Potato virus X (PVX-KO) showing mild mosaic and stunting symptoms on potato (Solanum tuberosum) in Kangwon area has been isolated and characterized. EM observation of the purified virus particles showed flexuous rod shape of about 520 nm in length. The coat protein (CP) of the virus had a molecular weight of 31 kDa in SDS-PAGE analysis, and the viral RNA was approximately 6.4 kb in size in denatured agarose gel electro-phoresis. In gel-immunodiffusion tests, it reacted strongly with an antiserum to common PVX from BIOREABAAG (USA). A rabbit antiserum was produced using purified virus and used for routine PVX detection by ELISA. Cultivated potatoes in Kangwon and other areas were frequently infected with PVX-KO. Both Datura stramonium and Nicotiana tabaccum cultivars developed necrotic local lesions 5 days after inoculation, and systemic mosaic symptoms with vein clearing 2 weeks after inoculation. All the features agree with the description of other PVX strains. To confirm and determine PVX strains, reverse transcription-polymerase chain reaction experiment was conducted using specific primers for viral CP. Amplified DNA fragments were cloned and sequenced. Results showed nucleotide sequence homologies of about 88 to 99% to other PVX strains. Based on CP amino acid sequence deduced from nucleotide sequences and host range studies PVX-KO is considered a member of the type X subgroup of PVX.
Jiang, Ming Feng;Hu, Ming Jun;Ren, Hong Hui;Wang, Li
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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제28권12호
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pp.1774-1783
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2015
Milk lysozyme is the ubiquitous enzyme in milk of mammals. In this study, the cDNA sequence of a new chicken-type (c-type) milk lysozyme gene (YML), was cloned from yak mammary gland tissue. A 444 bp open reading frames, which encodes 148 amino acids (16.54 kDa) with a signal peptide of 18 amino acids, was sequenced. Further analysis indicated that the nucleic acid and amino acid sequences identities between yak and cow milk lysozyme were 89.04% and 80.41%, respectively. Recombinant yak milk lysozyme (rYML) was produced by Escherichia coli BL21 and Pichia pastoris X33. The highest lysozyme activity was detected for heterologous protein rYML5 (M = 1,864.24 U/mg, SD = 25.75) which was expressed in P. pastoris with expression vector $pPICZ{\alpha}A$ and it clearly inhibited growth of Staphylococcus aureus. Result of the YML gene expression using quantitative polymerase chain reaction showed that the YML gene was up-regulated to maximum at 30 day postpartum, that is, comparatively high YML can be found in initial milk production. The phylogenetic tree indicated that the amino acid sequence was similar to cow kidney lysozyme, which implied that the YML may have diverged from a different ancestor gene such as cow mammary glands. In our study, we suggest that YML be a new c-type lysozyme expressed in yak mammary glands that plays a role as host immunity.
우리나라에 발병하고 있는 생강모자이크 바이러스병의 기생범위, 물리화학적 성질, 혈청검정 및 전자현미경적 관찰을 조사하였다. 생강의 초기병징은 황록반문을 일으키고 후기에는 위축현상 및 괴경의 소구화를 이룬다. 포장이병율은 약 $43\%$이었다. 즙액전염, 접구전염(core grafting)이 이루어지며, 동부, 오이 Chenopodium amaranticolar, N. tabaccum var. Havana를 비롯하여 23종의 CMV감수성 식물에 병증을 나타낸다. 희석한계점은 $10^{-4}\~10^{-5}$ 범위이고, 온도한계활성점는 $65\~70^{\circ}C$사이이다. 혈청반응은 CMV 항혈청과 양성으로 나타난다. 전자현미경에 의한 바이러스립자의 크기는 $28\~32m\mu$의 구형이다. 이병엽육조직의 세포질 속에는 구형바이러스입자의 밀집상과 유리되어 있는 입자도 관찰되었다. 이상을 종합하여 볼 때 생강에 모자이크병을 일으키는 바이러스는 CMV군에 속하는 바이러스로 믿어진다.
A cell-based assay system for monitoring NF-$textsc{k}$B activity was developed to determine the influence of activated NF-$textsc{k}$B in human HaCaT cells. The pNF-$textsc{k}$B-SEAP-NPT plasmid that permits expression of the secreted alkaline phosphatase (SEAP) reported gene in response to the NF-$textsc{k}$B activity and contains neomycin phosphotransferase (NPT) gene for the geneticin resistance in host cells was constructed and transfected into human keratinocyte cell line HaCaT. Human HaCaT transfectant cells secreted the SEAP enzyme into the culture medium in a time-dependent manner until 72h. NF-$textsc{k}$B activities were measured in the SEAP reporter gene assay using a fluorescent detection method. The treatment of HaCaT cell transfectants with known antioxidants [e.g., N-acetyl-L-cysteine and vitamin C] showed inhibition of NF-$textsc{k}$B activity in a time-and concentration-dependent manner. The phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) known as a stimulator of NF-$textsc{k}$B expression demonstrated that it increased NF-$textsc{k}$B activity in a time- and concentration-dependent manner. This assay system could be used to determine the quantitative measurement of NF-$textsc{k}$B activity in the human skin and allow the screening of anti-inflammatory agents from various synthetic chemicals and natural products for dermatological purpose. Abbrevitions used: NF-$textsc{k}$B, nuclear factor kappa B; I-$textsc{k}$B, Inhibitory kappa B; SEAP, secreted alkaline phosphatase; NPT, neomycin phosphotransferease; PCR, polymerase chain reaction: dNTP, deoxynucleoside triphosphates; DMEM, dulbecco’s modified eagle medium; FBS, fetal bovine serum; PBs, phosphate-buffered saline; MUP, 4-methylumbellifery phosphate; NAC, N-acetyl-L-cysteine; DMSO, dimethyl sulfoxide; PMA, phorbol 12-myristate 13-acetate.
Citrus canker disease is caused by bacteria Xanthomonas axonopodis .pv. Citri. Shiranuhi cultivar, a hybrid of Kiyomi tangor and Nakano No.3 ponkan was evaluated for resistance to citrus canker based on initiation of disease, percent area of lesion infected and growth rate of bacteria in the leaf under growth chamber condition. Significant differences between susceptible plant and resistant plants were observed in these assays. Resistant plants showed delayed disease symptoms compared to the susceptible plants after spray inoculation of the pathogen. The resistant verities, satsuma, yuzu, and Shiranuhi showed symptoms after six days where as susceptible, mexican lime showed the symptoms just after three days of inoculation. 18 days after inoculation, percent area of lesions developed on leaf and disease severity differed significantly in susceptible and resistant plants, and were ranked as follows: mexican lime > early satsuma =Shiranuhi =yuzu (P <, 0.01). However, 30 days after inoculation, percent area of lesion was further differentiated into resistant and highly resistant plants. That was ranked as follows: sweet orange> early satsuma =Shiranuhi =Kiyomi > yuzu (P < 0.01). These results indicate that host reaction to the bacterial was more distinct when the disease developed for a longer period. Growth rates of a citrus canker bacterium during 16 40 h also were distinct after infiltration into leaves of susceptible and resistant plants, and were ranked as follows: sweet orange> early satsuma =Shiranuhi =Kiyomi =yuzu (P < 0.01). Based on these results, we concluded that Shiranuhi is resistant to citrus canker as compared to Kiyomi, early satsuma, and yuzu.
참다래 궤양병의 간단하고 효율적인 병원성 검정법을 개발하고자 수행하였다. 이 검정법은 과민성반응(hypersensitive reaction) 검정법을 변형한 것으로 병원균을 50 mM 인산 완충액(pH 7.5)에 현탁하여 5년생 참다래 상위엽에 주사기를 이용하여 엽육세포에 주입하였다. 병징은 접종 2일 후부터 보이기 시작하여 4일후에 판정이 가능하였으며 검정한계 농도는 $10^4$cfu/ml이었다. 주사접종법을 이용하여 25종에 대한 기주범위를 검정하였을 때 병원균과 기주에 따라 여러 가지 병징을 보였다. 이 검정법은 습도와 관계없이 빠르게 병징을 나타내는 효과적인 방법이었다.
콘택트렌즈 보존 용기 유래 가시아메바 KA/LS주의 세포질 내에 존재하는 bacterial endosymbiont(내공생세균)를 투과전자현미경으로 관찰하여 확인하였다. 숙주인 가시아메바 KA/LS주는 형태학적으로 제2군에 속하였고 rDNA PCR-RFLP 결과 A. lugdunensis로 동정되었다. 미토콘드리아 DNA RFLP와 동위효소 분석상 이 충주는 국내 콘택트렌즈 보존용기에서 가장 흔히 분리되는 type인 KA/L1주, 국내 임상 분리주 중 하나인 KA/E2주, 내공생세균을 가지는 것으로 보고된 병원 냉각수 유래 KA/W4주 및 L3a주와 동일하거나 매우 유사한 성적을 보였다. 내 공생세균은 약 $1.38{\;}{\times}{\;}0.50{\;}{\mu\textrm{m}}$의 크기였고, 아메바 세포질 내에 불규칙하게 분포하고 있었으며 그 표면에 아메바의 ribosome이 부착되어 있었다. 내공생세균을 둘러싼 lacunae나 막과 같은 구조는 관찰되지 않았다. Legionoun 특이 primer를 이용한 효소중합반응(PCR)에서 내공생세균의 염색체 DNA는 증폭되지 않았다 A. lugdunensis의 우리말 이름을 담수가시아메바로 제안한다.
We have developed a reliable and high-frequency genetic transformation and regeneration system via somatic embryogensis of Eleutherococcus sessiliflorus. Embryogenic callus obtained from seed were co- cultivated with Agrobacterium tumefaciens strain EHA101/pIG121Hm harboring genes for intron-$\beta$-glucoronidase(GUS), kanamycin and hygromycin resistance. Following co-cultivation, two types of samples(fine embrogenic calli and early globular embryo clusters) were cultivated on Murashige and Skoog(MS) medium containing 1 mg/L2.4-D for 3day in dark. Transient expression of GUS gene was found to be higher in the early globular embryo clusters than in the embryogenic calli. Also, co-cultivated period affected expression of GUS gene; the best result was obtained when globular embryo clusters were co-cultivated with Agrobacterium for 3 days. Subsequently, this callus transferred to selective MS medium containing 1mg/L2.4-D, 50mg/L kanamycin or/and 30mg/L hygromycin and 300mg/L cefortaxime. These embryogenic calls were subcultured to the same selection medium at every 2 weeks intervals. Approximately 24.5% of the early globular embryos co-cultivated with Agrobacterium for 3days produced kanamycin or/and hygromycin-resistant calli. Transgenic somatic embryos were converted into plantlets in half strength MS medium supplemented with 3mg/L GA$_3$ kanamycin and were confirmed by GUS histochemical assay and polymerase chain reaction analysis. Genomic Southem blot hybridization confirmed the incorporation of NPT II gene into the host genome.
Background: Cyclosporine is an immunosuppressive agent used to treat and prevent graft versus host reaction (GVHR)-a complication associated with stem cell transplantation. This study aimed to develop a population pharmacokinetic model of cyclosporine and investigate factors affecting cyclosporine clearance in pediatric hematopoietic stem cell transplant patients. Methods: A total of 650 cyclosporine concentrations recorded in 65 patients who underwent hematopoietic stem cell transplantation were used. Data including age, sex, weight, height, body surface area (BSA), type of disease, chemotherapy before stem cell transplantation, type of donor, serum creatinine levels, total bilirubin concentration, hematocrit value, and type of concomitant anti-fungal agents and methylprednisolone used were retrospectively collected. Data related to cyclosporine dosage, administration time, and blood concentration were also collected. All data were analyzed using the non-linear mixed effect model; a two-compartment model with first-order elimination was used. Results: The population pharmacokinetic model of cyclosporine using the NONMEM program was as follows: $CL(L/h)=5.9{\times}(BSA/1.2)^{0.9}$, V2 (L) = 54.5, Q (L/h) = 3.5, V3 (L) = 1080.0, $k_a(h^{-1})=0.000377$. BSA was selected as a covariate of cyclosporine clearance, which increased with an increase in BSA. Conclusion: A population pharmacokinetic model for Korean pediatric hematopoietic stem cell transplant patients was developed, and the important factor affecting cyclosporine clearance was found to be BSA. The model might contribute to the development of the most appropriate dosing regimen for cyclosporine. Further studies on population pharmacokinetics should be carried out, prospectively targeting pediatric patients.
The purpose of this research is to develop the lithium secondary battery. This paper describes the preparation, electrochemical properties of nontstoichiometric(NS)-$V_6O_{13}$ and characteristics of Li/$V_6O_{13}$ secondary battery. NS-$V_6O_{13}$ was prepared by thermal decomposition of $NH_4VO_3$ under Ar stream of 140ml/min~180ml/min flow rate. And then, this NS-$V_6O_{13}$ was used for cathode active material. Cathode sheet was prepared by compressing the composite of NS-$V_6O_{13}$, acetylene black(A.B) and teflon emulsion (T.E). Characteristics of the test cell are summarised as follows. Oxidation capacity of NS-$V_6O_{13}$ was about 20% less than its reduction capacity. A part of NS-$V_6O_{13}$ cathode active material showed irreversible reaction in early charge-discharge cycle. This phenomena seems to be caused by irreversible incoporation/discoporation of lithium cation to/from NS-$V_6O_{13}$ host. Discharge characteristics curve of Li/$V_6O_{13}$ cell showed 4 potential plateaus. Charge-discharge capacity was declined in the beginning of cycling and slowly increased in company with increasing of coulombic efficiency. Energy density per weight of $V_6O_{13}$ cathode material was as high as 522Wh/kg~765Wh/kg.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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