• Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
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• 제11권3호
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• pp.215-222
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• 2006

The Lowry method was used in this study to measure protein in Haemophilus influenzae type b (Hib) conjugate vaccines (polyribosylibitol phosphate-tetanus toxoid; PRP-TT) using deoxycholic acid (DOC) to induce protein precipitation. Trichloroacetic acid (TCA) did not induce precipitation adequately from the Hib conjugate bulk and the freeze-dried Hib conjugate product. Its yield was approximately 50%. The matrix structure of Hib conjugate inhibits precipitation by TCA. Although the Lowry method can be carried out without precipitation in Hib conjugate bulk when no residual impurities (adipic acid dihydrazide [ADH], 1-ethyl-3-(3-dimethylamino-propyl) carbodiimide-HCI [EDAC], phenol and cyanogens bromide [CNBr], etc.) are present, it cannot be used for Hib conjugate products that contain sucrose 8.5%, because 8.5% concentration of sucrose enhanced the protein concentration. DOC- and HCl-induced precipitation is an alternative method for evaluating the protein content of the Hib conjugate bulk and the Hib conjugate product. The precipitation was optimal with a final concentrate of 0.1% for DOC at $4^{\circ}C$ and pH 2. This Lowry method, using DOC/HCI precipitation to induce protein precipitation, was confirmed a consistent, reproducible, and valid test for proteins in Hib conjugate bulk and its freeze-dried product.

• BMB Reports
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• 제33권6호
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• pp.514-518
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• 2000

Two open reading frames of Haemophilus influenzae, HI0572 and HI0751, showing homology to a yeast thioredoxin peroxidase II (TPx II) and an E. coli thiol peroxidase $P_{20}$, respectively, were cloned and expressed in E. coli, and then the proteins were subsequently purified and characterized. HI0751 protein showed the thioredoxin (Trx)-dependent peroxidase activity, whereas HI0572 protein showed glutathione-dependent peroxidase. The HI0572 is the first peroxiredoxin with glutathione peroxidase activity rather than thioredoxin peroxidase. Purified HI0572 and HI0751 proteins protected specifically the inactivation of glutamine synthetase by metal catalyzed oxidation (MCO) systems composed of $Fe^{3+}$, $O_2$ and mercaptans such as dithiothreitol, ${\beta}-mercaptoethanol$ and glutathione (GSH). Unlike the HI0751 protein, the HI0572 protein was more effective in protecting glutamine synthetase from inactivation by the $GSH/Fe^{3+}/O_2$ system. It seems that these unique properties of the HI0572 protein are due to the structure containing a glutaredoxin domain at it's C-terminal in addition to a peroxiredoxin domain.

• Pediatric Infection and Vaccine
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• 제24권3호
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• pp.125-133
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• 2017

목적: 1995년 한국에서 b형 헤모필루스 인플루엔자(Haemophilus influenzae type b [Hib]) 백신이 도입된 이후, 2013년 국가예방접종에 포함되었다. Hib 백신 도입 시기 이후 다른 나라의 일부 연구에 따르면, 침습적 Hib 질환은 소아보다 성인, 특히 노인 및 면역 저하 환자에서 더 자주 발생한다고 보고하였다. 따라서, 본 연구는 20-85세의 한국 성인에서 항-polyribosylribitol phosphate (PRP) 항체의 양적 및 질적 측정을 통하여 질병 감수성을 평가하고자 하였다. 방법: 혈청은 39명의 건강한 성인(20-50세)과 면역 저하 상태가 아닌 30명의 노인(75-85세)에서 수집하였다. 모든 피험자는 7일 이내에 항생제를 복용하지 않았다. 항-PRP 면역글로불린 G (immunoglobulin G [IgG]) 항체가 및 혈청 살상능 역가(serum bactericidal index [SBI])는 효소결합면역흡착측정법과 혈청 살상능 평가분석을 통해 측정하였다. 결과: 항-PRP IgG 항체가의 기하평균 및 SBI의 기하평균은 성인군에서 각각 $0.88{\mu}g/mL$ (95% 신뢰 구간, 0.17-3.85) 및 354 (95% 신뢰구간, 50-2,499)이었고, 노인군에서는 각각 $1.67{\mu}g/mL$ (95% 신뢰구간, 0.53-5.24) 및 449 (95% 신뢰구간, 146-1,376)이었다. 소아에서 Hib 감염에 대한 방어 농도로 인정하고 있는 0.15 및 $1.0{\mu}g/mL$을 적용하였을 때, 항체 양성률은 성인군에서 87.2%, 노인군에서 100%였다. SBI의 양성률($SBI{\geq}4$)은 성인군에서 82.1%, 노인군에서 100%였다. 결론: 대부분의 성인군과 노인군에서 양적으로나 기능적으로 Hib 질환에 대한 방어 면역력을 가지고 있었으나 모두는 아니었다. 높은 면역력과 낮은 Hib 순환율은 인구에서 Hib에 대한 자연면역을 감소시킬 수 있으므로, Hib 면역과 질병에 대한 지속적인 감시가 필요하다.

• 대한수의학회지
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• 제23권2호
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• pp.153-158
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• 1983

Haemophilus parahaemolyticus(pleuropneumoniae)균(菌)(HP균(菌)) 혈청(血淸) 1형(型)(4074주(株)), 2형(型)(1536주(株)), 3형(型)(1421주(株)) 및 5형(型)(966주(株))의 혈청반응특이성(血淸反應特異性)을 검토할 목적으로, 2주령(週齡)의 SPF돈(豚)에 HP균(菌) 신선분리주(新鮮分離株)(HP8주(株))를 경비접종(經鼻接種)하여 경시적(經時的)으로 나타나는 항체가(抗體價)를 주로 응집반응(凝集反應)(AG)과 보체결합반응(補體結合反應)(CF)으로 비교검토하였다. 아울러 야외(野外)에서 채취한 돈혈청(豚血淸)에 대하여 각 혈청형별(血淸型別) 항체가(抗體價)의 분포(分布)도 AG및 CF반응(反應)으로 조사하였다. 얻어진 결과(結果)를 요약하면 다음과 같다. 1. 응집항체(凝集抗體)(AG항체(抗體)) 및 보체결합항체(補體結合抗體)(CF항체(抗體))는 접종(接種)한 다음 1주일에 나타나기 시작하였고, AG항체(抗體)는 접종(接種) 2주후에 그리고 CF항체(抗體)는 2~3주후에 최고치를 나타내었다. 그리고 CF항체(抗體)는 AG항체(抗體)보다 약간 늦게 나타나는 경향이 인정되었다. 2. HP균(菌)(HP 8주(株))혈청(血淸) 2형감염돈(型感染豚) 혈청(血淸)에 대한 각 혈청항원간(血淸抗原間)의 반응(反應)에서는 항체가(抗體價)가 낮기는 하나 교차반응(交叉反應)이 안정되었고, 특히 혈청(血淸) 1형(型) 5형항원(型抗原)에서 이러한 현상이 인정되었다. 3. 야외혈청(野外血淸)에 대한 HP균(菌)의 혈청형별항체(血淸型別抗體)는 주로 HP균(菌)2형(型)이 대부분이었고, 그 검출양성율(檢出陽性率)은 AG반응(反應)에서 48.6%, CF반응(反應)에서 37.1%를 나타내고 있어, HP균혈청(菌血淸) 2형균(型菌)의 감염(感染)이 존재함이 혈청학적(血淸學的)으로 확인되었다. 4. HP균(菌)의 혈청반응(血淸反應)의 실시에 있어서는 AG반응(反應)에서 나타나는 비특이반응(非特異反應)은 가검혈청(可檢血淸)을 kaolin처리 함으로서 이를 배제할 수 있었고, CF반응(反應)에 있어서는 신선자우혈청(新鮮仔牛血淸)을 보체계(補體系)에 첨가함으로써 효과적인 반응을 실시할 수 있음이 확인되었다.

• Journal of Veterinary Science
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• 제23권1호
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• pp.2.1-2.18
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• 2022

Background: Co-infections of the porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) and the Haemophilus parasuis (HPS) are severe in Chinese pigs, but the immune response genes against co-infected with 2 pathogens in the lungs have not been reported. Objectives: To understand the effect of PRRSV and/or HPS infection on the genes expression associated with lung immune function. Methods: The expression of the immune-related genes was analyzed using RNA-sequencing and bioinformatics. Differentially expressed genes (DEGs) were detected and identified by quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR), immunohistochemistry (IHC) and western blotting assays. Results: All experimental pigs showed clinical symptoms and lung lesions. RNA-seq analysis showed that 922 DEGs in co-challenged pigs were more than in the HPS group (709 DEGs) and the PRRSV group (676 DEGs). Eleven DEGs validated by qRT-PCR were consistent with the RNA sequencing results. Eleven common Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes pathways related to infection and immune were found in single-infected and co-challenged pigs, including autophagy, cytokine-cytokine receptor interaction, and antigen processing and presentation, involving different DEGs. A model of immune response to infection with PRRSV and HPS was predicted among the DEGs in the co-challenged pigs. Dual oxidase 1 (DUOX1) and interleukin-21 (IL21) were detected by IHC and western blot and showed significant differences between the co-challenged pigs and the controls. Conclusions: These findings elucidated the transcriptome changes in the lungs after PRRSV and/or HPS infections, providing ideas for further study to inhibit ROS production and promote pulmonary fibrosis caused by co-challenging with PRRSV and HPS.

• Journal of Periodontal and Implant Science
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• 제16권1호
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• pp.90.1-90.1
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• 1986

• 대한예방의학회:학술대회논문집
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• 대한예방의학회 2005년도 제57차 추계 학술대회 연제집
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• pp.310-310
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• 2005

• Bulletin of the Korean Chemical Society
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• 제31권12호
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• pp.3782-3784
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• 2010

• Clinical and Experimental Pediatrics
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• 제45권2호
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• pp.261-266
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• 2002

저자들은 출생 후 호흡기 증상이 지속되어 오던 여아가 respiratory syncytial virus와 b형 헤모필루스 인플루엔자균에 의한 하기도 감염에 이환되면서 생후 4개월에 혈관륜으로 진단된 1예를 보고하는 바이다. 환아는 출생 후 협착음과 천명음 등의 잦은 호흡기 증상을 보였고, 3개월에 호흡 곤란을 주소로 입원하였으며 respiratory syncytial virus에 의한 세기관지염으로 치료받고 호전되었다. 퇴원 후 증상이 다시 악화되어 재입원 하였으며 b형 헤모필루스 인플루엔자균에 의한 기관염 및 폐렴이 확인되었고, 치료를 위해 기관내 튜브에 도관 삽입을 시도하였을 때 하부 기도에서 저항감이 감지되어 기도 부위의 해부학적 기형을 의심하게 되었다. 3차원 흉부 단층 촬영에서 이중 대동맥궁으로 인한 혈관륜이 확인되었고, 교정 수술을 시행한 후 좋은 경과를 보이고 있다.

• Bulletin of the Korean Chemical Society
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• 제32권8호
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• pp.2549-2552
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• 2011

In this study, the kinetic properties of wild-type and C117D mutant H. influenzae MurA (Hi MurA), which catalyzes the first reaction in the biosynthetic pathway of the cell wall, were characterized. Purified recombinant Hi MurA was active at pH values ranging from pH 5.5 to pH 10, and its $K_m$ (UNAG), $K_m$ (PEP), and $k_{cat}$ values were measured to be 31 ${\mu}M$, 24 ${\mu}M$, and 210 $min^{-1}$, respectively. Hi MurA activity was effectively inhibited by fosfomycin with an $IC_{50}$ value of 60 ${\mu}M$. Hi MurA contains a cysteine residue (C117) at the loop region near the PEP binding, whereas MurA from fosfomycin resistant Mycobaterium tuberculosis or Chlamydia trachomatis contain an aspartate residue instead of the cysteine at the corresponding site. Aspartate substitution of Cys117 in Hi MurA shifted its optimum pH from 7.8 to 6.0. In addition, the $K_m$ values for UNAG and PEP were increased to 160 ${\mu}M$ and 150 ${\mu}M$, respectively, and the $k_{cat}$ value was significantly reduced to 41 $min^{-1}$. Furthermore, the C117D mutant form of Hi MurA was not inhibited by 1 mM fosfomycin. These results indicate that the Cys117 of Hi MurA is the binding site of fosfomycin and plays an important role in the fast turnover of the catalytic reaction.