Kim, Byong-Kak;Shim, Mi-Ja;Kim, Ha-Won;Woo, Myoung-Sik;Choi, Eung-Chil
Archives of Pharmacal Research
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제10권3호
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pp.179-183
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1987
To investigate antitumor constituents of higher fungi, the carpophores of Polyporus giganteus Pers. ex. Fr. (81 g, dry weight) which were collected in Indiana, U. S. A. were examined for antitumor activity. Two protein-bound-polysaccharide fractions (I and II) were prepared from the hot water extract and one fraction (III) from the 0.1 N NaOH extract of the carpophores. The antitumor effect of each fraction was tested against sarcoma 180 implanted subcutaneously in female ICR mice. Of three fractions, Fraction II showed 85.2% inhibition ratio at the dose of 20 mg/kg/day for 10 days and was named gigantan. Gigantan was found to contain 59% polysaccharide and 27% protein. Its polysaccharide moity was a heteroglycan that consisted of mainly glucose (89.3%), galactose (7.7%), minaose (2.0%) and fructose (1.0%).
4종의 외생균근균이 MMN 배지상에서 7종 단소원에 대한 이용능력을 조사하였다. 60일간 순수배양한 결과, 다색벚꽃버섯(KFRI 1987), 향버섯, 접시껄껄이그물버섯(KFRI 1194), 송이(KFRI 1256)는 dextrin에서 균사 생장이 우수하였다. 다색벚꽃버섯, 향버섯(KFRI 1676), 접시껄껄이그물버섯은 pectin에서 균사 생장이 가장 낮았다. 송이(KFRI 1256)를 제외한 7개의 균주들은 heteroglycan(pectin)보다 homoglycan계 탄소원(starch, dextrin)의 이용률이 더 높은 것으로 조사되었다. 균 배양 후 배지의 pH 값은 배양 전보다 최소 1.1~최대 3.0 범위까지 감소하였다. 외생균근균 배양체의 형태적 특징을 조사한 결과, 모든 탄소원 시험배지에서 백색 균사체가 우세하였으나 탄소원의 종류에 따라 황색, 갈색, 자주색 계열의 다양한 균사체가 관찰되었다. 접시껄껄이그물버섯은 4~5종류의 탄소원에서 single colony의 형태로 생장한 반면, 이외 대부분의 균주들은 6종의 탄소원에서 multiple colony의 형태로 생장하였다.
Chemical properties of spray-dried powders separated based on molecular weight from crude protein binding polysaccharide (CP-SD) of Agraricus blazei were examined. Contents of ${\beta}$-glucan in SD-1, SD-2 and SD-3 were 18.67%, 48.24%, and 37.15% respectively, and SD-2 (10-150 kDa) showed the highest molecular weight. Obtained ${\beta}$-glucans were not pure glucan, but was determined to be an acidic proteo-heteroglycan with a large amount of glucose (74.46-80.05%), galactose (8.91-15.2%), and mannose (4.9-5.46%). Composition of their amino acids was mainly aspartic and glutamic acids. FT-IR spectrum revealed SD-1, SD-2 and SD-3 were structures of ${\beta}$-1,3-glucans and ${\alpha}$-1,6-glucans at 890 and 930 $cm^{-1}$, respectively, signals of ${\alpha}$-1,6-glucans for CP-SD was not found. Useful CP-SD was recovered from A. blazei for preparation of three powder types as food materials.
To find antitumor components of Lyophyllum decastes, the mycelia of L. decastes were cultured in artificial media and a new antitumor component which showed potent antitumor activity against sarcoma 180 implanted in mice, was isolated and named 'Lyophyllan A'. Lyophyllan A was composed of a polysaccharide moiety (86%) and a protein moiety (2%). The polysaccharide moiety was found to be a heteroglycan which consisted of glucose (48.1%), mannose (30.8%), galactose, xylose and fucose. The protein moiety contained 18 amino acids. Cultural characteristics of L. decastes were investigated by shake culture method. The best result was obtained when L. decastes was cultured in medium glucose 50g, peptone 10g, corn steep liquor 30ml, $KH_2PO_4$ 0.87g, $MgSO_4$$7H_2O$ 0.5g, $CaCl_2$ 0.3g, $FeSO_4{\cdot}7H_2O$ 10mg, $MnCl_2{\cdot}4H_2O$ 7mg, $ZnSO_4{\cdot}7H_2O$ 4mg and $CuSO_4{\cdot}5H_2O$ 1mg per one liter at $26^{circ}C$, 180rpm, for 9 days.
장수버섯 자실체로부터 분리된 강력한 항보체 활성 다당체인 FF-AP1을 정제하고 이것의 화학적 특성을 구명하기 위해 본 실험을 수행한 결과는 다음과 같다. ConA-Sepharose 4B affinity chromatography에 의해 FF-AP1은 $FF-AP1{\alpha}$와 $FF-AP1{\beta}$로 더 분리되었으며 이 중 항보체 활성의 주 유효 다당체인 $FF-AP1{\beta}$는 $10\;{\mu}g/ml$ 농도에서도 약 70%의 항보체 활성도를 나타내었다. $FF-AP1{\beta}$는 약 9.6%의 단백질을 함유한 산성다당체이며 glutamic acid와 aspartic acid의 함량이 상대적으로 다른 아미노산들에 비해 높았다. 이것의 분자량은 gel filtration법에 의해 15,000인 것으로 추정되었고 적외선 분광 분석에서 $890cm^{-1}$ 부근의 소peak를 탐지함으로써 ${\beta}$ glucosidic 결합의 존재를 확인하였다. Gas chromatography에 의한 구성당 조성 분석 결과, 주 구성당이 glucose, mannose, 및 galactose인 galacto-manno-glucan이었고, 소량의 rhamnose, xylose, fucose와 uronic acid도 탐지되었다.
상황버섯을 $90^{\circ}C$에서 환류추출 시 시간과 추출용매의 조건(물 및 에탄올 농도, pH)에 따른 추출물을 제조하여 ${\beta}$-glucan 함량과 항산화활성 및 항산화성분의 함량을 조사하였다. 상황버섯 추출물은 추출시간이 길어짐에 따라 수율과 ${\beta}$-glucan 함량이 증가하여 24시간 추출 조건을 실험에 사용하였다. 추출용매에 따른 상황버섯 추출물의 수율은 60% 에탄올, pH 4의 조건에서 가장 높았다. ${\beta}$-glucan 함량은 열수 추출물에서 높은 함량을 나타내었고, 산성과 중성 조건에서 높게 나타났다. 항산화활성은 60% 에탄올, pH 7 조건에서 추출한 것이 가장 높았다. 항산화성분의 함량 또한 항산화활성과 같은 경향을 보였으며, 수율, ${\beta}$-glucan 함량, 항산화활성 및 성분을 모두 고려하였을 때 60% 에탄올, pH 7 추출 조건이 적합하였다.
알래스카산 낙엽진흙버섯[Porodaedalea pini (Brot.) Murrill] (syn. Phellinus pini)의 자실체 조분쇄물로부터 $100^{\circ}C$에서 4시간 추출하여 건량 수율 20.5%의 건조 분말 열수추출물을 제조하여, HeLa 세포에서 CVB3에 대한 항바이러스 활성을 조사한 결과 plaque 형성을 현저히 억제하였다. 또한, 다른 여러 가지 버섯 추출물에 비해 neuraminidase 활성 저해능이 가장 높았다. 열수 추출물로부터 75% 에탄올 침전으로 건량 수율 28.3%의 저분자 상등액 건조물(ES)과 수율 43.3%의 고분자 침전물 건조물(EP)을 얻었다. 상등액인 ES에서는 항바이러스 활성이 없었지만, 침전물인 EP는 HeLa 세포에서 CVB3바이러스에 대해 농도 의존적으로 plaque 형성을 현저히 억제하였고, $EC_{50}$은 0.45 mg/mL 이었으며, HeLa 세포에 대한 세포독성 $CC_{50}$은 2.25mg/mL 이었다. 또한, EP는 neureminidase 활성을 농도 의존적으로 저해하였으며, 1.7mg/mL에서 약 75%의 효소활성 억제효과를 보였다. 이러한 결과는 낙엽진흙버섯 자실체의 별수추출물로부터 얻어진 에탄을 침전물 EP가 CVB3 뿐만 아니라, influenza virus(Flu)등에 대해서도 광범위하게 항바이러스 활성을 나타낼 가능성을 보여 주었다. EP는 다당류로서 glucose의 함량이 79.8%로 가장 높았고 galactose, xylose, mannose와 fucose를 소량 포함한 수용성 heteroglycan의 일종으로, 소량(12.7%, w/w)의 단백질 또는 작은 펩타이드를 함유한 당단백의 일종일 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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