본 연구에서는 상지에 배양한 상황버섯 균사체 유래 다당류의 기능성 식품 소재로의 활용 가능성을 확인하기 위해 조다당류의 분리 및 정제를 통해 분획을 얻었으며, 다양한 면역증강 효과를 확인하였다. 건조된 조다당류를 DEAE-sepharose CL-6B를 이용하여 크로마토그래피한 후 340 nm에서의 흡광도, 단백질, 당 및 uronic acid 함량을 분석한 결과, 증류수로 용출되는 비흡착 분획(PF-1, 분획번호 3~15)과 흡착된 후 NaCl 용액에 의해 용출되는 분획(PF-2, 분획번호 24~33)을 얻었다. 분획물 PF-1 및 PF-2의 유용성분 함량으로 총당 함량은 각각 75.51%, 52.38%, 총단백질 함량은 1.63%, 8.41%, uronic acid 함량은 17.53%, 15.04% 및 ${\beta}-glucan$ 함량은 28.33%, 25.04%로 나타났다. PF-1 및 PF-2에 대해 대식세포주에 처리하여 세포생존율을 확인한 결과 $100{\mu}g/mL$ 농도까지 유의적으로 세포사멸이 나타나지 않아 세포독성이 없음을 확인할 수 있었다. Nitric oxide 생성량은 PF-1 $100{\mu}g/mL$에서는 nitric oxide 생성량이 $23.11{\mu}M$로 나타나 양성대조군으로 사용된 LPS 100 ng/mL 처리군($30.30{\mu}M$)의 약 76%의 효과가 있는 것으로 확인되었으며, cytokine 생성량($TNF-{\alpha}$ 및 IL-6) 또한 무처리군에 비하여 높은 생성량을 나타내었다. Polymerase chain reaction을 통한 면역 관련 유전자 발현분석 결과, iNOS, COX-2, $TNF-{\alpha}$, IL-6에서 PF-1 분획에서 높은 발현량을 나타내어 면역 증강을 목적으로 한 기능성 식품 개발에 활용 가능하다고 판단된다.
본 연구에서는 우렁쉥이 껍질 유래 다당류의 기능성식품 소재로의 활용 가능성을 확인하기 위하여 조다당류의 분리 및 정제를 통해 획분을 얻었으며 다양한 면역증강 효과를 확인하였다. 건조된 조다당류를 DEAE-sepharose CL-6B를 이용하여 크로마토그래피한 후 총당 및 uronic acid 함량을 분석한 결과, 증류수로 용출되는 비흡착 획분(APF-I, fraction No. 11~17)과 흡착된 후 NaCl 용액에 의해 용출되는 획분(APF-II, fraction No. 22~37)을 얻었다. 정제된 APF-I 및 APF-II의 이화학적 특성으로 총당 함량은 각각 66.62%, 27.03%, uronic acid 함량은 47.53%, 15.87%, hexosamine 함량은 16.62%, 46.79% 및 단백질 함량은 2.43%, 4.94%로 나타났다. APF-I 및 APF-II에 대해 RAW 264.7 세포에 처리하여 독성을 평가한 결과 $5{\mu}g/mL$ 농도까지 유의적으로 세포사멸이 나타나지 않아 세포독성이 없음을 확인할 수 있었다. Nitric oxide 생산량은 APF-I이 $5{\mu}g/mL$ 농도에서 $22.23{\mu}m$ 함량을 나타내어 LPS 대비 73.48%로 타 구간에 비해 높은 생성량을 나타내었으며, cytokine 생성량(TNF-${\alpha}$ 및 IL-6) 또한 APF-I $5{\mu}g/mL$ 농도에서 각각 LPS 대비 104%, 100.1%를 나타내어 LPS와 유사한 생성량을 나타내었다. Polymerase chain reaction을 통한 면역관련 유전자 발현 분석 결과, iNOS, COX-2, TNF-${\alpha}$, IL-6에서 APF-I 구간에서 LPS 처리군 보다 높은 발현량을 나타내어 면역증강을 목적으로 한 기능성식품 개발에 활용 가능하다고 사료된다.
림프절은 이차성 면역기관중 하나이다. 림프절은 복잡한 3차원적 뼈대 구조물과 스트로마 세포로 구성되어 있다. Fibroblastic reticular cells (FRC)는 T세포와 상호작용을 위해 T zone에 주로 분포하고 있는 세포이다. FRC는 CCL21, CCL19같은 홍밍유도 케모카인을 분비하거나 감염에 대비하여 림프절 세포외기질 형성에 중요한 역할을 한다. 하지만, FRC가 직접 면역반응에 관여하는지에 대하여 많이 알려져 있지 않다. 본 연구는 면역반응에 대한 FRC의 특성 규명에 대한 것이다. 이를 위해 FRC와 대식세포의 공배양, lipopolysaccharide (LPS), TNFα 자극에 노출시켜 반응성을 조사하였다. FRC와 대식세포를 공배양 하였을 때 FRC의 형태적 변화가 유도 되었고 이로 인해 FRC가 빈 공간이 형성되는 것을 확인하였다. 용해성 ICAM-1 (sICAM-1)의 발현량이 대식세포와 ROCK 저해제, Y27632를 처리 했을 경우 증가하는 것을 단백질 수준에서 확인하였다. Matrix metalloproteinase (MMP) 활성이 LPS를 처리한 FRC에서 반응시간 의존적으로 증가하는 것을 확인하였다. 더욱이, 세포외기질에 대하여 염증물질인 TNFα를 처리 했을 경우 조절되는 것을 gene chip assay를 통해서 확인하였다. 이상의 결과는 FRC가 면역반응에 직접 관여하고 있다는 것을 의미하며 이는 림프절 스트로마도 면역반응에 관여하고 있는 것으로 사료된다.
Objective : This study was performed to evaluate the effect of immune reaction inductive substances such as phorbol-myristate-acetate(PMA), lipopolysaccharide(LPS), dermato-phagoides pteronyssus crude extract(DPE), dinitrochloro-benzene(DNCB) and Cryptotympana pustulata(CP), the Cryptotympana pustulata extracting substance at simultaneously on the translocation of nuclear factor-kappa B(NF-${\kappa}B$) towards to the nucleus and the mRNA expression patterns of various cytokine genes in Human acute monocytic leukemia cell line(THP-1 cells), monocytes of human. Experiment : To analyze cytokine genes expression patterns, the RT-PCR method was used, measuring tumor necrosis factor(TNF)-$\alpha$ that had been secreted during cell culture in the ELISA method. The morphological change in the cell observed during THP-1 cell culture was observed using a scanning electron microscope (SEM) and the quantitative distribution in the cell NF-${\kappa}B$ was analyzed through immunocytochemistry and a confocal microscopy. Result : CP showed different influences onto the mRNA expression patterns of cytokine genes with PMA, LPS. DPE and DNCB according to the types of immune inductive substances in the THP-1 cells. The expressions of inter-leukin(IL)-10, interferon(INF)-$\gamma$, TNF-$\alpha$ and monocyte chemoattractantant protein(MCP)-1 induced by PMA were suppressed by CP while the expression of transforming growth factor(TGF)-$\beta$ was promoted. Regarding the secretion pattern of TNF-$\alpha$ according to PMA processing, its secretion amount was increased by CP concurrent processing, in case of processing CP onto PMA and LPS, We discovered that the secretion amount of TNF-$\alpha$ was increased. Upon processing PMA and LPS on the THP-1 cell strain at the same time or either additionally processing CP thereon, the movement increase towards the nucleus from the NF-${\kappa}B$ cell cytoplasm, a transcription factor was able to be observed. Conclusion : In this study, Cryptotympana pustulata extracting substance was confirmed that it had an influence on expression patterns of cytokine genes according to the actions of a variety kinds of immune reaction inductive substances processed on the monocyte THP-1 cell of humans. Therefore, additional studies as for the immune adjusting function of Cryptotympana pustulata are considered to be able to offer important materials for curing immune abnormal diseases such as atopy dermatitis afterward.
Background: Korean Red Ginseng (KRG; Panax ginseng Meyer) is a widely used medicinal herb known to exert various immune modulatory functions. KRG and one of its purified components, ginsenoside Rg3, are known to possess anti-inflammatory activities. How they impact helper T cell-mediated responses is not fully explored. In this study, we attempted to evaluate the effect of KRG extract (KRGE) and ginsenoside Rg3 on Th1 cell responses. Methods: Using well-characterized T cell in vitro differentiation systems, we examined the effects of KRGE or enhanced Rg3 on the Th1-inducing cytokine production from dendritic cells (DC) and the naïve $CD4^+$ T cells differentiation to Th1 cells. Furthermore, we examined the change of Th1 cell population in the intestine after treatment of enhanced Rg3. The influence of KRGE or enhanced Rg3 on Th1 cell differentiation was evaluated by fluorescence-activated cell sorting, enzyme-linked immunosorbent assay, and quantitative real-time polymerase chain reaction. Results: KRGE significantly inhibited the production level of IL-12 from DCs and subsequent Th1 cell differentiation. Similarly, enhanced Rg3 significantly suppressed the expression of interferon gamma ($IFN{\gamma}$) and T-bet in T cells under Th1-skewing condition. Consistent with these effects in vitro, oral administration of enhanced Rg3 suppressed the frequency of Th1 cells in the Peyer's patch and lamina propria cells in vivo. Conclusion: Enhanced Rg3 negatively regulates the differentiation of Th1 cell in vitro and Th1 cell responses in the gut in vivo, providing fundamental basis for the use of this agent to treat Th1-related diseases.
Objective: This study was carried out to evaluate the inhibitory effect on immme hypersensitive reaction by Yangdokbackhotang extract. methods: To study, We divided 4 weeks old rats into three groups of 20, which are the constrasive group with nothing treated, the skin transplated only, and the Yangdokbackhotang extract fed before skin transplantation. And did the experiment. Results: 1. The ear swelling in mice treated with YB noticeably decreased than only DNCB treated mice. 2. As shown in Table3, also results in a significant decrease of YB group than ST group in the number of positive cells of $NF-{\kappa}B$, COX-2, IL-12B, and ICAM-1. From the above results, it could be concluded that Yangdokbackhotang showed benificial immunosupressive effect on the hypersensitive reaction.
Pathogenesis of experimental allergic encephalomyelitis was involved with infection, inflammatory reaction, immune reaction etc. We studied on relation of blood vessel system and EAE. So, we measured blood pressure, heart rate and relaxation of isolated blood vessel in control and EAE-induced lewis rats. Blood pressure was decreased before EAE clinical sign (0-20day), but was increased from 23day. In isolated blood vessel, acetylcholine-treated relaxation was different on control, maximum EAE stage, recovery stage. Acetylcholine-treated relaxation was reduced 30% in recovery stage. but, sodium nitroprusside had similar relaxation reaction.
Immediate-type hypersensitivity is involved in many allergic diseases such as asthma, allergic rhinitis and anaphylaxis. The discovery of drugs for the treatment of allergic disease is an important subject in human health. Stimulation of mast cells releases inflammatory mediators, such as histamine and pro-inflammatory cytokines with immune regulatory properties. We investigated the effect of the aqueous extract of Schizonepeta tenuifolia (AEST) (Labiatae) on the immediate-type allergic reaction. AEST inhibited compound 48/80-induced systemic allergic reaction. AEST attenuated immunoglobulin E (IgE)-mediated skin allergic reaction and histamine release from human mast cell line (HMC-1) cells. In addition, AEST decreased the gene expression and secretion of pro-inflammatory cytokines in phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) plus calcium ionophore A23187 (A23187)-stimulated HMC-1 cells. Our results indicate that AEST inhibits the mast cell-derived allergic reactions and involvement of histamine and pro-inflammatory cytokines in these effects.
The effect of biphenyl dimethyl dicarboxylate (PMC) on the cellular and nonspecific immunosuppressions by ketoconazole (KCZ) was investigated in ICR mice. PMC at a dose of 6 mg/kg was administered orally to mice daily for 14 consecutive days. KCZ was suspended in RPMI 1640 medium and orally administered at 160 mg/kg/day 2 hrs after the administration of PMC. Immune responses of the delayed-type hypersensitively (DTH) reaction to sheep red blood cells (SRBC), phagocytic activity and natural killer (NK) cell activity were evaluated. DTH reaction to SRBC was enhanced to normal level by the combination of PMC and KCZ, as compared with treatment of KCZ alone. In the combination of PMC and KCZ, as compared with treatment of KCZ alone, there were also significant increases in activities of natural killer (NK) cells and phagocytes along with circulating leukocytes. These findings indicate that PMC shows a significant restoration from the immunotoixc status induced by KCZ.
An immunoelectron microscopy employing immunogold labeling method was performed to detect tissue origin of Dl fraction (DIA) among 5 antigenic protein fractions partially purified by DEAE- anion exchange chromatography from water- soluble crude antigen (PIWA) of adult Paragonimus iloktsuenensis. Immune reactions of adult worm tissues with rabbit serum immunoglobulin immunized with crude antigen (PI-Ig) and D1 antigen (D1-Ig), as well as rat serum immunoglobulin infected with P. iloktsuenensis were observed. DlA showed strong antigenicity in the intestinal epithelium of the worms during the early infection period of 2-4 weeks after infection. The vitellaria also showed stronger antigenicity than the other tissue sites in immune reaction of tissues against all immunoglobulins from 4 to 33 weeks after vitelline development. Therefore, it is suggested that DlA was mainly originated from the intestinal epithelial tissues before the development of vitelline gland of the parasites. Immune-reactivity of two immunoglobulins (PI-Ig, Dl-Ig) was significantly different in intestinal epithelial cytoplasmic protrusions (CP) and intestinal epithelial secretory granules (SG). In the experimental group with Dl-Ig, gold particles were labeled significantly in CP than in SG when compared to the PI-Ig group. Thus, the major antigenic materials in Dl antigen having a strong antigenicity in the early infection period was considered to be originated from the intestinal epithelial tissue .
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[게시일 2004년 10월 1일]
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