In this study, methotrexate (MTX)-encapsulated polymeric micelles using methoxy poly(ethylene glycol) (MPEG)-grafted chitosan (ChitoPEG) copolymer were prepared. The MIX-incorporated polymeric micelles of ChitoPEG copolymer has a particle size of around 50-100 nm. In 1H nuclear magnetic resonance (NMR) study, the specific peaks of MTX disappeared in heavy water ($D_2O$) and only the specific peak of MPEG was observed, while all of the peaks were confirmed in dimethyl sulfoxide (DMSO). These results indicated that MTX was complexed with chitosan and then formed an ion complex inner-core of the polymeric micelle in an aqueous environment. The drug contents of the polymeric micelle were around $4{\sim}12%$ and the loading efficiency of MTX in the polymeric micelles was higher than 60% (w/w) for all of the formulations. The cytotoxicity of MIX and MTX-incorporated polymeric micelle against CT26 tumor cells was not significantly changed.
생체 적합성이 우수한 폴리(비닐 알코올)(PVAL)과 폴리(N-비닐 피롤리돈)(PVP), 항균성이 있는 헥실렌글리콜 (HG)과 치료효과가 우수한 수용성 키토산을 혼합하여 상처치료용 수화젤을 제조하였다. 제조 방법으로 수용액의 동결과 융해에 의한 물리적 가교, 방사선 조사에 의한 화학가교 및 동결과 융해의 물리적 가교 후 방사선 가교를 이용하였다. 수화젤 제조시 PVAL/PVP/HG/키토산의 농도는 15 wt%, 키토산은 0.3wt%, PVAL과 PVP의 비는 6:4로 고정하였다. 용액내 HG의 농도를 1∼5 wt%로 변화시켰으며, 동결과 융해횟수는 1∼3회로 변화시켰고, 방사선 조사량은 25∼50 kGy로 변화시켰다. 위의 방법으로 제조된 수화젤의 젤화율, 팽윤도, 젤강도를 측정하였다. HG의 조성비가 증가할수록 젤화율과 젤강도는 감소하였고 팽윤도는 증가하였다. 조사량과 동결과 융해 횟수가 증가할수록 젤화율과 젤강도는 증가하였고 팽윤도는 감소하였다. 동물 실험을 통해 제조된 수화젤의 상처 치료효과를 보았으며, 항균 실험을 통해 항균성을 관찰하였다.
천연고분자물질인 키토산은 생체적합성과 생체활성이 좋은 특성을 가지고 있기 때문에 생체 의료용 재료로 중요하게 다루어지고 있다. 본 연구는 수용성 키토산을 교차결합제인 EGDMA (ethylene glycol dimethacrylate)와 HEMA (2-hydroxyethyl methacrylate), MMA (methylmethacrylate), MA (methacrylic Acid) 그리고 개시제인 AIBN을 사용하여 공중합 하였다. 공중합한 안의료용 재료의 물리적 특성을 측 정한 결과 함수율 24$\sim$59%, 가시광선 투과율 88$\sim$89%, 인장강도 0.1$\sim$2.4 Kgf를 나타내었다. 또한 포도 상구균, 녹농균에 대한 항균성 시험 결과 키토산을 포함하지 않은 고분자에 비해 높은 항균성을 나타내 어 향후 이 공중합체가 고기능성을 가진 안의료용 재료로 사용될 수 있을 것으로 기대된다.
PHB/chitosan 필름의 수분 투과도는 PHB 필름께서 280.25 g/m$^2$ㆍ24 hr로 가장 높았고 chitosan의 함량이 증파할수록 수분 투과도는 낮아지는 경향을 보였다. PEG가 첨가된 PHB/chitosan 필름에서도 PHB-P 필름의 수분 투과도가 294.5 g/m$^2$ㆍ24 hr로 가장 높았고, chitosan의 함량이 증가할수록 수분 투과도는 낮아졌다. 산소 투과도의 경우 PHB 필름이 0.026${\times}$$10^{-10}$$cm^3$(STP) cm/$cm^2$ㆍsecㆍcmHg로 가장 높았으며 chitosan의 첨가 비율이 증가할수록 산소 투과도는 낮아졌다. 또한 가소제인 PEG가 첨가되지 않은 필름이 PEG가 첨가된 필름보다 산소 투과도가 더 낮았다. 유지 투과도에서는 PHB와 PHB-P를 제외한 필름들이 24시간동안 유지론 통과시키지 않아 유지 차단성이 우수한 것으로 나타났다. 필름의 생분해도 측정시 필름을 첨가하지 않은 대조군에 비해 필름이 첨가된 실험군의 산소 소모량이 높아 필름이 생분해되고 있음을 확인할 수 있었으며 필름의 PHB의 비율이 높을수록 분해도가 높은 것으로 나타났다.
Wounds that heal with excessive scar formation result in poor functional and aesthetic outcomes. To address this, in our study, visible light cured glycol chitosan (GCH) hydrogels containing endothelial growth factor (EGF) and basic fibroblast growth factor (bFGF) were prepared (GCH-EGF, GCH-FGF and GCH-EGF/FGF) and evaluated their efficacies on the improvement of wound healing in vivo. In vitro release test showed that the growth factors were released in a sustained manner along with initial burst for 24 h. In vitro cell proliferation assay of L-929 mouse fibroblast cell line resulted in the superior ability of GCH-EGF/FGF on the rate. In vivo results demonstrated that the growth factor loaded GCHs further enhanced wound healing compared with GCH. In particular, GCH-EGF/EFG showed the most remarkable wound healing effect among the samples.
Triblock copolymers from poly(ethylene glycol) (PEG) and D,L-lactide or $\varepsilon$-carprolactone were synthesized to prepare semi-interpenetrating polymer network (semi-IPN) with chitosan by U.V. irradiation method. Then, solute permeation through these semi-IPNs hydrogels were investigated. The structures of semi-IPNs were confirmed by FT-IR spectroscopy and wide angle X-ray diffractometer (WAXD). Equilibrium water content (EWC) of these hydrogels was in the range of 67-75%. The crystallinity, thermal properties and mechanical properties of semi-IPNs hydrogels were studied. All the hydrogels revealed a remarkable decrease in crystallinity as compared with PEG macromer itself. The tensile strengths of semi-IPNs hydrogels in dry state were rather high, but those of hydrogels in wet state decreased drastically. The permeabilities of solutes of hydrogels followed the swelling behaviors and were regulated by solute size.
충치 형성 과정에 중요한 불용성 글루칸의 합성과 관련된 sucrose-glucan glucosyltransferase (Gtf)를 Streptococcus mutans Ingbritt 의 배양액에서 염석과, Sephadex G-150, CM-Sephadex, DEAE-Sephadex column을 통과시켜 정제하였다. 회수율 6.3%였으며, 정제율 13배였다. sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE)에서 이 효소의 분자량은 66 kDa이며, 최적 pH와 온도는 각각 6.0과 $40^{\circ}C$이였다. 이 효소는 0.1 mM $Hg^{2+}$, $Cu^{2+}$, $Al^{3+}$에 의하여 22-59% 저해되었다. 이 효소는 2 mM 자이리톨에 의하여 40% 저해 받았으며, 0.05% 수용성 키토산, 글리콜 키토산, 글리콜 키틴에 의하여 35-45% 저해되었다. 키틴 유도체가 Gtf 활성을 억제한다는 보고는 본 연구가 최초이며, 이는 키틴 유도체를 구강청결제의 소재로 활용할 수 있음을 제시한다.
A thennostable chitosanase was purified from Bacillus sp. KFB-C108, by fractionation of 30 to 70% saturation with ammonium sulfate, DEAE-Toyopearl chromatography, Butyl-Toyopearl chromatography, and TSK-Gel HW-55F gel filtration. The purified enzyme showed a single band on sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis, and the molecular weight was estimated to be 48 kDa. The enzyme degraded soluble chitosan and colloidal chitosan, but did not degrade glycol chitosan, chitin, and the other compounds investigated. There was no effect on the chitosanase activity by treatment with chelating agents, alkylating agents, and various metals investigated, and only cobalt ions inhibited the activity. Optimum temperature and pH were $55^{\circ}C$ and 6.5, respectively. The enzyme was stable after heat treatment at $80^{\circ}C$ for 10 min or $70^{\circ}C$ for 30 min and fairly stable in several organic solvents as well. Chitosan was hydrolyzed to $(GlcN)_4$as a major product by incubation with the enzyme.
Two types of chitosanases produced from Aspergillus fumigatus KH-94 were purified by ion exchange and gel permeation chromatography. Molecular weights of the enzymes are 22.5 kDa (chitosanase I) and 108 kDa (chitosanase II). pI, optimum pH, and temperature of chitosanase I are 7.3, 5.5, and 70-$80^{\circ}C$, respectively, and those of chitosanase II are 4.8, 4.5~5.5, and 50~$60^{\circ}C$, respectively. Activities of both chitosanases were increased by $Mn^{2+}$ but inhibited by $Cu^{2+}$ and $Hg^{2+}$ . Chitosanase I has endo-splitting activity that hydrolyzes chitopentaose, chitohexaose, and chitosan to chitobiose, chitotriose, and chitotetraose, whereas chitosanase II has exo-splitting activity that hydrolyzes chitobiose and chitosan to glucosamine. Chitosanase II was found to have transglycosylation activity also in the reaction of 2% more chitooligosaccharides as a substrate and at the initial reaction. The higher degree of deacetylation, the stronger activities of chitosanase Iand II toward chitosans. Both chitosanases could hydrolyze chitosan and glycol chitosan but not chitin, cellulose, and carboxymethyl cellulose. To produce higher degree of polymerization of chitooligosaccharides, chitosanase I was used and yielded 80% of recovery.
Penicillin G acylase (PGA) was immobilized on magnetic Fe3O4@chitosan nanoparticles through the Schiff base reaction. The immobilization conditions were optimized as follows: enzyme/support 8.8 mg/g, pH 6.0, time 40 min, and temperature 25 ℃. Under these conditions, a high immobilization efficiency of 75% and a protein loading of 6.2 mg/g-support were obtained. Broader working pH and higher thermostability were achieved by the immobilization. In addition, the immobilized PGA retained 75% initial activity after ten cycles. Kinetic parameters Vmax and Km of the free and immobilized PGAs were determined as 0.113 mmol/min/mg-protein and 0.059 mmol/min/mg-protein, and 0.68 mM and 1.19 mM, respectively. Synthesis of amoxicillin with the immobilized PGA was carried out in 40% ethylene glycol at 25 ℃ and a conversion of 72% was obtained. These results showed that the immobilization of PGA onto magnetic chitosan nanoparticles is an efficient and simple way for preparation of stable PGA.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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