• 약학회지
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• 제41권2호
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• pp.212-219
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• 1997

Multiple forms of extracellular phospholipase $A_2$ have been detected in human amniotic fluid (HAF). When HAF was subjected to heparin-Sepharose column chromatography, phospholipase $A_2$ activity was detected in both heparin-non binding and binding fraction. The activity of heparin-non binding fraction was further purified by sequential uses of column chromatographies on butyl-Toy-opearl 650M and DEAE-Sephacel. DEAE-Sephacel fraction contained three different phospholipase $A_2$ activities (Peak I, II, III). The molecular weight of DEAE-Sephacel fraction phospholipase $A_2$ determined by SDS-PAGE were about 52KDa (Peak I). Peak II, III required micromolar $Ca^{2+}$ ion for its maximum activity, but Peak I enzyme showed calcium independent phospholipase $A_2$ activity and showed broad range of pH (6.0~10.0) optimum. All these enzymes were not recognized by a monoclonal antibody raised against phospholipase $A_2$ from human synovial fluid. These results suggest that HAF might contain multiple forms of extracellular phospholipase $A_2$, which may neither belong to the 14KDa group II phospholipase $A_2$ family nor cytosolic phospholipase $A_2$.

• Journal of Chest Surgery
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• 제35권7호
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• pp.501-510
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• 2002

배경: 급성 호흡곤란증후군은 다양한 병인에 의해 발병하지만 그 병인론이 아직까지 확립되어 있지 않다. 본 연구에서는 장의 허혈-재관류시에 발병하는 급성 호흡곤란증후군에서 group II phospholipase $A_2$ ($PLA_2$)의 역할을 알아보기 위하여 시행되었다. 특히 폐장내의 호중구의 침윤과 더불어 유발되는 산화성 스트레스에서 group II $PLA_2$의 역할을 규명하려 하였다. 대상 및 방법: 체중 300g 내외의 Sprague-Dawley 종 흰쥐에서 급성 폐손상을 유발하기 위하여 상장간막동맥을 60분간 차단한 후 120분간 재관류를 시행하였다. Group II $PLA_2$가 폐장의 손상, 특히 혈관 내피세포의 손상에 미치는 영향을 호중구의 작용과 연관하여 알아보기 위하여 폐누출지수, 폐장내 myeloperoxidase의 활성도, 폐포세척액내의 단백함량을 측정하였다. 또한 장의 허혈-재관류에 따른 폐장내 $PLA_2$ 활성도의 변화를 검사하였고, 호중구에서의 산소기 형성에 미치는 group II $PLA_2$의 역할은 분리된 호중구에 rutin, manoalide, scalaradial과 같은 group II $PLA_2$ 억제제를 이용하여 산소기 생성이 억제됨을 확인함으로써 알아보았다. 장의 허혈-재관류에 따른 폐장 조직의 산화성 스트레스를 확인하기 위해 광학현미경법 및 cerium chloride를 이용한 세포화학적인 전자현미경법을 이용하여 폐장내 산소기의 생성을 확인하였다. 결과: 장의 허혈-재관류 후 폐장내 호중구의 침윤과 함께 급성 폐손상이 유발되었고, 폐장내 myeloperoxidase 활성도, 폐누출지수 및 폐세척액내의 단백함량이 대조군에 비해 유의하게 증가하였다(p<0.001). 폐장 및 장에서의 group II $PLA_2$ 활성도는 허혈-재관류 후 폐장, 장 모두에서 유의하게 증가하였고, rutin에 의해서 현저히 감소하였다(p<0.001). 사람의 혈액에서 분리된 호중구에서의 산소기 생성을 cytocrhome-c reduction assay를 통해 알아본 결과 rutin, manoalide, scalaradial 같은 group II PLA, 억제제에 의해 호중구의 산소기 생성이 감소함을 알 수 있었다. 허혈-재관류 후 광학현미경적 소견은 폐장내 염증세포의 침윤 및 모세혈관 주위의 부종이 관찰되었으나 rutin에 의해 이러한 변화는 억제되었다. $CeCl_3$을 이용한 세포화학적 전자현미경 실험에서 허혈-재관류 후 과산화수소의 생성이 증가하고 rutin에 의해서는 억제됨을 확인하였다. 결론: Croup II $PLA_2$의 억제는 침윤된 호중구로부터 산화기 생성을 억제함으로써 급성 폐손상을 완화하는 것으로 보이며, 따라서 group II $PLA_2$는 장 허혈-재관류로 유도된 급성 폐손상의 산화성 스트레스에서 중요한 역할을 하는 것으로 보인다.

• BMB Reports
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• 제30권2호
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• pp.101-105
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• 1997

Extracellular phospholipase $A_2$ activity has been detected in urine of patients with acute pyelonephritis (APN). This enzyme required micromolar $Ca^{2+}$ ion for its maximum activity and showed a broad range of pH (4.5~10) optimum. Urine enzyme hydrolyzed phosphatidylethanolamine (PE) and phosphatidylserine (PS) more effectively than phosphatidylcholine (PC). $PLA_2$ activity in the urine of patients with APN was about 5-fold higher than that of healthy individuals. When urine was subjected to heparinSepharose column chromatography, phospholipase $A_2$ activity was detected in both heparin-non-binding and binding fractions. Both phospholipase $A_2$ activities were sensitive less than a micromolar calcium concentration and did not react with anti-human 14-kDa group II phospholipase $A_2$ monoclonal antibody, HP-l. These findings suggest that two kinds of novel extracellular phospholipase $A_2$. which may not belong to the 14-kDa group II phospholipase $A_2$ family, exist in the urine of patients with APN.

• 약학회지
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• 제41권5호
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• pp.565-570
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• 1997

High levels of extracellular phospholipase $A_2$ (Plase $A_2$) associated with inflammatory process in man and animal models have been extensively reported elsew here. Thus, a logical approach to the treatment of inflammatory diseases should involve the inhibitors of Plase $A_2$. To develop new Plase $A_2$ inhibitors from natural products, two hundred crude drugs were screened using group II PLA$A_2$ inhibitory activity. Among them, methanol extract of 5 medicinal plants such as, Raphani Semen, Moutan cortex radicis, Arecae semen, Caryophylli Cortex and Betulae Cortex inhibited more than 90% of PLase $A_2$ activity at a concentration 2.5${\mu}g/ml$. Then, 10 methanol extracts sample were transferred into organic solvents, PLase $A_2$ inhibitory effects were found mainly in CHCl3 and EtoAc fractions.

• 생명과학회지
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• 제20권4호
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• pp.474-480
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• 2010

흰쥐에서 Interleukin-1 (IL-1)으로 유도된 급성폐손상에서의 group II phospholipase $A_2$ ($PLA_2$) 억제제인 rutin의 효과를 알아보기 위하여 본 연구를 시행하였다. Rutin은 IL-1에 의해 증가한 폐장내의 myeloperoxidase의 활성도를 감소시키지는 못하였으나 폐포세척액 내의 호중구의 수 및 모세혈관의 손상지표로 알려져 있는 폐장 모세혈관에서의 단백질 누출양을 감소시켰다. 동시에 rutin은 IL-1에 의하여 증가한 폐장의 염증조절효소인 $PLA_2$의 활성도를 감소시키고 결과적으로 호중구에서의 산소기의 생성을 감소시켰다. Rutin 뿐만 아니라 manoalide, scalaradial 같은 group II $PLA_2$의 억제제도 호중구의 respiratory burst를 감소시킴을 확인하였다. IL-1에 의하여 증가한 폐포세척액 내에서의 cytokine induced neutrophil chemoattractant의 농도는 rutin에 의해 영향을 받지 않았다. 형태학적으로는 IL-1에 의한 폐장조직에서의 산소기의 형성이 관찰되었고 rutin은 이러한 산소기의 생성을 현저히 감소시켰다. 이러한 결과로 미루어 group II $PLA_2$ 억제제인 rutin은 호중구에서의 활성 산소기의 생성을 효과적으로 억제함으로써 IL-1에 의한 급성폐손상의 감소를 가져 오는 것으로 결론지을 수 있다.

• 한국응용약물학회:학술대회논문집
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• 한국응용약물학회 1996년도 춘계학술대회
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• pp.187-187
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• 1996

세포질에 존재하는 100 kDa Phospholipase $A_2$(cPLA$_2$)는 인지질의 sn-2 위치의 에스테르결합을 가수분해함으로서 Prostaglandin과 Leukotriene등 Eicosanoids 생합성의 전구체인 아라키돈산과 Platelet activating factor(PAF)를 생합성하는 전구체를 동시에 생성시키는 효소로 염증과 세포손상등에 중요한 역할이 기대된다. 본 효소의 활성화 기전을 규명하고자 하는 최근의 활발한 연구에도 불구하고 불명확한 점이 많은 것이 현실이다. 특히 세포를 자극하였을 때 유리되는 아라키돈산의 증가율과 세포를 파괴한 후 조제한 가용성분획에서 측정한 활성의 증가율과는 많은 차이를 나타냈다. 이러한 결과부터 cPLA$_2$ 효소 자체를 활성화시키는 어떤 인자를 가정하였다. 최근, PLA$_2$의 또다른 형태인 14 kDa의 분비성 PLA$_2$의 in vitro 활성을 증가시키는 인자가 동정되어 그 생화학적 특성이 규명되고 있으나 이 인자는 cPLA$_2$의 활성에는 아무런 증가효과를 나타내지 않았다. 본 연구자들은 소의 뇌조직에서 cPLA$_2$의 활성을 증가시키는 인자를 발견하고 그의 생화학적인 특성을 규명하였다. 돼지 비장에서 정제한 cPLA$_2$를 사용하였으며 소의 뇌 조직의 가용성 분획으로부터 본 활성화 인자를 동정하였으며 그 활성분획을 양이온 크로마토그라피로서 Mono S EPLC와 Superose 12 Sepharose gel filtration 크로마토그라피를 이용하여 더욱 분리한 결과 약 70 kDa과 25 kDa에서 각각 용출되었다. 이렇게 부분정제한 활성은 췌장에서 분리한 group I과 흰주의 group I과 흰주의 혈소판에서 분리한 group II PLA$_2$에 대해서는 아무런 증가효과를 나타내지 않는 반면, cPLA$_2$의 활성만을 약 5배 증가시켰다. 본 활성은 cPLA$_2$ 효소량의 증가에 따라 활성의 증가효과가 정차 감소하므로 화학량적인 반응(Stoichiometric reaction)일 것으로 예상되었다.

• The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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• 제4권3호
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• pp.219-226
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• 2000

In order to elucidate the role of platelet activating factor (PAF) in the acute lung injury induced by endotoxin (ETX), activities of phospholipase A2, lyso PAF acetyltransferase and oxidative stress by neutrophilic respiratory burst were probed in the present study. To induce acute lung injury, $100\;{\mu}g$ of E.coli ETX (type 0127; B8) was instilled directly into the tracheae of Sprague-Dawley rats. Five hours after the ETX instillation, induction of acute lung injury was confirmed by lung leak index and protein contents in the bronchoalveolar lavage (BAL) fluid. At the same time, lung phospholipase A2 (PLA2) activity and expression of group I and II secretory type PLA2 were examined. In these acutely injured rats, ketotifen fumarate, known as lyso PAF acetyltransferase inhibitor and mepacrine were administered to examine the role of PAF in the pathogenesis of the acute lung injury. To know the effect of the ETX in the synthesis of the PAF in the lungs, lyso PAF acetyltransferase activity and PAF content in the lungs were measured after treatments of ETX, ketotifen fumarate and mepacrine. In addition, the role of neutrophils causing the oxidative stress after ETX was examined by measuring lung myeloperoxidase (MPO) and enumerating neutrophils in the BAL fluid. To confirm the oxidative stress in the lungs, pulmonary contents of malondialdehyde (MDA) were measured. After instillation of the ETX in the lungs, lung leak index increased dramatically (p＜0.001), whereas mepacrine and ketotifen decreased the lung leak index significantly (p＜0.001). Lung PLA2 activity also increased (p＜0.001) after ETX treatment compared with control, which was reversed by mepacrine and ketotifen (p＜0.001). In the examination of expression of group I and II secretory PLA2, mRNA synthesis of the group II PLA2 was enhanced by ETX treatment, whereas ketotifen and WEB 2086, the PAF receptor antagonist, decreased the expression. The activity of the lysoPAF acetyltransferase increased (p＜0.001) after treatment of ETX, which implies the increased synthesis of PAF by the remodelling of lysoPAF in the lungs. Consequently, the contents of the PAF in the lungs were increased by ETX compared with control (p＜0.001), while mepacrine (p＜0.001) and ketotifen (p＜0.01) decreased the synthesis of the PAF in the lungs of ETX treated rats. The infiltration of the neutrophils was confirmed by measuring and enumerating lung MPO and the neutrophils in the BAL fluid respectively. Compared with control, ETX increased lung MPO and number of neutrophils in BAL significantly (p＜0.001) whereas mepacrine and ketotifen decrerased number of neutrophils (p＜0.001) and MPO (p＜0.05, p＜0.001, respectively). The lung MDA contents were also increased (p＜0.001) by ETX treatment, but treatment with mepacrine (p＜0.001) and ketotifen (p＜0.01) decreased the lung MDA contents. Collectively, we conclude that ETX increases PLA2 activity, and that the subsequently increased production of PAF was ensued by the remodelling of the lyso PAF resulting in tissue injury by means of oxidative stress in the lungs.

• 한국응용약물학회:학술대회논문집
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• 한국응용약물학회 1998년도 Proceedings of UNESCO-internetwork Cooperative Regional Seminar and Workshop on Bioassay Guided Isolation of Bioactive Substances from Natural Products and Microbial Products
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• pp.195-195
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• 1998

Ginkgetin was previously reported as an inhibitor of group II phospholipase A$_2$. It also inhibited in vitro arachidonate release from the activated macrophages and lymphocyte proliferation. These previous studies suggested an anti-inflammatory nature of ginkgetin, especially on chronic inflammation. In fact, ginkgetin showed potent anti-inflammatory activity against rat adjuvant-induced arthritis, a chronic inflammatory animal model, with comparable analgesic activity. In order to investigate the action mechanisms, tumor necrosis factor and interferone release were studied from human PMMC. It was found that ginkgetin clearly inhibited release of these cytoknes from human PMMC. Ginkgetin was also found to inhibit immunoglobulin M production at 1 - 10 uM. These results may contribute to antiarthritic activity of ginkgetin in vivo.

• The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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• 제1권4호
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• pp.425-434
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• 1997

Many reports represent that angiotensin II (ANG II) caused a dose dependent biphasic effects on fluid transport in the proximal tubule. However, respective roles of different signaling pathways in mediating these effects remain unsettled. The aim of the present study was to examine signaling pathways at high doses of ANG II on the $Na^+$ uptake of primary cultured rabbit renal proximal tubule cells(PTCs) in hormonally defined serum-free medium. High concentrations of ANG II $(>10^{-9}\;M)$ inhibited $Na^+$ uptake and increased $[Ca^{2+}]_i\;level$ in the PTCs. However, low concentrations of $(<10^{-11}\;ANG\;II)$ stimulated $Na^+$ uptake and did not affect $[Ca^{2+}]_i\;level$. 8-(N, N-diethylamino)-octyl-3,3,5- trimethoxybenzoate (TMB-8), ethylene glycol-bis$({/beta}-amino\;ethyl ether)-N,N,N'$, N'-tetra acetic acid (EGTA), and nifedifine partially blocked the inhibitory effects of ANG II on $Na^+$ uptake. When ANG II and bradykinin (BK) were treated together, $Na^+$ uptake was further reduced $(88.47{\pm}1.98%\;of\;that\;of\;ANG\;II,\;81.85{\pm}1.84%\;of\;that\;of\;BK)$. In addition, W-7 and KN-62 blocked the ANG II-induced inhibition of $Na^+$ uptake. Arachidonic acid reduced $Na^+$ uptake in a dose-dependent manner. When ANG II and arachidonic acid were treated together, inhibitory effects on $Na^+$ uptake significantly exhibited greater reduction than that of each group, respectively. When PTCs were treated by mepacrine $(10^{-6}\;M)$ and AACOCF3 $(10^{-5}\;M)$ for 1 hr before the addition of $(<10^{-9}\;ANG\;II)$, the inhibitory effect of ANG II was reversed. In addition, econazole $(>10^{-6}\;M)$ blocked ANG II-induced inhibition of $Na^+$ uptake. In conclusion, the $[Ca^{2+}]_i$ (calcium-calmodulin-dependent kinase) and phospholipase $A_2\;(PLA_2)$ metabolites are involved in the inhibitory effects of ANG II on $Na^+$ uptake in the PTCs.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제54권5호
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• pp.532-541
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• 2003

연구배경 : 장의 재관류로 발생하는 급성폐손상에서 group II $PLA_2$의 억제제로 알려진 doxycyclin의 치료효과와 그 작용기전을 알아보기 위하여 본 연구를 시행하였다. 특히 장의 재관류에 의한 급성폐손상이 호중구에 의한 산화성 스트레스에 의하며 이 과정에서 group II $PLA_2$가 관여한다는 사실에 근거하여 doxycyclin의 산화성 스트레스억제를 확인하는 것이 본 연구의 목적이었다. 방법 : 체중 300g 내외의 Sprague-Dawley 흰쥐에서 상장간막동맥을 60분간 clamp한 뒤 120분간의 재관류를 시키면 급성폐손상이 유도된다. 이때 호중구에 의한 산화성스트레스가 유발되고 여기에 $PLA_2$가 관여하는 것을 관찰하기위해 lung leak, lung MPO 활성도, CeCl3 cytochemical electron microscopy, cytochrome-c reduction assay 및 lung $PLA_2$ 활성도를 측정하였다. 또한 doxycyclin의 효과를 확인하기 위하여 doxycyclin hyclate(10mg/kg)를 복강내 주사한 뒤 위에서 언급한 모든 parameter를 측정, 비교하였다. 결과 : 장의 재관류로 유도된 급성폐손상에서 doxycyclin은 폐손상을 감소시켰는데 이것은 doxycyclin에 의한 lung MPO, 산소기생성, lung $PLA_2$ 활동도의 감소에 의한 것으로 생각되었다. 결론 : 장의 재관류로 유도된 급성폐손상은 호중구에서 생성되는 산소기, 특히 $PLA_2$의 활성화에 의해 생성된 산소기에 의한 것으로 생각되며 이때 doxycyclin은 $PLA_2$를 억제하여 산화성 스트레스를 감소시킴으로서 폐손상의 감소를 가져오는 것으로 생각된다.