• 한국해양바이오학회지
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• 제14권1호
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• pp.33-42
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• 2022

Tacrolimus, a type of macrolide produced by Streptomyces tsukubaensis, is widely used as an immunosuppressant. However, continuous exposure to tacrolimus causes oxidative stress in normal cells, ultimately inducing cell injury. Therefore, this study investigated whether luthione, a reduced glutathione, could inhibit tacrolimus-induced cytotoxicity in olive flounder (hirame) natural embryo (HINAE) cells. According to the results, luthione significantly inhibited tacrolimus-induced reduction in cell viability in a concentration-dependent manner. Additinally, although luthione unaffected autophagy by tacrolimus, tacrolimus-induced apoptosis was significantly suppressed in the presence of luthione. Luthione also markedly blocked DNA damage in tacrolimus-treated HINAE cells, associated with the inhibition of reactive oxygen species (ROS) generation. Additionally, tacrolimus cytotoxicity in HINAE cells was correlated with increased inflammatory response, also attenuated by luthione. Collectively, these results show that at least luthione protects HINAE cells against tacrolimus-induced DNA damage, apoptosis, and inflammation, but not autophagy, by scavenging ROS. Although additional in-vivo studies are required, this study's results can be used as a basis for utilizing luthione to reduce the toxicity of fish cells caused by excessive immune responses.

• 한국어병학회지
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• 제37권1호
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• pp.111-122
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• 2024

본 연구에서는 넙치(Paralichthys olivaceus)에서 N-(4-(4-Fluorophenoxy)-3-methylphenyl) acetamide 주사 투여에 따른 넙치 비장의 NK cell 활성을 평가하기 위하여 120, 150, 200 mg/kg 용량으로 설정하고 3일에 1회, 30일 동안 총 10회의 주사를 투여하였다. 표적세포(Target cell)로는 쥐의 임파종 세포인 YAC-1 cell과 넙치의 HINAE cell을 사용하였고, 넙치 비장의 NK cell과의 공배양 시간은 4시간과 18시간을 선정하여 실험을 실시하였다. YAC-1 cell을 사용하여 실험의 경우 4시간과 18시간 공배양 실험 모두 200 mg/kg 용량 구간의 실험군에서 가장 높은 세포독성을 대조군 대비 최대 3.06배 높은 세포독성을 보였다. HINAE cell을 사용한 실험의 경우 4시간 공배양한 실험에서만 유의적인 차이를 보였으며, YAC-1 cell과 마찬가지로 200 mg/kg 용량 구간의 실험군에서 가장 높은 세포 독성을 보여 대조군 대비 2.3배 높은 세포독성을 보였다. 추가적으로 넙치의 두신 조직에서 IL-12b의 발현량을 확인하였고, 세포독성 실험과 일치하는 결과를 보였고, 200 mg/kg 용량 구간의 실험군에서 가장 높은 발현량을 보여 대조군과 비교하여 6.62배 높은 수치를 보였다. 이러한 결과는 N-(4-(4-Fluorophenoxy)-3-methylphenyl) acetamide가 넙치의 NK cell 활성에 영향을 줄 수 있다는 것을 보여준다.

• 생명과학회지
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• 제26권12호
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• pp.1470-1476
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• 2016

바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스(VHSV)는 넙치를 포함한 어류 양식의 막대한 피해를 일으키는 바이러스 병원체이며, VHSV가 생성하는 6개의 바이러스 단백질들 중에서 NV 단백질이 병원성에 관여하는 것으로 알려져 있다. VHSV-감염 넙치를 이용한 전사체 마이크로 어레이의 선행 분석 결과에 의하면 VHSV 감염이 해당과정 효소들의 mRNA 발현을 억제함으로써 넙치 세포에서 ATP 생성을 감소시켰음을 알 수 있었다. 이들 결과를 토대로, 본 연구에서는 VHSV NV 단백질이 해당과정 효소인 glucokinase의 발현에 미치는 영향을 검토하였다. 본 연구의 결과에 의하면, NV 단백질은 넙치 세포에서 glucokinase의 mRNA 발현을 감소시켰으며, 새롭게 동정한 glucokinase의 유전자 프로모터의 활성 실험결과, NV 단백질이 glucokinase의 프로모터 활성을 저해함을 알 수 있었다. 이와 같은 작용 결과들로 인하여 VHSV NV 단백질의 발현이 세포 내로의 포도당 흡수 또한 감소시켰다. 이러한 결과들은 VHSV NV 단백질이 유전자 발현의 전사 수준에서 음성적으로 해당과정의 효소 발현을 조절함을 의미하며, 결국 세포 내 에너지의 결핍으로 넙치의 폐사로 이어질 가능성을 보여주는 것이다.

• 한국어병학회지
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• 제30권2호
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• pp.71-78
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• 2017

The glycoprotein of novirhabdoviruses is known to play a critical role in the determination of host specificity. Viral hemorrhagic septicemia viruses (VHSVs) in different genotypes have different glycoprotein sequences and show different preferences for specific cell lines. In this study, to know whether the glycoprotein is solely responsible for the host cell preference of VHSV, a recombinant VHSV expressing vesicular stomatitis virus (VSV) glycoprotein instead of VHSV IVa glycoprotein (rVHSV-VSV-G) was generated by reverse genetics and inoculated into several fish cell lines, then, cytopathic effect (CPE) and viral growth caused by rVHSV-VSV-G infection were compared with those caused by rVHSV-wild that was previously generated and has the same genomic sequence with wild-type VHSV except a few nucleotides. The plaque numbers of rVHSV-VSV-G were significantly higher in EPC, BF-2 and GF cells than those of rVHSV-wild. However, in HINAE cells (originated from olive flounder), rVHSV-VSV-G titer was significantly lower than rVHSV-wild titer, and both recombinant VHSVs were not grown well in CHSE-214 cells. Although statistical significances were detected in the titers between rVHSV-wild and rVHSV-VSV-G in several cell lines, the cell line-preference order of rVHSV-VSV-G was not different from that of rVHSV-wild. These results suggest that the replacement of VHSV glycoprotein may not completely change host cell preference, and other regions of VHSV might also involve in the determination of host cell preference.

• 현장농수산연구지
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• 제22권2호
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• pp.69-79
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• 2020

본 연구에서는 해조류 자원의 산업적 활용 소재로서의 가치 및 기능성 식품 및 사료 첨가 소재로의 개발을 위한 기초 자료를 제시하고자 국내에 서식하는 10종의 해조류 열수추출물을 이용하여 항염증 활성 및 마우스 대식세포주와 어류 세포주의 세포생존율에 미치는 영향을 확인하였다. 그 결과 S. japonica 100, 1000 ㎍/mL과 G. tenax 1000 ㎍/mL 농도에서 마우스 대식세포주를 LPS로 자극하였을 때 생성되는 NO를 유의적으로 감소시키는 것을 관찰하였으며, 나머지 8종의 해조류 추출물은 실험 농도에서 LPS에 의한 NO 생성에 영향을 미치지 않았다. 고농도에서 항염증 활성을 보인 S. japonica 및 G. tenax 열수추출물은 염증 인자를 조절할 수 있는 기능성 후보 소재로서 분획별 생리활성과 유효성분 규명의 연구가 요구된다. 본 연구 대상 해조류 추출물에 대한 안전성 기초 자료로서 마우스 대식세포 및 넙치 배아 유래 세포 세포생존율에 미치는 영향을 평가한 결과, P. tenera 고농도 (1000 ㎍/mL) 처리군을 제외하고 모든 해조류 추출물은 마우스 대식세포의 생존율에 영향을 주지 않았으며, 모든 해조류 추출물에서 5000 ㎍/mL까지 넙치 배아유래 세포에 대한 세포독성이 나타나지 않았다. 본 연구 결과는 후속 연구를 통해 해조류의 다양하고 복잡한 구조의 생물 활성 화합물의 생체 내 메커니즘을 규명함으로써 기능성 소재 개발을 위한 기초자로료 활용될 수 있을 것으로 기대하며, 본 연구의 대상 10종의 국내 해조류 자원 중 S. japonica과 G. tenax은 잠재적인 천연 항염증제로서 안전한 식품 및 사료 첨가 소재로서의 가능성을 제시한다.

• 생명과학회지
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• 제27권11호
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• pp.1369-1375
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• 2017

본 연구의 목적은 넙치 인지질가수분해효소(PLC-${\delta}1$) 3가지 타입의 세포내 특성을 규명하고자 하였다. 일반적으로 인지질가수분해효소(PLC)의 신호전달경로는 핵, 세포막, 세포질에 분포한다고 알려져 있으나, 핵내 위치 메커니즘은 여전히 불분명하다. PoPLC-${\delta}1A$, PoPLC-${\delta}1B$ (Sf)과 PoPLC-${\delta}1B$ (Lf)의 3타입의 유전자들은 각각 핵위치 신호(NLS)와 핵방출서열(NES)을 포함하고 있다. 본 연구에서는, 넙치 3가지 타입 인지질가수분해효소(PLC-${\delta}1$)의 세포내 위치이동 메커니즘 분석을 위해 GFP 벡터에 유전자를 삽입하여 ionomycin과 thasogargin처리 후 세포위치와 이동양상을 공초점 레이저 주사현미경으로 관찰하였다. PoPLC-${\delta}1A$는 PoPLC-${\delta}1B$ (Lf)와 PoPLC-${\delta}1B$ (Sf)가 원형질막에 국한되어 분포할때 세포질과 세포막보다 세포 소기관에 분포되어 있었다. PoPLC-${\delta}1B$ (Lf) 및 PoPLC-${\delta}1$ (Sf)이 핵 세포질내 이동양상을 보이지 않을 때, PoPLC-${\delta}1A$은 ionomycin과 thapsigargin 처리에 의해 핵 내에 축적되는 양상을 나타냈다. 이런 결과는 손상되지 않은 기능적 NES 서열을 포함하는 PoPLC-${\delta}1A$가 어류에서 핵 세포질 내 왕복 및 이동의 주된 역할을 한다는 것을 보여주고 있다.