T-DNA insertional mutations in Arabidopsis genes have conferred huge benefits to the research community, greatly facilitating gene function analyses. However, the insertion process can cause chromosomal rearrangements. Here, we show an example of a likely rearrangement following T-DNA insertion in the Anti-Silencing Function 1B (ASF1B) gene locus on Arabidopsis chromosome 5, so that the phenotype was not relevant to the gene of interest, ASF1B. ASF1 is a histone H3/H4 chaperone involved in chromatin remodeling in the sporophyte and during reproduction. Plants that were homozygous for mutant alleles asf1a or asf1b were developmentally normal. However, following self-fertilization of double heterozygotes (ASF1A/asf1a ASF1B/asf1b, hereafter AaBb), defects were visible in both male and female gametes. Half of the AaBb and aaBb ovules displayed arrested embryo sacs with functional megaspore identity. Similarly, half of the AaBb and aaBb pollen grains showed centromere defects, resulting in pollen abortion at the bi-cellular stage of the male gametophyte. However, inheritance of the mutant allele in a given gamete did not solely determine the abortion phenotype. Introducing functional ASF1B failed to rescue the AaBb- and aaBb-mediated abortion, suggesting that heterozygosity in the ASF1B gene causes gametophytic defects, rather than the loss of ASF1. The presence of reproductive defects in heterozygous mutants but not in homozygotes, and the characteristic all-or-nothing pollen viability within tetrads, were both indicative of commonly-observed T-DNA-mediated translocation activity for this allele. Our observations reinforce the importance of complementation tests in assigning gene function using reverse genetics.
Fusarium circinatum은 소나무류에 푸사리움 가지마름병을 유발하는 병원균으로 알려져 있다. 본 연구에서는 골프장의 리기다소나무로부터 병원균을 분리하였으며, 이들의 형태적인 특성을 관찰하고 분자생물학적인 방법을 이용하여 동정한 결과 F. circinatum 임을 확인하였다. 특히 histone H3 유전자와 IGS rDNA의 염기서열을 분석한 결과 분리된 균들의 염기서열은 동일하였으며, 유성생식(mating)에 관여하는 유전자를 분석한 결과 모두 MAT1-1 유형임을 확인하였다. 또한 푸사리움 가지마름병에 대한 감수성 수종인 리기다소나무를 비롯하여 저항성 수종인 잣나무와 소나무의 메탄올 추출물을 만들어 이들의 병원균에 대한 항균력을 검정하였다. 그 결과 저항성 수종인 잣나무와 소나무의 추출물에서 리기다소나무 보다 높은 항균력을 확인 하였다.
Most imprinted genes are concerned with embryonic development, especially placental development. Here, we identified a placenta-specific imprinted gene Qpct. Our results show that Qpct is widely expressed during early embryonic development and can be detected in the telecephalon, midbrain, and rhombencephalon at E9.5-E11.5. Moreover, Qpct is strikingly expressed in the brain, lung and liver in E15.5. Expression signals for Qpct achieved a peak at E15.5 during placental development and were only detected in the labyrinth layer in E15.5 placenta. ChIP assay results suggest that the modification of histone H3K4me3 can result in maternal activating of Qpct.
다세포 생물의 유전자들은 발생 및 분화 그리고 조직 특이적으로 전사되며, 이러한 유전자 전사는 게놈 상에서 멀리 떨어져 존재하는 인핸서(enhancer) 부위에 의해 조절된다. 최근의 연구들은 활성화된 인핸서에서 RNA Polymerase II (Pol II)에 의해 noncoding RNA가 전사된다고 보고하고 있으며, 이들은 인핸서 RNA (eRNA)라 불리고 있다. eRNA는 인핸서 중심으로부터 양방향으로 합성되며, 5’ capping은 일어나지만, splicing이나 3’ tailing은 되지 않는다. eRNA의 전사는 전사 활성자의 결합에 의해 일어나며, 표적 유전자의 전사 수준과 비례하게 일어난다. 인위적으로 eRNA의 전사를 억제하거나 합성된 eRNA를 제거하면 표적 유전자의 전사는 억제된다. eRNA의 전사 과정은 인핸서 부분의 활성 히스톤 변형을 유도하며, 합성된 eRNA는 인핸서와 프로모터 사이의 크로마틴 고리 구조 형성을 매개한다. 또한 표적 유전자의 프로모터에 RNA Pol II를 모집하고 이들의 신장을 촉진하는 것도 eRNA의 역할로 보인다. 본 총설은 인핸서 유래 eRNA의 특징에 대해 살펴보고, eRNA의 합성 기작 및 표적 유전자의 전사 조절을 위한 eRNA의 역할을 정리해보고자 한다.
Using the DDRT-PCR, a series of differentially expressed genes in human primary cervical cancer was isolated. Among the 250 PCR amplimers, 88 gene fragments were confirmed by reverse Northern hybridization. Homology searches indicated that 26 out of 88 were previously known genes including calmodulin, human BBC1, histone H3.3, a series of ribosomal proteins (RPL19, RPS19, and RPS12), translation initiation factor (eIF-4AI), lactoferrin, integrin ${\alpha}6$, cell-surface antigens (CD9 and CD59), transcription factor (mbp-1), and mitochondrial proteins. Several unknown clones showed sequence homology with known genes. Furthermore, six of the unknown genes showed identical sequence with expressed sequence tags (EST) of unknown function. Differential expression patterns of identified genes were further examined and confirmed with multiple pairs of cervical cancer samples using Northern hybridization. Our profiling of differentially expressed genes may provide useful information about the underlying genetic alterations in human cervical carcinoma and diagnostic markers for this disease. The precise roles of these genes in cancer development remain to be elucidated.
More than 30 isolates of Alternaria were obtained from various solanaceous crops in Korea. For all isolates, morphological characteristics of the conidia were determined and compared with those of representative isolates of A. solani and A. tomatophila. Pathogenicity test was performed to Potato, tomato, egg plant and red Pepper and molecular characteristics of them including the representative isolates were determined using sequence analyses of ITS rDNA and histone H3 gene, and URP-PCR analysis. Based on morphological characteristics, the isolates from the solanaceous crops were grouped as identical or very similar to either A. tomatophila(ATO), A. solani(ASO), and unidentified Altemaria sp.(ASP). Among the molecular markers used in this study, the URP-PCR analysis was found to be appropriate for taxonomic resolution of these species. Based on the conidial morphology, pathogenicity test and molecular characteristics, A. tomatophila(early blight of tomato) could be distinguished from A. solani(early blight of potato), and the Alternaria sp.(ASP) from potato, which was closely related to A. solani in conidial morphology, was considered as a new species.
강원도 강릉시 사천면 비닐하우스에서 재배중인 호박 과실에 탄저병이 발생하였다. 병든 호박 과실에 분홍색의 분생포자 층이 동심원으로 나타나 점차 확대되어 과실이 무르는 증상을 나타내었다. 원인균을 규명하기 위하여 순수 분리 후 균학적 특성 및 ITS, GAPDH, CHS-1, HIS3, ACT, TUB2 염기서열 분석결과 Colletotrichum fioriniae로 동정하였다. 또한, 병원성이 확인되었고 접종시험에서 동일한 균이 반복적으로 분리되었다. 따라서, 이러한 결과를 바탕으로 C. fioriniae에 의한 호박 과실에 발생하는 탄저병의 발생을 국내 처음으로 보고한다.
담배에서 후성유전관련 유전자의 발현연구를 위해 담배유래 시토신 DNA 탈메틸화 관련 NtROS2a 유전자를 과발현 및 RNAi 식물체를 육성하였다. 이들 형질전환체들은 고염 및 산화 스트레스하에서 내성이 증진되었으며, 다양한 표현형변이를 보였다(Lee et al. 2015). 본연구에서는 선발된 과발현 (OX1), RNAi 식물체(RNAi 13) 및 대조식물체(WT)를 이용하여 Agilent Tobacco 4 X 44K Oligo chip으로 microarray분석을 수행하였다. OX1과 RNAi13 계통을 이용하여 WT과 함께 비교 분석한 결과, 대부분 세포 내 이온 수송, 영양 공급 등과 같은 물질대사와 생물적 비생물적 스트레스 및 methylation과 관련되어 영향을 주는 유전자들에서 up-regulation 되었고, 물질대사관련 유전자와 세포 내 기능유전자의 역할을 담당하는 조효소, 그리고 다양한 스트레스 및 메틸레이션 관련 유전자군에서 또한 down-regulation되었다. 각각의 up-, down-regulation된 유전자들을 WT과 비교하여 qRT-PCR을 수행한 결과, KH domain-containing protein, MADS-box protein 및 Zinc phosphodiesterase ELAC protein 유전자들에서 발현이 높게 나타났으며, 반면에 pentatricopeptide (PPR) repeat-containing protein, histone deacetylase HDAC3 protein 및 protein kinase는 0.4 ~ 1.0-fold 발현양이 감소되었다. 따라서 DNA glycosylase를 암호화하는 NtROS2a 유전자는 demethylation과 관련되어 담배 식물체에서 다양한 전사레벨을 조절하는 것으로 판단된다.
Alternaria leaf blight is one of the most common diseases in watermelon worldwide. In Korea, however, the Alternaria species causing the watermelon leaf blight have not been investigated thoroughly. A total of 16 Alternaria isolates was recovered from diseased watermelon leaves with leaf blight symptoms, which were collected from 14 fields in Korea. Analysis of internal transcribed spacer (ITS) region, glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH), and RNA polymerase II second largest subunit (RPB2) were not competent to differentiate the Alternaria isolates. On the contrary, analysis of amplicon size of the histone H3 (HIS3) gene successfully differentiated the isolates into three Alternaria subgroups, and further sequence analysis of them identified three Alternaria spp. Alternaria tenuissima, A. gaisen, and A. alternata. Representative Alternaria isolates from three species induced dark brown leaf spot lesions on detached watermelon leaves, indicating that A. tenuissima, A. gaisen, and A. alternata are all causal agents of Alternaria leaf blight. Our results indicate that the Alternaria species associated watermelon leaf blight in Korea is more complex than reported previously. This is the first report regarding the population structure of Alternaria species causing watermelon leaf blight in Korea.
Hypoxia induces the expression of several genes through the activation of a master transcription factor, hypoxia-inducible factor (HIF)-1α. This study shows that hypoxia strongly induced the expression of two carboxypeptidases (CP), CPA4 and CPE, in an HIF-1α-dependent manner. The hypoxic induction of CPA4 and CPE gene was accompanied by the recruitment of HIF-1α and upregulation in the active histone modification, H3K4me3, at their promoter regions. The hypoxic responsiveness of CPA4 and CPE genes was observed in human adipocytes, human adipose-derived stem cells, and human primary fibroblasts but not mouse primary adipocyte progenitor cells. CPA4 and CPE have been identified as secreted exopeptidases that degrade and process other secreted proteins and matrix proteins. This finding suggests that hypoxia changes the microenvironment of the obese hypoxic adipose tissue by inducing the expression of not only adipokines but also peptidases such as CPA4 and CPE.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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