• 한국균학회지
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• 제16권2호
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• pp.79-86
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• 1988

잔나비걸상버섯과 영지(靈芝)버섯간(間)에 원형질체융합(原形質體融合)을 실시하여 융합(融合)된 균주(菌株)를 선발하있으며, 융합(融合)된 균주(菌株)를 배양(培養)하여 자실체(子實體)의 형성(形成)하였는 바 그 결과(結果)를 요약하면 다음과 같다. 1. 잔나비걸상버섯 영지(靈芝)버섯간(間)의 종간원형질체융합률(種間原形質體融合率)은 $0.77{\sim}l.38%$였다. 2. 융합(融合)된 균총(菌叢)은 MMM배지상(培地上)에서 균총(菌叢)의 형태적(形態的) 차이를 보이거나 균총(菌叢)의 중앙부위(中央部位)에 잃은 황양색(黃楊色)을 띄고 있었다. 3. 융합주(融合株)는 두 모균주(母菌株)의 장점을 지녔고 대체로 모균주(母菌株)보다 빠른 성장(成長)을 보였으며, 균주(菌株)에 따라서는 GCM 배지상(培地上)에서 segregation이 일어난다. 4. 융합주(融合株)의 균사체(菌絲體)에는 clamp connection이 없으나 segregation이 일어난 균사(菌絲)에서는 있는 것과 없는 균사(菌綿)가 혼재(混在)해 있있다. 5. 균사체(菌絲體)를 마쇄하여 전기영동(電氣泳動)에 의한 esterase isozyme pattern을 확인해 본 결과 모균주(母菌株)와는 전혀 다른 band를 나타내 었다. 6. 선발(選拔)한 30균주중(菌株中) 4균주(菌株)에서 자실체(子實體)가 형성(形成)되었으며 그 형태(形態)는 모균주(母菌株)의 자실체(子實體)와 차이를 보였다.

• Journal of Plant Biology
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• 제15권3호
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• pp.14-18
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• 1972

This paper includes a review on recent development on protoplast culture, regeneraton of plant from protoplast, and fusion of isolated protoplasts, and also describes the possibility of obtaining interspecific hybrid plants through asexual fusion of protoplasts of cells from distantly related plants which are not crossed by the ordinary sexual method.

• Archives of Pharmacal Research
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• 제15권1호
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• pp.30-34
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• 1992

In order to obtain acetaminophen, a popular analgesic-antipyretic, through microbial p-hydroxylation and N-acetylation of aniline, various fungi and bacteria were secreened. Among them, Streptomyces species were chosen for strain improvement by the use of interspecific protoplast fusion technique. Two interspecific fused strains were developed between S. rimosus (N-cetylation function) and S. aureofaciens (p-hydroxylation function) and also between S. lividans and S. globisporus. For efficient protoplast fusion and cell wall regeneration, various conditions were examined. In a typical experiment of mixed S rimosus ($pro^- \;his^-$) and S. aureofaciens ($ilv^-$) protoplasts with 40% (w/v) polythylene glycol 3350 (PEG) for 3 min gave $8.3\times10^{-7}$ of fusion frequency. Treatment of mixed S. lividans (pant-) and S. globisporus (leu-) protoplasts with 50% (w/v) PEG for 3 min at $30^\circ{C}$ gave $1.2\times10^{-6}$ of frequency. Among the fused strains, up to 40-50% increase in p-hydroxylation power was observed. To investigate the possibility of plasmid involvement in p-hydroxylation power was observed. To investigate the possibility of plasmid involvement in p-hydroxylation of acetanilide, plasmid curing was attempted. We found that cells treated with acriflavine (at the frequency of 100%) and cells regenerated from protoplsts of S. auroefaciens (2% frequency) lost their p-hydroxylation function.

• 약학회지
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• 제38권6호
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• pp.696-702
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• 1994

An interspecific fusant strain, MS1, was obtained by protoplast fusion between S. peucetius subsp. caesius and S. platensis. We studied on the microbiological and cultural characteristics of the fusant MS1. In liquid culture, the viscosity of culture broth of S. peucetius increased during incubation However the fusant MS1 formed pellet like S. platensis without viscosity change. On agar medium the colony morphology of MSI resembled S. platensis but the color was similar to S. peucetius. The fermentation products of the fusant MS1 was identical with S. peucetius.

• 미생물학회지
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• 제28권1호
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• pp.47-54
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• 1990

섬유소를 분해할 수 있는 Cellutomonas flavigena NCIB 12901 과 Cellulomonas bibula NCIB 8142의 종간 원형질체 융합을 하고 그로부터 얻은 융합체의 특성을 조사하였다. C. bibuta의 원형질체는 lysozyme(600Ieιllulomoηas libula NCIB 8142의 종간 원형 섣처l 융 한응 하고:1로부터 얻은융합셰익 특성을 조사하였다 . C bibula의 원형선셰는 lysozyme $600{\mu}{\textrm{g}}$/ml)를 6시간 처리하여 얻었으며, 삼투안정제로는 O.5M sorbitol의 최저이었고 원형질체 재생률은 6.7%였다. 원형질체 융합은 25mM $CaCl_{2}$를 포함하는 40% PEG (M.W.6000)를 $30^{\circ}C$에서 30분간 처리함으로 수행하였고 C. bibuιl와 C. flavigeηa의 융합 빈도는 $5\times 10^{-4}$으로 원형질체 형성 및 합체를 얻었고, 모균주와 융합체의 영양요구성, 항생물질 내성, 효소활성, 세포벽 성분, 운동성 등을 비교하여 융합체는 모균주의 재조합체임을 밝히었다.

• 한국균학회지
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• 제20권2호
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• pp.118-125
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• 1992

노랑느타리 Pleuroltus cornucopiae와 사철느타리 Pleurolus florida의 영양요구주(營養要求株)로부터 나출(裸出)한 원형질체(原形質體)를 polyethylene glycol로 융합(融合)하여 종간(種間) 체세포잡종(體細胞雜種)을 얻었다. 이들은 핵융합주(核融合株) nuclear hybrid 또는 이질이배체(異質二倍體) allodiploid, 이핵체(異核體) heterokaryon, 자연적(自然的) 분리성이핵체(分離性異核體) spontaneous segregated heterokaryon로 나누어졌으며, 6융합조합(融合組合)중에서 1조합(組合)에서만 꺽쇠연결체 clamp connection를 가진 것이 나타났다. 총 59 융합주 중에서 꺽쇠연결체를 가진 2균주와 가지지 않은 10균주가 완전한 자실체(子實體)를 형성하였는데 거의 사철느타리 형태(形態)와 유사(有似)하였으나 버섯의 갓 색택(色澤)이 양친(兩親)인 노랑느타리가 어릴때 yellow, 사철느타리가 orange white 인데비해 체세포 잡종은 light blond-greyish brown 으로 다양한 혼합색(混合色)으로 나타났다. 꺽쇠연결체가 없는 융합주로부터 발용(發茸)된 자실체는 두균주를 제외하고 모두 꺽쇠연결체를 가졌으며, 이 자실체(子實體) 조직(組織)을 완전배지(完全培地)에 배양(培養)한 결과 균사생장(菌絲生長)이 빠르고 균사도 꺽쇠연결체를 가져 본래(本來)의 융합주와는 다른 형태로 변하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제18권3호
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• pp.296-300
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• 1990

자외선 조사와 NTG를 처리하여 Brevibacterium flavum 10AHR(arg his $Rif^r$)과 Corynebacterium glutamicum 11TS(trp $Sm^r$의 돌연변이주를 분리하였다. B.flavum 10AHR과 C.glutamicum 11TS를 300$\mu g$/ml의 lysozyme으로 18시간 처리하여 원형질체를 형성하고, 융합시 30의 PEG 6,000으로 처리하였을 때 가장 높은$3.7\times 10^{-6}$의 융합빈도를 나타내었다.

• 한국균학회지
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• 제22권4호
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• pp.378-385
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• 1994

느타리 Pleurotus ostreatus와 여름느타리 Pleurotus sajor-caju의 영양요구주로부터 분리한 원형질체를 polyethylene glycol로 융합하여 종간 이질핵체 heterokaryon를 획득하였다. 불화합 균주간에는 9 융합조합에서 70개 융합주를 획득하여 7 융합주의 자실체를 유도하였으며 화합 균주간에는 1조합에서 모두 자실체를 형성하였다. 화합 균주간 융합주를 제외하고는 불화합성간 융합체는 꺽쇠연결체 clamp connections가 없었고 한천배지나 액체배지에서는 자실체를 형성하지 않았다. 그러나 활엽수톱밥과 미강이 혼합된 배지에서 균사가 완전히 성장한후 일정한 광과 온도를 처리한 결과 꺽쇠연결체 있는 균사가 다시 성장하였으며 이들 균사에서 버섯자실체가 형성되었다. 버섯자실체는 양친의 중간형태로 갓 색깔도 양친이 혼합된 orange grey-brownish grey로 나타났다. 그러나 다소의 자실체 형질인 자실층 hymenium, 버섯대, 생장습성은 느타리를 닮았는데 특히 여름느타리가 단생 closely scattered인데 비해 느타리는 속생 caespitose으로 느타리와 유사하였다. 자실체는 모두 꺽쇠연결체를 가졌으며 조직배앙한 결과 균사가 모두 꺽쇠연결체를 가져 본래 융합주와는 다른 형태로 변하였다. 6융합조합 8균주의 $F^2$에서의 유전형질 분리와 유전자 재조합을 분석한 결과 원영양형 prototroph이 양친 느타리형, 여름느타리형, 영양요구성 유전자 재조합형에 비해 많이 분리되었으며 3개조합에서 양친에 없는 유전자좌가 나타났다. 자실체가 형성되지 않는 융합주 P188과 사철느타리 ASI 2-3-rib와 균사접합 한 후 임성을 유도하여 유전분석한 결과 원영양형이 적게 분리되었고 여름느타리 양친형이 분리되지 않았으며 3친주 형질이 모두 유전자 재조합형으로 분리되었다.

• 약학회지
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• 제38권6호
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• pp.749-755
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• 1994

An interspecific fusant strain, Streptomyces MS1 was obtained by protoplast fusion between S. peucetius subsp. caesius and S. platensis. We studied on the fermentation characteristics of the fusant strain. The fermentation products of the fusant MS1 was identical with S. peucetius, but its production of anthracycline was more stable than S. peucetius under various fermentation conditions in regard to acidogenesis of fermentation broth. The optimal medium composition for anthracycline production by fusant MS1 as follows: sucrose 2.0%, glucose 1.0%, soytone 0.7%, $CaCO_3$ 0.2%, $KH_2PO_4$ 0.013%, casamino acids 0.01%, $K_2SO_4$ 0.025%, $MaCl_2\;6H_2O$ 1.024%, 5M $CaCl_2\;5H_2O$ 0.4%, 1N NaOH 0.7%, 20% L-proline 1.5%. In this condition, the productivity of anthracycline was $80{\sim}100\;{\mu}g/ml$.

• 동아시아식생활학회지
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• 제5권1호
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• pp.93-99
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• 1995

For the improvement of the L-lysine productivity of Brevibacterium flavum and Corynebacterium glutamicum, fusants were induced by interspecific protoplast fusion of Bacillus subtilis with C. glutamicum and B. flavum. The following results were obtained through protoplast formation of strains condition of protoplast fusion, characteristics of the fusants, and the productivity of lysine form starch. B. flavum BF-5 and C. glutamicum protoplasts were made by the treatment of 0.3unit/$m\ell$ of penicillin G at the early stationary growth phase for 2 hours followed by incubation with 10mg/$m\ell$ of lysozyme at 37$^{\circ}C$ for 120 min. When a mixture of the protoplast was treated with 30% PEG(M.W.6,000) solution containing 50mM CaCl2 at optimal conditions, the intergeneric fusion frequency between protoplasts of C. glutamicum CG-2 and B. subtilis BD 224 was 7.1${\times}$105. The genetic properties on the L-lysine producing fusants were compared with those of parental strains. As a results, the intergeneric fusants were completed in each auxotrophic requirement, resistances for S-(2-amino-ethyl)-L-cysteine and kanamycine were confirmed. And one of fusants selected, FBB-41 were found to be genetically stable fusants. The aspartokinase activity of FBB-41 strain increased than that of the parent strain.