysozyme과 혼합처리구(混合處理區)에는 경미한 억제효과(抑制效果)를 나타내었다. 4. Bovine SIgA와 egg lysozyme을 단독(單獨) 또는 혼합(混合) 첨가(添加)하면서 시간경과에 따른 성장억제효과(成長抑制效果)를 시험한 결과, S. enteritidis의 경우 세처리구 모두 월등한 성장억제(成長抑制)를 보였으며, S. typhimurium의 경우 egg lysozyme 단독처리구(單獨處理區)만 뛰어난 성장억제효과(成長抑制效果)를 보여 주었다.

• 한국가금학회지
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• 제20권2호
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• pp.65-72
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• 1993

본 실험은 닭의 혈청으로부터 IgG를 순수분리하고 이에 대한 항혈청을 대량 생산하여 IgG의 양적 측정에 필요한 물질의 생산을 자체 정립하고 아울러 육용계의 전사육기간 동안의 혈청중 IgG농도의 변화상을 조사하여 닭의 면역반응에 대한 기초적인 자료를 제공하고자 실시하였다. 1. 닭의 혈청으로부터 순수한 IgG를 분리하였으며 이를 항원으로 면역시켜 IgG에서만 특이적으로 반응하는 항혈청을 생산하였다. 2. 표준항원(IgG)에 대한 항체(anti-IgG)와의 diffusion상태를 측정하여 표준곡선을 작성한 바, diffusion소요시간이 16시간에서 가장 양흐한 회귀직선방정식을 얻었다($R^2$＝0.999). 3. 혈청중 IgG의 농도의 변화상은 1일령에서(4.25mg/$m\ell$) 가장 높았으며 그 이후 급격히 감소하여 11일령에 최저수준(0.81mg/$m\ell$ ； 1일령의 19%수준)에 도달하였다. 그 이후에는 서서히 증가하여 7주령시에는 2.48 mg/$m\ell$의 수준을 보였다. 4. 성별에 따른 IgG 농도간에는 유의적인 차이는 없었으며 3주령까지의 IgG의 농도는 수컷에 비하여 암컷이 약간 높은 수준을 보였다. 한편 수컷은 11일령에서 최저 수준에 도달한 반면에 암컷은 14일령에 가장 낮은 수준에 도달하여 수컷의 능동면역 체계가 암컷보다 조기에 발달되는 것으로 추정된다.

• 농촌의학ㆍ지역보건
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• 제22권1호
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• pp.61-74
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• 1997

In case of tissue invading nematode, proteolytic enzyme was required at their parasitic life. Proteinases obtained from these parasites(Toxocara canis, Ansakis spp. and Trichinella spiralis) were extracted, isolated and further purified. And then the analysis for activity and inhibitory effect of proteinases were performed by appropriate substrate. Determination of protein as a circulating antigen was done in use of infected animal serum with above parasites, respectively. For above experimental objects, following procedures were performed. First, enzymatic activity was measured in use of azocasein and inhibitory effect of porteinase were studied by various inhibitors. Second, partially purified proteins containing enzymatic activity were obtained by ion exchange chromatography, ultrafiltration and electrophoretic elution. Third, role of the partially purified protein as a circulating antigen. The results obtained were as follows : 1. Enzymatic activity of each nematode proteinase was varied according to pH. Optimal pH of Toxocara canis, Ansakis spp. and Trichinella spiralis were pH 6.0, pH 5.5 and pH 6.5, respectively. The optimal molarity of buffer was 0.1M phosphate buffer. Although little difference between these proteinases was observed, temperature stability was at least maintained at $4^{\circ}C$ until 5 days. 2. In case of Ansakis spp. and Toxocara canis, enzymatic activity of these proteinases was considerably inhibited by Leupeptin and EDTA. For maximum enzymatic activity of above proteinases, it was required that cysteine residue of enzyme should be protected. And it was suggested that metallo type was contained in enzyme active site. Proteinase of Trichinella spiralis contained metallo type also. 3. Although partial purification was performed in Ansakis spp. and Toxocara canis, proteins maintaining enzymatic activity were identified as a circulating antigen. From SDS-PAGE and immunoblot, 25 kDa was presented in Ansakis spp.. Specific antigen of Toxocara cains was 110 kDa protein fraction. 55 and 42 kDa proteins were reacted with normal serum. Trichinella spiralis 60 kDa protein fraction was successfully purified from excretory materials in culture. As a result of immune-reaction with Trichinella spiralis infected serum, highly purified 60 kDa protein was maintained antigenicity until final purification step.