신령버섯(Agaricus blazei Murill)의 액체 배양으로 다당체의 균사체외 분비를 유도하였으며, 버섯 균사체의 새포내 다당체와 세포외 분비 다당체의 면역증진활성을 in vitro 시험으로 비교하였다. 부분 정제된 세포내 다당체와 세포외 다당체의 총당 함량은 각각 85.6%와 95.3%였으며, ${\beta}$-glucan 함량은 각각 67.9%와 88.1%로 측정되었다. 면역활성 실험에는 시료의 닥 함량을 동일하게 맞추어 사용하였다. In vitro에서 균사체내외 다당체는 대식세포 주인 RAW 264.7을 활성화시켜 nitric oxide (NO) 생성을 농도 의존적으로 증가시켰으며, 각각 최대 53.9%, 53.1%의 비슷한 증가활성을 나타내었다. 또 균사채내외 다당체는 모두 RAW 264.7을 활성화시켜 염중성 cytokine류인 interleukin (IL)-$1{\beta}$, IL-6, tumor necrosis factor (TNF)-${\alpha}$의 생성을 증가시켰으며, 이때 3종의 cytokine 모두에서, 세포내 다당체에 비해 세포외 다당체를 처리했을때 저농도에서 높은 증가률을 나타내었다. 두 다당체는 in vitro 상에서 비장세포를 증식시키는 효과를 나타내었으며, 세포내 다당체가 농도 의존적으로 증식효과를 보인데 반해 세포외 다당체는 저농도에서 증식이 높았고, $250\;{\mu}g/ml$ 농도 이상에서는 더 높아지지 않았다. 두 다당체 모두 암세포인 B16F0 melanoma에 대한 직접적인 세포독성 효과는 나타내지 않았다. 신령버섯 균사체 배양으로 생성된 세포내외 다당체는 in vitro에서 모두 면역활성을 증가시키는 것으로 나타났으며 전반적으로 그 활성은 세포내 다당체보다 세포외 다당체가 우수한 것으로 판단되었다.
본 연구는 항산화 효과가 뛰어난 천년초를 이용하여 taxifolin을 순수분리하고 항염증 효과를 연구하였다. 천년초는 잎과 열매로 나누어 추출하였고 추출공정으로는 먼저 메탄올을 이용하여 조추출물을 추출하였다. 이렇게 얻어진 조추출물의 항산화 효과를 측정하였는데. 잎 추출물에서 $38.33{\pm}1.07{\mu}g/mL$로 높은 항산화 활성을 나타내었다. high performance liquid chromatography를 이용하여 taxifolin을 분리하고 확인하였다. 이렇게 얻어진 taxifolin을 이용하여 항염증 효과를 측정하였다. Taxifolin의 농도별 세포독성 측정에서는 $500{\mu}M$ 농도까지 처리 하였을 때 특별한 세포독성을 나타내지는 않았다. lipopolysaccharide에 의해 유도된 RAW 264.7 cell을 이용한 taxifolin의 염증성 cytokine 측정실험에서는 IL-6의 발현양을 $500{\mu}M$ 처리시 $2139.75{\pm}1.64pg/mL$로 대조군에 비하여 47%까지 저해하였다. 하지만 $TNF-{\alpha}$의 발현량은 대조군에 비하여 5%만 감소하였다. 염증성지표의 NO의 생성량은 $500{\mu}M$ 처리시 $17.43{\pm}0.27{\mu}M$로 대조군에 비하여 57%까지 감소 시켰으며, 이와 관련된 COX-2 단백질의 발현양은 약 66% 이상 감소시켰다. 따라서 천년초에서 추출한 taxifolin은 항염증 효과가 있음을 확인할 수 있다.
체내 면역시스템은 내부의 돌연변이 세포에 의하여 발생된 암 뿐만 아니라 세균감염에 의하여 기인된 여러질환으로 부터 우리의 몸을 보호한다. 하지만 노화됨에 따라 비정상적인 면역시스템은 류머티스 관절염과 같은 만성염증을 유발시킨다. 그러므로, 본 연구의 목적은 효능성분으로 바이칼린을 함유한 황금의 항염증 효과를 조사한 것이다. 먼저 HPLC 분석에서 SBWE는 42.2 mg/g의 바이칼린을 함유하고 있는 것으로 관찰되었다. Raw264.7 세포에서 황금열수추출물(SBWE)의 세포독성을 평가하기 위하여 MTT assay를 수행하였다. SBWE는 160 ${\mu}g/ml$ 이하의 농도에서 세포에 대한 독성이 없는 것으로 나타났다. 또한 lipopolysaccharide로 자극된 대식세포에서 발생하는 nitric oxide 소거능 효과를 조사해 본 결과 40 ${\mu}g/ml$의 농도에서 SBWE는 40%의 억제효과를 나타내었다. 뿐만 아니라 SBWE는 zymosan으로 자극된 대식세포의 식세포작용도 억제 하였다. 더욱이 SBWE는 농도에 비례하여 대식세포에서 생성되는 $TNF{\alpha}$함량을 감소시켰다. SBWE는 또한 시간경과 실험에서 인터류킨 베타($IL-1{\beta}$)의 생성을 억제하였다. 더욱이 cyclooxynase-2의 발현수준은 20 ${\mu}g/ml$의 SBWE 처리에 의하여 현저하게 감소되었다. 그러므로 이상의 연구결과는 황금 열수 추출물이 면역조절을 통해 항염증을 효능을 발휘할 수 있다는 하나의 증거를 제공한다.
Tetrandra is the root of Stephania tetrandra 5. Moore (family Menispermaceae), or of Aristolochia frangchi Wu (family Aristolochiaceae). It is a Differ-flavored and cold-property herb acting on the urinary bladder, kidney and spleen meridiands. Known biological effects of this herb are expelling wind to relieve pain and inducing diuresis to alleviate edema. This herb also has anti-inflammatory and anti-hypersensitivity actions. Recent studies have shown that Stephanniae Tetrandrae Radix has antimicrobial effects, namely, a protective effect on acute renal failure induce by gentamicin sulfate and a suppressive effect against clostridium perfringes. However, there is a lack of studies concerning the immunological activities of this herb. The present study was conducted to evaluate the immunological activities of Stephanniae Tetrandrae Radix on the regulatory mechanisms of cytokines and nitric oxide (NO) in Raw 264.7 cells. Cell viability was measured by MTT assay after the treatment of Stephanniae Tetrandrae Radix extract (STRE) and NO production was monitored by measuring the nitrite content in culture medium. COX-2 and iNOS were determined by immunoblot analysis, and levels of cytokine were analyzed by sandwich immunoassays. Results provided evidences that STRE inhibited the production of nitrite and nitrate (NO), inducible nitric oxide synthase (iNOS), cyclooxygenase-2 (COX-2) tumor necrosis $factor-{\alpha}\;(TNF-{\alpha})$, $interleukin-1{\beta}(IL-1{\beta})$ and interleukin-6 (IL-6) in Raw 264.7 cells activated with lipopolysaccharide (LPS). These findings showed that STRE could produce some anti-inflammatory effects which might play a role in adjunctive therapy in Gram-negative bacterial infections.
Objectives : Epimedii Herba has been frequently used in Korean Traditional Medicine to treat impotence, spermatorrhoea, exophthalmos, and forgetfulness. Present study investigated anti-inflammatory effects of Epimedii Herba water extract (EWE) and attempted to elucidate molecular mechanisms involved. Methods : To explore anti-inflammatory effects of EWE, RAW 264.7 cells, a murine macrophage cell line, were pretreated with $10-100{\mu}g/m{\ell}$ of EWE, and then subsequently exposed to $1{\mu}g/m{\ell}$ of lipopolysaccharide (LPS). Levels of nitric oxide (NO), interleukin-6, $interleukin-1{\beta}$, and tumor necrosis $factor-{\alpha}$ were monitored in the medium. Expression levels of inducible nitric oxide synthase and cyclooxygenase-2 were determined by immunoblot and real-time PCR analyses. Signaling pathways related with nuclear $factor-{\kappa}B$ ($NF-{\kappa}B$) and mitogen-activated protein kinases were monitored to elucidate molecular mechanisms involved. Finally, the role of three flavonoid compounds in EWE on LPS-mediated NO production were investigated. Results : In conditioned medium, pretreatment of EWE ($100{\mu}g/m{\ell}$) significantly inhibited LPS-stimulated NO and pro-inflammatory cytokine production. In addition, EWE attenuated the expressions of inducible nitric oxide synthase and cyclooxygenase-2 by LPS. EWE prevented the phosphorylation and degradation of inhibitory ${\kappa}B{\alpha}$, nuclear translocation of $NF-{\kappa}B$, and DNA binding of $NF-{\kappa}B$, while EWE did not change the phosphorylation of mitogen-activated protein kinases by LPS. Moreover, icariin, icaritin, and quercetin partly, but significantly, inhibited the LPS-stimulated NO production. Conclusions : These results suggest that EWE has an ability to prevent inflammation in macrophages through inhibition of $NF-{\kappa}B$ signaling pathway.
7-Hydroxy-4-methylcoumarin (7H-4MC) inhibits hyaluronan production in multiple cell lines and tissue types both in vitro and in vivo. It is a commercially available drug approved for human use, called hymecromone, in European and Asian countries to prevent biliary spasms. Nevertheless, as the pharmacological efficacy of 7H-4MC has not yet been reported in macrophages, this study investigated its anti-inflammatory effects and mechanism of action using lipopolysaccharide (LPS)-induced RAW 264.7 macrophages. LPS-induced RAW 264.7 cells were treated with various concentrations of 7H-4MC (62.5, 125, 250, and 500 μM). The application of 7H-4MC significantly reduced nitric oxide and prostaglandin E2 production without cytotoxic effects. Additionally, 7H-4MC strongly decreased the expression of inducible nitric oxide synthase and cyclooxygenase. Furthermore, 7H-4MC reduced the production of proinflammatory cytokines, such as tumor necrosis factor-α, interleukin (IL)-1β, and IL-6. Finally, 7H-4MC exerted its potent anti-inflammatory actions via the upregulation of IκB-α production, which led to the inhibition of nuclear factor-κB (NF-κB) activity. These results, obtained in macrophage cell lines, suggest that 7H-4MC prevents inflammatory diseases via the NF-κB signaling pathway and that its use could be beneficial for human health. Ultimately, this is the first report describing the anti-inflammatory activity of 7H-4MC in a macrophage cell line.
Objectives: Interleukin (IL) -10 is a potent cytokine with a dual ability to immunosuppress or immunostimulate. We aimed to explore the association of IL10 promoter polymorphisms with risk of gastric cancer (GC) in a Han population in Southwestern China. Methods: We enrolled 308 pairs of GC and control subjects from four hospitals and a community between October 2010 and August 2011 in a 1:1 matched case-control design. Demographic information was collected using a designed questionnaire. IL10-592 A>C and IL10-1082 A>G polymorphisms were determined by Sequenom MassARRAY analysis. Results: Patients with GC reported statistically higher proportions of family history of cancer (29.9% versus 10.7%, P<0.01) and alcohol drinking (54.6% versus 43.2%, P<0.01) than did controls. Similar results were observed in comparison between non-cardia GC patients and controls (P<0.01 and P=0.03). Variant genotypes of IL10-592 A>C and IL10-1082 A>G were not associated with overall GC risk (adjusted OR, 0.94, 95% CI, 0.66-1.33; adjusted OR, 1.00, 95% CI, 0.62-1.60). Sub-analysis showed that the IL10-592 AC/CC variant genotype was associated with decreased non-cardia GC risk (adjusted OR, 0.58; 95% CI, 0.36-0.95). No association was found between any of the IL10 haplotypes established from two polymorphisms and risk of non-cardia GC. Conclusions: In conclusion, our data do not link the two SNPs of IL10-592 and IL10-1082 with overall GC risk. We demonstrate that IL10-592 polymorphism is associated with protective effect against non-cardia GC. Our findings may offer insight into risk associated with the development of GC in this region.
본 연구의 목적은 비타민 B복합제가 스트레스에 의해 유도된 변역변화에 대한 효과를 알아보기 위해 조사되었다. 대상은 의과대학 학생들로 시험 4주전, 시험 2주전, 시험기간 세 차례를 모두 완료한 21 명으로 하였다. 이들 중 10명은 비타민 투여군으로, 11명은 비투여군으로 구분하였다. 스트레스지각 및 정신병리를 평가하기 위해 global assessment of recent stress(GARS) 척도와 symptom checklist-90-revised(SCL-90-R)를 사용하였다. 세포성 면역기능은 phytohemagglutinin(PHA)에 대한 임파구 증식반응 및 interleukin-2(IL-2)생성능을 측정하여 평가하였다. 비타민투여군이 비투여군에 비해 SCL-90-R상 불안척도의 점수가 유의하게 낮았다. 그러나 비타민 B 투여유무에 따른 임파구증식반응 및 IL-2생성능은 유의한 차이를 보이지 않았다, 시간경과에 따른 임파구증식반응은 유의하게 증가되었다. 시간 경과 및 비타민 투여유무에 따른 임파구증식반응 및 IL-2생성능의 변화량은 각각 유의한 차이를 보이지 않았다. 결론적으로 비타민 B복합제는 불안을 경감시키나 세포성 면역기능에는 유의한 영향을 미치지 않음을 시사한다. 한편 시험스트레스는 비타민 B 투여에 관계없이 임파구증식반응을 증가시킬 가능성이 시사되었다.
소양인(少陽人) 인동등지골피탕(忍冬藤地骨皮湯)이 중소(中消) 합병증(合倂症)에 미치는 영향(影響)을 살펴보고자 하였고 결과(結果)는 다음과 같다. 1. 장관운동(腸管運動)을 억제(抑制)하였다. 2. Acetic acid에 의한 writhing syndrome을 억제(抑制)하였다. 3. Evans blue에 의한 모세혈관투과성(毛細血管透過性)을 억제(抑制)하였다. 4. Histamine에 의한 급성족부종(急性足浮腫)을 억제(抑制)하였다. 5. Cotton pellet에 의한 육아종(肉芽腫) 형성(形成)을 억제(抑制)하였다. 6. 흉선세포(胸線細胞) 및 비장세포(脾臟細胞)의 세포생존율(細胞生存率)을 증가(增加)시켰다. 7. 흉선세포(胸線細胞)로부터 ${\gamma}-IFN$ 및 IL-2의 분비(分泌)를 억제(抑制)하였다. 8. 비장세포(脾臟細胞)로부터 IL-4의 분비(分泌)는 증가(增加)시켰으나, $TNF-{\alpha}$ 및 $IL-1{\beta}$의 분비(分泌)는 억제(抑制)하였다. 9. 복강(腹腔) 대식세포(大食細胞)로부터 $TNF-{\alpha}$, $IL-1{\beta}$ 및 nitric oxide의 분비(分泌)를 억제(抑制)하였다. 10. 복강(腹腔) 대식세포(大食細胞)의 lucigenin chemiluminescence 및 FITC-conjugated E. cole engulfment를 촉진(促進)하였다. 이상의 실험(實驗) 결과(結果) IJTE는 장관운동(腸管運動)을 억제(抑制)하였으며, 진통(鎭痛) 및 항염작용(抗炎作用)을 나타냈고, 이들 작용은 면역세포(免疫細胞)로부터 $TNF-{\alpha}$, $IL-1{\beta}$ 및 nitric oxide의 생성(生成)을 억제(抑制)하기 때문인 것으로 추정된다. 따라서 이러한 기전(機轉)에 의하여 인동등지골피탕(忍冬藤地骨皮湯)은 중소(中消) 합병증(合倂症)의 하나인 염증(炎症)을 억제(抑制)하는데 유효(有效)한 것으로 사료(思料)된다.
CSH/HeJ 마우스에 Acanaamoeba culbertsoni영양형 $3{\;}{\times}{\;}10^5$개를 비강으로 접종하 여 실험적 아메바성 수막뇌염을 일으킬 때 숙주의 방어기작에 대식세포가 미치는 영향을 알아 보았다. 대식세포 억제제인 silica를 마우스 복강 내로 투여한 경우의 사망율이 60.6%로 아메바만을 접종한 마우스의 사망율이 10.0%와 비하여 큰 차이를 보였으며 열처리하여 죽인 Toxoplasma gondii tachyzoites의 in vitro탐식능 관찰에서 기능을 억제시킨 대식세포의 탐식능이 3% 이하로써 아메바에 대한 복강대식세포의 기능의 저하로 인한 수막뇌염의 증가를 관찰하였다. A. culbertsoni에 대한 대식세포의 살해활동의 in vitro 실험에서 silica투여한 실험군의 복강대식세포의 뚜렷한 기능 저하를 관찰하였고, 효소표지 면역 검사법(ELISU)을 이용한 마우스 혈청 내의 $interleukin-1{\beta}(IL-1{\beta})$의 흡광도는 아메바 접종군과 생리식염수 투여군보다 silica투여를 수반한 실험군이 현저하게 낮게 나타나 대식세포가 억제되었을 때 실험적 수막뇌염이 증가함을 알 수 있었다. 결과적으로 대식세포가 A. culbertsoni 감염에 대한 숙주의 방어작용에 중요한 역할을 하는 것으로 생각된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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