새로운 주름개선 효능물질을 개발하기 위하여 여러 가지 세포배양 모델을 이용한 in vitro 효능물질의 검색방법을 이용하여 후보물질을 도출하고 있다. 이처럼 In vitro에서 선별된 주름개선 후보물질은 사람피부에 직접 도포 하였을 때 in vitro에서 와 는 달리 주름개선 효능이 없는 경우가 많이 있다. 즉 in vitro 검색결과와 사람피부에서의 효능은 현실적으로 큰 차이를 보인다는 것이다. 그러나 모든 효능 후보물질을 사람 피부에 직접 검사할 수는 없는 현실적 어려움이 있다. 이러한 애로점을 해결하기 위하여, 동물모델이나, 인공피부배양모델 등을 이용하는 추세이다. 이번 강의에서, 본인은 동물모델과 in vitro에서 효능 측정방법을 상세하게 리뷰 하고 각 방법에 대해 토의할 것이며, 임상 전 시험 결과를 보고 할 것이다. 그 중 특히 동물 모델은 주름개선 효능물질의 효능을 평가하는데 좋은 대상이 될 것이다.
Objective: To find out ways of improving fermentation quality of silage, the comparative analysis of fermentation characteristics and in vitro digestibility of tropical grasses silage applied with cellulases produced from Acremonium or Tricoderma species were studied in Thailand. Methods: Fresh and wilted Guinea grass and Napier grass silages were prepared with cellulases from Acremonium (AC) or Trichoderma (TC) at 0.0025%, 0.005%, and 0.01% on a fresh matter (FM), and their fermentation quality, chemical composition and in vitro digestibility were analyzed. Results: All silages of fresh Napier grass were good quality with lower pH, butyric acid, and ammonia nitrogen, but higher lactic acid content than wilted Napier grass and Guinea grass silage. Silages treated with AC 0.01% had the best result in terms of fermentation quality. They also had higher in vitro dry matter digestibility and in vitro organic matter digestibility at 6 and 48 h after incubation than other silages. Silages treated with lower levels at 0.005% or 0.0025% of AC and all levels of TC did not improve silage fermentation. Conclusion: The AC could improve silage fermentation and in vitro degradation of Guinea grass and Napier grass silages, and the suitable addition ration is 0.01% (73.5 U) of FM for tropical silage preparation.
가열 및 동결저장이 오징어, 굴, 새우 및 명태의 in vitro 소화율과 trypsin indigestible substrate (TIS) 함량 변화에 미치는 영향을 실험한 결과는 다음과 같다. Boiling 했을 때 최고의 운 in vitro 소화율을 나타내는 시간은 오징어 1분, 내장을 제거한 굴 0.5분, 내장을 제거하지 않은 굴은 1분이었고, 명태는 5분 이었으며, 오징어와 굴은 부위에 따라 소화율은 다르게 나타났다. 최고의 in vitro 소화율을 나타내는 steaming 조건은 오징어는 $100^{\circ}C$에서 1분, 굴은 $88^{\circ}C$에서 1분이었으며, 명태는 $100^{\circ}C$에서 $1{\sim}2.5$분이었다. TIS는 진시료에서 in vitro 소화율과 역상관관계를 가지며 변화하였다. 동결건조한 시료가 다른 건조품보다 현저하게 높은 in vitro 소화율을 보였으나, 내장을 제거했거나 지방함량이 낮은 시료를 천일건조했을 때도 동결건조시료에 버금가는 in vitro 소화율을 나타내었다. 동결저장은 지방함량이 낮은 시료의 in vitro 소화율의 저하 및 TIS함량 증가에 효과적이었으나, 지방함량이 높아 산패가 심하게 진행된 시료에는 현저한 효과를 볼 수 없었다. 지방함량은 수산식품단백질을 가열처리했거나 저장했을 때의 소화율 변화에 결정적인 영향을 미침을 알 수 있었으며, 4가지의 효소를 이용한 multi-enzyme digestion technique은 수산식품단백질의 소화율 변화를 측정함에 있어 아주 민감하고 유용한 방법으로 판명되었다.
다시마 fucoidan의 식이섬유로서의 생리기능성 탐색연구의 일환으로, 다시마의 건조 분말로부터 fucoidan을 열수 추출하여 분리하고 부분정제하였으며, 이의 in-vitro 포도당 및 담즙산 흡수 지연 효과를 조사하였다. 다시마 fucoidan은 투석막을 이용한 2시간 동안의 in-vitro glucose 및 bile acid 흡수 지연 실험에서 각각 25.36$\sim$22.68% 및 27.03$\sim$33.50%의 흡수지연효과를 나타내었다. 이들 효과는 타 식이섬유와 비교하여 비교적 우수하거나 매우 우수한 효과로, 어느 정도 당뇨 및 동맥경화 억제에의 효과를 나타낼 것이 기대되어 추가 검토의 필요성이 높았다.
The in vitro activities of DA-074, a new cephalosporin against 34 various standard strains and its in vivo efficacies against 6 important strains were obtained. DA-074 showed two fold enhanced in vitro antibacterial activity against some Pseudomonas aeruginosa compared to Ceftazidime and more than 2 fold in vivo efficacy against Staphylococcus aureus Smith, Klebsiella pneumoniae 1 and Escherichia coli KC-14, compared to Cefpirome. DA-074 might be a good candidate for further evaluations.
There have been intensive attempts to establish reliable methods far in vitro production (IVP) methods for of porcine embryos. Although a great deal of progress has been made, our current IVP systems still need to be improved. In this review, we focused on studies about in vitro maturation and fertilization (IVM-IVF) of porcine oocytes and their in vitro culture (IVC), especially on an excellent piglets production system using modified IVP system producing porcine blastocysts with high Quality.
현재는 재조합 Erythropoietin의 생물학적 활성을 mouse를 이용한 in vivo bioassay로 실시하고 있으나, 이 방법의 여러가서 불편함으로 인하여, 이를 대체하기 위해 Ba/F3 세포주를 이용한 in vitro assay 방법을 확립하였으나, 위에 상술한 바와 같이 in vitro assay는 erythropoietin의 당분포에 의한 차이를 보이지 않게 때문에, 이를 보완하기 위해서는 in vivo bio-activity와 정량적인 상관관계가 있는 당단백질의 isoform 분석법인 Capillary zone electrophoresis (CZE) 와 sialic acid 함량 결과를 동시에 분석해야 했다. 위의 결과 sialic acid 함량은 erythropoietin 원액에서 10 mol/mol,EPO 이상의 sialic acid 함량을 가져야 되며, CZE 결과는 재조합 erythropoietin이 isoform 분포가 isoform 3의 경우 5.594~0.593%, isoform 4의 경우 31.598~11.704%, isoform 5의 경우 37.033~29.301%, isoform 6의 경우 27.837~18.807%, isoform 7의 경우 17.085~7.824%, isoform 8의 경우 7.642~1.964%을 보여줌과 동시에 isoform 4의 면적은 isoform 5의 면적보다 항상 작아야한다. 이상 두 가지 시험결과와 in vitro assay 결과를 combine해서 in vivo assay를 대체할 수 있다는 좋은 실험적 data를 얻었으므로 이상 위의 3가지 분석법을 활용한 combined in vitro bioassay 법의 기초를 확립하였다.
In order to develop a desirable in vitro release which correlates well with in vivo bioavailability, hollow type suppository containing Propranolol HCl(PPH) powder in the cavity and conventional type suppository with dispersed PPH in the base were prepared. Polyvinyl alcohol (PVA) hydrogel as a base and PPH as a model drug were used for the preparation of suppository. The rates of drug release from the suppositories were studied by Paddle method, Muranish method, Dialysis tubing method and Rotating dialysis cell method. The release profiles from suppositories using the four different release tests were compared. After a rectal administration in rat, the mean $C_{max}$ of hollow type suppository was significantly lower than that of conventional type, but $T_{max}$, $AUC_{0{\to}12}$ and MRT of hollow type were significantly higher 1.6 times, 1.2 times and 1.9 times than those of conventional type, respectively. The computer program was used to simulate plasma concentration from in vitro released amounts of drug and in vivo pharmacokinetic parameters. Based on comparison of the simulated bioavailability from computer program with experimental bioavailability in rat we have found out in vitro release test which correlates well with in vivo bioavailability. Our results have shown the best correlation between in vitro release and in vivo bioavailability in PPH-PVA hydrogel hollow type suppository for the paddle method and conventional type suppository for the rotating dialysis cell method. In this work we propose that PPH-PVA hydrogel suppository shows in vitro-in vivo correlation. This data should help to optimize the formulation of the drug and provide a basis for quality control procedures.
Adaptive development of early stage embryo is well established and recently it is explored that the mammalian embryos also have adaptive ability to the stressful environment. However, the mechanisms are largely unknown. In this study, to evaluate the possible role of aquaporin in early embryo developmental adaptation, the expression of aquaporin (AQP) 5 gene which is detected during early development were examined by the environmental condition. To compare expression patterns between in vivo and in vitro, we conducted quantitative RT-PCR and analyzed localization of the AQP5 by whole mount immunofluorescence. At in vivo condition, Aqp5 expressed in oocyte and in all the stages of preimplantation embryo. It showed peak at 2-cell stage and decreased continuously until morula stage. At in vitro condition, Aqp5 expression pattern was similar with in vivo embryos. It expressed both at embryonic genome activation phase and second mid-preimplantation gene activation phase, but the fold changes were modified between in vivo embryos and in vitro embryos. During in vivo development, AQP5 was mainly localized in apical membrane of blastomeres of 4-cell and 8-cell stage embryos, and then it was localized in cytoplasm. However, the main localization area of AQP5 was dramatically shifted after 8-cell stage from cytoplasm to nucleus by in vitro development. Those results explore the modification of Aqp5 expression levels and location of its final products by in vitro culture. It suggests that expression of Aqp5 and the roles of AQP5 in homeostasis can be modulated by in vitro culture, and that early stage embryos can develop successfully by themselves adapting to their condition through modulation of the specific gene expression and localization.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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