Actinomyces are Gram-positive, non-acid-fast, anaerobic or microaerophilic filamentous bacteria. These organisms are frequently detected from infected root canals and periapical lesion. The purpose of this study was to use indirect immunofluorescence to determine the prescence of select Actinomyces species in a survey of teeth associated with periapical lesion, to clarify the relationship between clinical symptoms of periapical lesions and the Actinomyces species and to study on the cross reaction among Actinomyces. Actinomyces israelii serotype I (ATCC 12102), Actinomyces israelii serotype II (ATCC 29322), Actinomyces viscosus serotype II (ATCC 19246), Actinomyces naslundii serotype I (ATCC 12104) were cultured in anaerobic condition. Rabbit antisera were prepared by intravenous injection of formalized whole cells. Indirect immunofluorescence method was used to achieve the purpose. The following results were obtained. 1. There was a relationship between Actinomyces and periapical disease. 2. A. israelii serotype I, II were frequently identified with Indirect Immunofluorescence and most often assosiated with periapical disease. In culture finding, there was no significant difference between each group. 3. Indirect Immunofluoresence is both more sensitive and more rapid than culture for identification of Actinomyces species in patients with periapical lesion. 4. A. israelii serotype I, II was highly isolated in infected root canals with local swelling, A. naslundii serotype I was highly isolated in those with foul odor, and A. israelii serotype I was found in higher frequncy in those with exudate than other bacteria. 5. In the Indirect Immunofluorescence (1 : 320), A positive cross reaction was obtained between A. israelii serotype I and A. israelii serotype II, also, A. viscosus serotype II and A. naslundii serotype I. There was no cross reaction between A. israelii serotype I, II and A. viscosus serotype II, A. naslundii serotype I.
These experiments were undertaken as a basic study to develop immunocontraceptive vaccine and to understand the role of zona pellucidae in early fertilization process by identifying the monoclonal and polyclonal antibody to porcine zona pellucidae and polyclonal antibody to mouse zona pellucidae by indirect ELISA and indirect immunofluorescence test. The results obtained in these experiments were summarized as follows : 1. The titer of the antibodies to zona was determined by indirect ELISA using solubilized porcine zona coated plates. Both monoclonal and rabbit polyclonal antibodies showed very high titers ; O.D at 1 : 12,800 dilution of antibodies was still significantly higher than that of non-immunized control serum. Rabbit anti-mouse zona pellucidae sera also reacted with porcine zona pellucidae. 2. By indirect immunofluorescence test strong fluorescences were observed on the egg treated with homologous and heterologous rabbit polyclonal antibodies and FITC lablled 2nd antibodies and found to crossreact strongly with the eggs from the pig and mouse. While weaken fluorescences were observed on the eggs treated with monoclonal antibodies.
Objectives : To observe the regenerative effects of indirect moxibustion, a traditional Korean medical treatment on skeletal muscles using mouse model of skeletal muscle adiposity. Methods : Twenty seven ICR male mice were randomly assigned into Intact control(n=3), glycerol treatment together without moxibustion(n=12), and glycerol treatment together with moxibustion (n=12) groups. Mice of glycerol treatment groups were injected with 50 ${\mu}l$ DW(distilled water) containing 50 % of glycerol into the two tibialis anterior. After injection, moxibustion was applied at 'Shenshu'($BL_{23}$) and 'Zusanli'($ST_{36}$) acupoints three times per each session, every days for twelve days(total 12 treatments). Phospho-Erk1/2, Myostatin protein levels were analyzed by western blotting and immunofluo-rescence staining techniques for tissues of the tibialis anterior muscle. Smad, phospho-Smad were analyzed by immunofluorescence staining. Results : 1. Histological analysis of sections from injected TA muscles showed that glycerol induced rapidly muscle necrosis, with a maximum at day 3. 6 days and 9 days after injection, muscle was regenerating. 2. According to western blotting and immunofluorescence staining, phospho-Erk1/2 protein signals in glycerol treatment with moxibustion group were stronger compared to Intact and glycerol treatment without moxibustion group. 3. According to western blotting and immunofluorescence staining, myostatin protein signals in glycerol treatment without moxibustion group were stronger compared to Intact and glycerol treatment with moxibustion group. 4. According to immunofluorescence staining, Smad protein signals in glycerol treatment without moxibustion group were stronger compared to Intact and glycerol treatment with moxibustion group. 5. According to immunofluorescence staining, phospho-Smad protein signals in glycerol treatment without moxibustion group were stronger compared to Intact and glycerol treatment with moxibustion group. Conclusions : These results confirm that indirect moxibustion of 'Shenshu'($BL_{23}$) and 'Zusanli'($ST_{36}$) influences muscle regeneration in mouse models of skeletal muscle adiposity. Further discussion, and the establishment of moxibustion mechanism will prompt clinical application of moxibustion.
A total of 420 chicken sera from various regions were tested for the presence of antibodies to avian rotavirus using indirect immunofluorescence assay (IFA). In broiler farms, rotavirus antibodies were detected from 20 farms among 30 farms tested and the positive rates were above 50% in 9 farms. In parent stock farms, rotavirus antibodies were detected from 5 farms among 14 farms tested. From sera collected in 7 layer farms rotavirus antibodies were not detected.
본 연구에서는 숙성 중 야기되는 식육의 인화정도를 파악할 수 있는 척도로서 이용하기 위하여, 근원섬유 Z선의 구성단백질의 하나인 zeugmatin에 대한 항체를 조제, 간접연역형광법으로 zeugmatin의 숙성중 변화와 근원섬유의 소편화와의 관계를 알아 보았다. Zeugmatin은 변성하기 쉬운 단백질로서 재래식 방법으로는 정제가 블가능하므로 이 단백질을 함유하는 획분을 정제과정 중에 채취하여 전기영동으로 전개, 이에 해당하는 band를 분리하여 polyclonal항체를 용이하게 받을 수 있었으며, 이 조제된 항체는 zeugmatin과 특이적으로 반응하였다. 조제된 항체를 이용하여 간접면역형광법으로 식육의 숙성중에 zeugmatin의 변화와 근원섬유의 소편화로 나타나는 식육의 연화와의 상관관계를 알아 본 결과, 이 두가지 변화는 특이적으로 일치하였다 즉, 닭의 흉근을 $4^{\circ}C$에서 숙성하면서 측정한 근원섬유의 소편화도는 도살 후 6시간에서 24시간 사이에 급속히 증가하여 이 시간대에 식육이 급속히 부드러워짐을 나타내었고, zeugmatin에 대한 항체가 나타내는 형광광도도 도살 후 6시간에서 24시간 사이의 동일한 시간대에 급적히 약화되어 zeugmatin이 이 시간대에 급속히 인화하였음을 나타내었다. 이상의 결과로 근원섬유 Z선의 구성단백질 중 하나인 zeugmatin은 숙성에 따라 야기되는 식육의 연화정도, 즉 식육의 숙성도를 나타내는 척도로서 이용될수 있으며, 그 이용방법으로는 간접면역형광법이 가장 간편한 방법인 것으로 판단되었다.
Porphyromonas endodontalis is a black-pigmented anaerobic Gram-negative rod which is associated with endodontal infections and this microorganism possesses a potential for pathogenicity. The purpose of this study was to compare the membrane components of Porphyromonas endodontalis and Porphyromonas gingivalis and to study the immune reaction patterns of Porphyromonas endodontalis with patients with periapical lesion. Porphyromonas endodontalis (ATCC 35406), Porphyromonas gingivals serotypea (381), serotype b(W50), serotype c(A7A1-28) were cultured in anaerobic condition. Rabbit antisera were prepared by intravenous injection of formalized whole cells and human sera were obtained from patients and dental students. Indirect immunofluorescence method was used to study on the cross reaction between Porphyromonas endodontalis and Porphyromonas gingivalis serotype a, b, c antigen. Total membrane protein profiles of Porphyromonas endodontalis antigen were studied by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis and the reactivity of antigenic components of Porphyromonas endodontalis against sera of patients and rabbit anti-Porphyromonas endodontalis antisera were assessed by Immunoblotting method. The following results were obtained : 1. Antigens of Porphyromonas endodontalis has multiple antigenic components, and both patients with periapical lesion and normal healthy individual showed immune response to this. 2. Patients group and healthy individual group showed a diversity of immune reaction pattern but they showed immune response against 43kd protein. 3. Patients with periapical lesion showed more diverse immune response than healthy individual and in some patients, much more bands appeared to lower molecular weight protein. 4. According to indirect immunofluorescence and Immunoblotting study, Porphyromonas endodontalis did not share common antigen with Porphyromonas gingivalis serotype a, b, c.
Previous studies have been performed for the sero-identification of selected species of Bacteroides by immunofluorescence antibody techniques and enzyme-linked immunosorbent assay using species-specific rabbit antisera to B. gingivalis, B. intermedius, and B. melaninogenicus. However, these studies have not commented on the serological cross-reactivity between these 3 species of black- pigmented Bacteroides. For the cross-reactivity study, antisera to B. gingivalis ATCC 33277, B. intermedius ATC C25261 and B. asaccharolyticus ATCC 25260 were raised from rabbits. Preliminary study for observing the cross-reactivity between these species was performed by indirect immunoflourescence technique. Immunoabsorption of the antisera was done with bacterial cells from the other species and the species-specificity of the antisera was conformed by the absence of reactivity with bacterial strains from the other species by indirect immunofluorescence technique and enzyme-linked immunosorbent assay. Three representative unabsorbed antisera cross-reacted strongly with cells from the other species. Especially, anti-B. asaccharolyticus ATCC 25260 antiserum showed a strong cross-reactivity with B. gingivalis ATCC33277. After immunoabsorption of 3 representative antisera with the other species, the cross-reactivity was found only between B. gingivalis ATCC 33277 and B. asaccharolyticus ATCC 25260. Further study would be necessary to clarify the cross-reactivity between important oral black-pigmented Bacteroides from subgingival plaque or bacterial colonies for rapid identification.
Saccharomyces cerevisiae의 KEMI 유전자는 세포의 영양 상태에 따라 spindle pole body나 microtubules의 기능을 조절하는 것으로 알려져 있다. 이 유전자 산물의 세포내 분포 및 기능을 규명하기 위하여, KEM1::lacZ 융합 유전자를 제조하였다. 즉, 클론된 KEM1 유전자에 대장균의 ${\beta}$-galactosidase 구조유전자를 갖는 mini-Tn10-LUK element를 무작위 삽입한 pool을 제조하고, 이를 분석하여 KEM1의 기능 부위가 약 3.5kb에 해당함을 확인하였고, KEM1의 기능이 살아있는 KEM1::lacZ 융합 유전자의 클론을 선별하였다. 이 클론을 ${\beta}$-galactosidase 항체를 이용한 indirect immunofluorescence 방법으로 분석하여 KEM1::lacZ 융합 단백질이 핵주변에 위치함을 확인하였다.
항-AFP 단일 클론 항체를 생산한 다음, 이를 이용한 noncompetitive ELISA 방법으로 정상인과 간암 및 그 밖의 간질환 환자의 혈청내 AFP농도를 측정해 본 결과 간암진단 방법으로는 혈청 AFP농도 측정이 필수적임이 확인되었다. 또한 간암 및 그 밖의 간질환 환자의 조직에 대한 항-AFP-항체의 반응성을 immunperoxidase 방법과 indirect immunofluorescence 방법으로 검정해 본 결과, 간암조직세포 및 일부 간질환 조직세포에서 항-AFP-항체에 대해 양성반응을 나타내었다. 그러나 그 반응성의 정도는 간암조직세포에서 보다 간암조직 주위의 비신생 간세퐁서 더욱 높았다. 그러므로 간암 진단에 있어서 AFP항원을 면역조직화학적으로 검정하는 방법은 적합하지 않았다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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