When subjected to hyperosmotic pressure by NaCl addition, H69K-NGD transfectoma, like KR12H-2 transfectoma, displayed decreased specific growth rate (${\mu}$) and increased specific antibody productivity ($q_{Ab}$): Elevation of medium osmolality from 280 mOsm/kg to 415 mOsm/kg decreased ${\mu}$ by $79\%$ in batch cultures of H69K-NGD transfectoma, while it increased $q_{Ab}$ by $103\%$. However, unlike KR12H-2 tranfectoma, enhanced $q_{Ab}$ of H69K-NGD transfectoma at hyperosmolalities was not due to elevated levels of Ig mRNAs. In hyperosmotic cultures of H69K-NGD transfectoma, heavy-chain mRNA per cell was not enhanced with increasing osmolality. Hyperosmotic pressure was found to preferentially enhance immunoglobulin (Ig) translation rates of H69K-NGD transfectoma. However, under hyperosmotic pressure, the translation rate of Ig polypeptides was not enhanced as much as $q_{Ab}$. This result suggests that hyperosmotic pressure also influences the post-translational process. Taken together, the results obtained show that intracellular response of transfectomas to hyperosmotic pressure, in regard to the main intracellular steps of the antibody secretory pathway, is cell-line dependent.
Babaei, Arash;Zarkesh-Esfahani, Sayyed Hamid;Gharagozloo, Marjan
Journal of Microbiology and Biotechnology
/
v.21
no.5
/
pp.529-535
/
2011
Single-chain variable fragment (scFv) is a fusion protein of the variable regions of the heavy (VH) and light (VL) chains of immunoglobulin, connected with a short linker peptide of 10 to about 20 amino acids. In this study, the scFv of a monoclonal antibody against the third domain of human CD4 was cloned from OKT4 hybridoma cells using the phage display technique and produced in E. coli. The expression, production, and purification of anti-CD4 scFv were tested using SDS-PAGE and Western blot, and the specificity of anti-CD4 scFv was examined using ELISA. A 31 kDa recombinant anti-CD4 scFv was expressed and produced in bacteria, which was confirmed by SDS-PAGE and Western blot assays. Sequence analysis proved the ScFv structure of the construct. It was able to bind to CD4 in quality ELISA assay. The canonical structure of anti-CD4 scFv antibody was obtained using the SWISS_MODEL bioinformatics tool for comparing with the scFv general structure. To the best of our knowledge, this is the first report for generating scFv against human CD4 antigen. Engineered anti-CD4 scFv could be used in immunological studies, including fluorochrome conjugation, bispecific antibody production, bifunctional protein synthesis, and other genetic engineering manipulations. Since the binding site of our product is domain 3 (D3) of the CD4 molecule and different from the CD4 immunological main domain, including D1 and D2, further studies are needed to evaluate the anti-CD4 scFv potential for diagnostic and therapeutic applications.
Serum immunoglobulins (Igs) from Israeli carp were purified using affinity chromatography. Fish were immunized with purified mouse IgG, and the specific fish antibodies were purified from the immune serum on a mouse IgG-immobilized agarose gel. Rabbit anti-Israeli carp Igs (R $\alpha$ I. carp Igs) antibodies were produced following hyperimmunization with mouse IgG specific carp antibodies. SDS-PAGE analysis under reducing condition showed that Israeli carp Igs were composed of two $\mu$-like heavy chains with about 82 and 50 kd, respectively, and one light chain with about 25 kd. On immunoblotting analysis, however, R $\alpha$ I. carp Igs failed to react with the light chain. When both protein A and protein G-purified normal carp Ig were compared with mouse IgG-specific Israeli carp Ig, no significant structural differences among them were observed. To investigate if there is any homology between other fish Ig molecules, cross-reactivity of R $\alpha$ I. carp Igs against Ig molecules from 6 different fish sera and mouse control serum was checked on immunoblotting analysis. As a result, R $\alpha$ I. carp Igs responded to Israeli carp, common carp, and tilapia Ig molecules. In flow cytometry study, however, R $\alpha$ I. carp Igs appeared to recognize 42.0%, 35.8% and <5% of Israeli carp, common carp and tilapia $Ig^+$ head kidney cells, respectively. The result suggests the heterogeneity between receptor Igs on B-like lymphocytes and soluble Igs in serum. It is crucial to obtain pure fish Igs to produce reagent antibodies as tools for the study on their specific immune responses.
Cho, Ha Ra;Jin, Sung Giu;Park, Jun Seo;Kim, Han Sol;Choi, Yong Seok
Mass Spectrometry Letters
/
v.8
no.4
/
pp.114-118
/
2017
While saliva can be considered as good biological fluid for monitoring biomarkers due to many advantages including its communication with blood and the non-invasive nature during its sampling, its applications to that purpose is still limited. As a part of efforts to expand the applications of saliva to the protein biomarker research, we carried out global absolute quantitation of proteins in human whole saliva (WS) by bottom-up proteomics techniques mainly based on nLC-Q-IMS-TOF employing $MS^E$. From the analyses of a pooled WS sample collected from 22 healthy Korean volunteers, 93 proteins ranging from $5.89{\times}10^1ng/mL$ (immunoglobulin heavy chain) to $1.59{\times}10^4ng/mL$ (${\alpha}-amylase$ 1) were confirmed. For the validation of the present results, human serum albumin in the same sample was quantitated by ELISA and its result was compared with that from the nLC-Q-IMS-TOF study. As a result, there was no significant difference between two results from individual approaches ($1.18{\times}10^4{\pm}0.03{\times}10^4 ng/mL$ from nLC-Q-IMS-TOF experiments vs. $1.23{\times}10^4{\pm}0.07{\times}10^4ng/mL$ from ELISA experiments, n=3, p=0.309). To our knowledge, this is the first global absolute quantitation of proteins in human whole saliva and information from the present study can be widely used as the first level reference for the discovery of new protein biomarkers from human whole saliva as well as for quantitative applications of human whole saliva proteins.
Changes in stress-associated biomolecules can be used as an important criterion for assessing the levels of environmental pollution because living organisms demonstrate contamination-stimulated stress responses. This study was conducted to determine the environmental status of Masan-Jinhae Bay, Korea, and its effects on marine organisms by investigating the endoplasmic reticulum (ER) dysfunction in the organs of the flat fish, Limanda yokohamae. ER dysfunction was evaluated via Western blot analysis of the ER stress proteins, immunoglobulin heavy chain binding protein (BiP) and C/EBP-homologous protein (CHOP), and the ER stress-associated protein caspase-12. The results showed that the amount of BiP and CHOP immunoreactivity in the flat fish from the bay area was much greater than that from the Gangneung, as a reference site. Similar to the ER stress proteins, the immunoreactivity of caspase-12 was also found to be elevated in the bay area when compared with that of Gangneung. These data suggest that the environmental status of Masan-Jinhae Bay induces the ER stress response, which is able to lead to phenotypic changes in marine organisms including fish.
Kim, Yesol;Shukla, Shruti;Ahmed, Maruf;Son, Seokmin;Kim, Myunghee;Oh, Sejong
Food Science of Animal Resources
/
v.32
no.6
/
pp.706-712
/
2012
The present study was aimed to produce a chicken polyclonal antibody against Cronobacter muytjensii and to develop an immunoassay for its detection. Purification of anti-C. muytjensii IgY from egg yolk was accomplished using various methods such as water dilution and salt precipitation. As a result, sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis produced two bands around 30 and 66 kDa, corresponding to a light and a heavy chain, respectively. Indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (IC-ELISA) was performed to determine the effectiveness of the chicken IgY against C. muytjensii. The optimum conditions for detecting C. muytjensii by indirect ELISA and checkerboard titration of the antigen revealed an optimum average absorbance at the concentration of 18 ${\mu}g/mL$, having ca. $10^8$ coated cells per well. The anti-C. muytjensii IgY antibody had high specificity for C. muytjensii and low cross-reactivity with other tested pathogens. In this assay, no cross-reactivity was observed with the other genera of pathogenic bacteria including Escherichia coli O157:H7, Salmonella Typhimurium, Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, Enterobacter aerogenes, Salmonella Enteritidis and Listeria monocytogenes. In addition, detection of C. muytjensii in infant formula powder showed a low matrix effect on the detection curve of IC-ELISA for C. muytjensii, with similar detection limit of $10^5$ CFU/mL as shown in standard curve. These findings demonstrate that the developed method is able to detect C. muytjensii in infant formula powder. Due to the stable antibody supply without sacrificing animals, this IgY can have wide applications for the rapid and accurate detection of C. muytjensii in dairy foods samples.
Tumor necrosis factor-$\alpha$ (TNF-$\alpha$) and lymphotoxin-$\alpha$ (LT-$\alpha$, TNF-$\beta$) can initiate and perpetuate human diseases such as multiple sclerosis (MS), rheumatoid arthritis (RA), and insulin-dependent diabetes mellitus (IDDM). TNFs can be blocked by the use of soluble TNF receptors. However, since monomeric soluble receptors generally exhibit low affinity or function as agonists, the use of monomeric soluble receptors has been limited in the case of cytokines such as TNF-$\alpha$, TNF-$\alpha$, interleukin (IL)-1, IL-4, IL-6, and IL-13, which have adapted to a multi component receptor system. For these reasons, very high-affinity inhibitors were created for the purpose of a TNFs antagonist to bind the TNFR and trigger cellular signal by using the multistep polymerase chain reaction method. First, recombinant simple TNFR-Ig fusion proteins were constructed from the cDNA sequences encoding the extracellular domain of the human p55 TNFR (CD120a) and the human p75 TNFR (CD120b), which were linked to hinge and constant regions of human $IgG_1$ heavy chain, respectively using complementary primers (CP) encoding the complementary sequences. Then, concatameric TNFR-Ig fusion proteins were constructed using recombinant PCR and a complementary primer base of recombinant simple TNFR-Ig fusion proteins. For high level expression of recombinant fusion proteins, Chinese hamster ovary (CHO) cells were used with a retroviral expression system. The transfected cells produced the simple concatameric TNFR-Ig fusion proteins capable of binding TNF and inactivating it. These soluble versions of simple concantameric TNFR-Ig fusion proteins gave rise to multiple forms such as simple dimers and concatameric homodimers. Simple TNFR-1g fusion proteins were shown to have much more reduced TNF inhibitory activity than concatameric TNFR-Ig fusion proteins. Concatameric TNFR-Ig fusion proteins showed higher affinity than simple TNFR-Ig fusion proteins in a receptor inhibitor binding assay (RIBA). Additionally, concatameric TNFR-Ig fusion proteins were shown to have a progressive effect as a TNF inhibitor compared to the simple TNFR-Ig fusion proteins and conventional TNFR-Fc in cytotoxicity assays, and showed the same results for collagen induced arthritis (CIA) in mice in vivo.
Decalcification is routinely performed to obtain a pathological diagnosis using bone marrow biopsy. During the decalcification process using a conventional acidic solution, such as HCl, the antigenicity of tissue is damaged. Especially DNA and RNA in the bone marrow are impaired. Hence, there is the need for a standardized decalcification protocol that preserves the antigenicity of tissue. To this end, we compared the effects of two commonly used decalcifiers: Commercial decalcifier (Calcl-Clear Rapid, HCl) and the EDTA (12.5%, pH 7.0). Bone marrow biopsies sampled from 71 patients were decalcified in accordance with the protocols of respective groups-HCI versus EDTA. The differences of decalcification protocols were analyzed with respect to Hematoxylin & Eosin staining, Gomori'sreticulum staining, and immunohistochemical staining and molecular analysis. Immunohistochemical staining used Ki-67, CD20 and CD138 as primary antibodies and molecular analysis was conducted through the DNA concentration analysis, in situ hybridization (ISH) and immunoglobulin heavy chain (IGH) gene rearrangement. On the routine histopathology analysis, there was no difference between HCl and EDTA. Moreover, in case of immunohistochemical staining, the cytoplasmic membrane or cytoplasmic CD markers was well preserved. However, nuclear proteins, such as Ki-67, were stained with low quality. Conversely, according to the molecular analysis, the EDTA protocol preserved the DNA and RNA compared with the HCI. The differences of DNA quantity and quality were statistically significant between protocols of HCl and EDTA. We used 38 cases in HCl and 12 cases in EDTA. Consequently, the EDTA protocol maintains the antigenicity of the protein on tissue and is acceptable for examination with molecular base analysis. Decalcification of bone marrow biopsy by EDTA is highly recommended for the examination of immunohistochemical staining and molecular analysis.
Proteins that are unfolded or misfolded in the endoplasmic reticulum (ER) must be targeted for refolding or degradation to maintain the homeostasis of the ER. Derlin-1 was reportedly implicated in the retro-translocation of misfolded proteins from the ER to the cytosol for degradation. In this report, we showed that Derlin-1 was down-regulated in the endothelial cells derived from human hepatic cavernous hemangioma (CHEC) compared with other tested cells. Electron microscopy analysis showed that ER was aberrantly enlarged in CHEC cells, but not in other tested cells. When overexpressed, Derlin-1 induced the dilated ER to return normal size. This ER dynamic was associated with the activation of unfolded protein response (UPR). In CHEC cells where Derlin-1 was down-regulated, increased expression of the immunoglobulin heavy chain-binding protein (Bip) and UPR-specific splicing of X-box DNA-binding protein 1 (XBP1) mRNA were detected, as compared with that in other tested cells, indicating that UPR was activated. After Derlin-1 overexpression, the extent of UPR activation diminished, as evidenced by decreased expression of Bip, reduced amount of the spliced form of XBP1 ($XBP1_S$), and elevated expression of the unspliced form of XBP1 ($XBP1_U$). Taken together, these findings provide another example of a single protein being able to affect ER dynamic in mammalian cells, and an insight into the possible molecular mechanism(s).
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.