$\beta$-Immunan was proteoglycan obtained from mycelium of Ganoderma lucidum IY009. In this study, the protective effects of $\beta$-Immunan, against the CDDP induced in vitro cytotoxicity and in vivo renal toxicity, was measured. Concentration dependent cytotoxicities of CDDP in normal kidney cells (Vero, TCMK-l) were reduced by $\beta$-Immunan treatment. Increased renal toxicity factors, such as elevation of blood urea nitrogen (BUN) and serum creatinine, reduction of kidney weight and malonidialdehyde (MDA), by intraperitoneal administration of CDDP in rats was improved. These results indicated that $\beta$-Immunan have a protective effects against the CDDP induced renal toxicity, however, it needed to confirm the detailed mechanism for therapeutic effects.
In this study, the antitumor activities were investigated using $\beta$-lmmunan, a proteoglycan obtained from cultured mycelia of the IY009 strain of Ganoderma lucidum belonging to basidiomycetes. The result showed the significant effect of cytotoxicity test against murine sarcoma 180 and murine lymphocytic leukemia L1210 using immunized macrophage cultures by $\beta$-lmmunan. When intraperitoneally injected at 40 mg/kg/day daily for 10 days, $\beta$-lmmunan inhibited the growth of sarcoma 180 solid tumor in ICR mice by 88.8% (p<0.05). It was also observed that $\beta$-lmmunan increased life span by 85.2% (p<0.01) after treatment of 100 mg/kg/day in BDF1 mice bearing lymphocytic leukemia L1210. And combination therapy with cisplatin (dosage: 4 mg/kg) increased life span by 140.4% (p<0.05) after treatment of 100 mg/kg/day daily in BDF1 mice bearing lymphocytic leukemia L1210.
국내에서 자생하고 있는 75균주의 고등균류를 액체배양하여 얻은 다당류를 $CCl_4$에 의해 독성이 유발된 초대배양 간세포에 가하여 간세포 독성에대한 다당류의 보호효과를 glutamic pyruvate transaminase(GPT)활성을 측정하여 검색한 결과는 다음과 같다. 75균주의 고등균류 중 간세포 보호효과를 나타낸 것은 60균주로 Ganoderma lucidum 15균주 중 13균주, Lentinus edodes 7균주 중 5균주, Pleurotus ostereatus 1균주, Coriolus versicolor 5군주 중 4균주, Lyophyllum spp. 2균주, Grifori frondosa 7균주, Agaicus spp. 3균주, Schizophyllum commune 16균주 중 14균주, Cordyceps spp. 18균주 중 11균주등이었다. 상기 고등균류 중 GPT활성이 80%이하로 나타나, 비교적 간세포 보호효과가 우수한 것은 Ganoderma lucidum IY003 및 IY009, Lentinus edodes IY103, Lyophyllum sp. IY402, Agaicus sp. IY701 및 IY703, Schizophyllum commune IY804, IY810 및 IY818, Cordyceps sp. IY902등 10균주였으며, 이들의 GPT활성은 각각 80.0%, 75.5%, 78.2%, 75.2% 73.6%, 75.0%, 75.1%, 77.7%, 77.5% 및 78.4%로 나타났다.
Antitumor polysaccharides were known to activate complement system and to increase specific serum proteins in mouse, and researcher reported that antitumor activity of polyasccharides might be correlated with their biological properties such as activation of complement system and increase of specific protein $L_{A}$, $L_{B}$ and $L_{C}$ within the mouse serum. In case of several Ganoderma lucidum, there was no correlation between their antitumor activities and their bioloical properties, but the antitumor activities against sarcoma 180 of the alkali extracted crude polysaccharide fractions of the Ganoderma lucidum IY 009. AS, T, AI and M were correlated with their bioloical properties such as anticomplementary activity and intensity of mouse serum protein $L_{A}$, $L_{B}$ and $L_{C}$.
$\beta$-Immunan, a proteoglycan, was isolated from the mycelium of Canoderma lucidum which belongs to a medicinal mushroom. The effects of $\beta$-Immunan on cell-cell and cell-matrix interactions mediated by carbohydrate-recognition and the mechanism responsible for the inhibition of experimental metastasis of Bl6-F10 and B16/BL6 murine melanoma were studied. The results showed that $\beta$-Immunan inhibited Bl6-Fl melanoma cell's adhesion to laminin and asialofetuin-induced homotypic aggregation and reduced invasion against Bl6-F10 murine melanoma cells through matrigel in vivo assay. When $\beta$-Immunan was intraperitoneally administrated to C57B/6 mice bearing B16/BL6 murine melanoma cells, it was decreased the number of pulmonary metastatic colony by the dose dependent manner ranging from 20 to 100 mg/kg/day. The results indirectly indicate that clinical treatment with $\beta$-Immunan might be expected to exhibit anti-metastatic effect. In the pulmonary metastasis, the number of pulmonary metastatic colony of melanoma when $\beta$-Immunan was intraperitoneally administrated to C57BL/6 mice bearing B16/BL6 murine melanoma cells by intravenous injection were decreased by the dose dependent manner ranging from 20 to 100 mg/kg/day.
The highest antitumor activity was observed in water soluble AS fraction of the Ganoderma lucidum IY 009. AS fraction did not show any cytotoxicity on sarcoma 180 cell but stimulated antibody production, opsonization of macrophage in ICR mouse and superoxide ion production from isolated macrophage. AS fraction activated complement C3 in human serum, and their antitumor activity was inhibited by EDTA, a chelator of cation related complementary activation. AS fraction exerted om prolong of life span and ingibition of tumor growth in the leukemia P388 or L1210 transplanted inbreed mouse,k BDF1 but krestin did not. AS fraction did not show any serious and lethal effects through oral administration on ICR mouse, and LD$_{50}$ of those was above 2,230 mg/kg.
약리효과를 가지고 있다고 보고된 고등균류중 영지, 치마버섯및 동충하초의 계통 분류를 위해 동위효소 pattern을 비교한 결과는 다음과 같다. 자생지역이 서로 다른 영지의 동위효소 pattern은 IY003, IY004, IY005 및 IY008 균주사이에서는 70%이상의 유사도 지수를 보여, 높은 유연관계를 나타내었으나, IY009와 IY010의 동위효소 pattern은 많은 차이를 보여 유연관계가 낮았다. 치마버섯의 경우, 가장 높은 유연관계를 보인 균주는 IY803과 IY805로 이들의 유사도지수는 57%로 나타났다. 나머지 균주들 간의 유사도지수는 40%에서 56%정도를 나타냈다. 자낭균류에 속하는 동충하초는 영지나 치마버섯 등의 담자균류와는 달리 균주간에 유사도지수가 비교적 낮았다. 동충하초중 나방이류에서 분리된 IY901과 IY904사이의 유사도지수는 67%였고, 풍뎅이류와 나방이류에서 각각 분리된 IY903과 IY904 역시 67%의 유연관계를 보였으며, 애벌레류로 부터 분리된 IY905와 IY909사이의 유사도지수는 42%로 시험된 동충하초 균종 중 비교적 높은 유연관계를 나타내었으나, 나머지 균주들 간의 유사도 지수는 12%에서 43%를 나타내었다.
It has been reported that G009, polysaccharide isolated from Ganoderma lucidum IY009 has various pharmacological effects, such as antinflamatory, antiviral, anticarcinogenic and immunmodulation effects. The purpose of this study was to determine the subacute toxicity of orally administered G009 in Sprague-Dawley rats. Groups of 40 male and 40 female rats were gavaged with 0, 500, 1,000 or 2,000 mg/kg/day for 30 days. No drug-related deaths and clinical morbidities were resulted. There was no drug-related effect on the body weight gain, food consumption and water consumption. Statistically significant changes were observed in several hematological and biochemical parameters of G009-treated groups; however, most of these changes were within normal range and had no relationship to dosage. Urinalysis and bone marrow biopsy showed no remarkable changes in all treated groups. Gross necropsy and hisopathology revealed no evidence of specific toxicity related to G009. Our data indicate that no-observed effect level of G009 is estimated to be above 2,000 mg/kg/day in rats.
영지 균사체로부터 종양 면역 활성이 우수한 다당류를 얻기 위하여 여러 탄소원을 이용하여 균사체를 배양하였다. 배앙된 균사체로부터 ganoderan을 추출하고 이들의 조성과 항암 및 항보체 활성능을 알아보았다. 여러 탄소원은 영지 균사체에 의해 기질로 이용될 수 있으나 ${\beta}-glucan$성 다당류인 ganoderan의 생성에는 상당한 차이를 보였다. 균사체 생육이 우수한 탄소원에서 배양된 균사체의 경우, 비수용성(WI) 다당류의 생성이 증가하였고, 생육이 저하된 탄소원에서는 수용성(WS) ganoderan이 상대적으로 증가하였으며, 포도당을 탄소원으로 사용할 경우 약 $5.2{\sim}16%$가 알칼리 가용성 ganoderan으로 도입되었다. 탄소원에 따라 수획된 ganoderan은 포도당을 주 구성당으로 이루어진 ${\beta}-glucan$성 다당류이며 만노오스, 과당 등이 포함되어 있었으나, 비수용성 ganoderan의 경우 수용성보다 포도당의 함량이 약 $20{\sim}40%$ 더 많이 포함되었으며 약 16개의 아미노산으로 구성된 소량의 단백질이 결합되어 있었다. WI은 glucose가 주 구성당이었으나 WS는 여러 단당들이 상대적으로 많이 포함되어 있는 heteroglucan의 성격을 보였다. 탄소원에 따라 배양된 균사체의 알칼리 추출된 ganoderan 가운데 항암 및 항 보체 활성이 가장 우수한 것은 갈락토오스를 탄소원으로 이용한 ganoderan이었으며 항보체 활성(ITCH 50,%)치가 35.7%였고, 특히 균사체의 생장이 낮은 탄소원에서 수획한 ganoderan이 항보체 활성이 높게 나타났다. Sarcoma 180이 피하이식된 마우스에 20 mg/kg씩 복강 투여하여 항암 활성을 검토한 결과, 항보체 활성실험에서와 마찬가지로 갈락토오스를 탄소원으로 이용한 ganoderan-GAL이 83.6%의 암 저지율을 보여 항암 활성이 가장 높았으며, 이는 약 5%의 단백질이 결합된 ${\beta}-glucan$성 다당류로 55%의 포도당, 13%의 만노오스, 12%의 과당 및 소량의 galactose, xylose, ribose등으로 구성된 분자량 30 kD의 다당류이다.
A polysaccharide, G009, isolated from Ganoderma lucidum IY 009, was subjected to investigating on general pharmacology. This material at the large oral doses of 1000 and 2000 mg/kg in mice did not exhibit any abnormal behaviors and another effects on central nervous system. It also had no influences on hexobarbital-induced sleeping time, rotarod test and spontaneous activity test at each oral dose of 1000 mg/kg in mice. No effects on the body temperature and on acetic acid induced writhing syndrome in mice were observed with its oral administration at 1000 mg/kg, and the convulsions induced by strychnine and pentetrazole were not inhibited at its oral doses of 1000 mg/kg in mice. The solution of G009 as given intravenously at the doses of 30 and 60 mg/kg in rabbit had no influences on blood pressure and respiration rates and depth. In isolated organs of rat uterus and fundus muscles and guineapig ileum and trachea, it did not show any contraction or relaxation at the concentrations of 2$\times$10$^{-3}$ g/ml, and the contractive actions produced by oxytocin, acetylcholine, serotonin and histamine were not inhibited at the same doses. This material showed no effect on intestinal propulsion test in mice and gastric secretion in rats at the oral doses of 1000 mg/kg. However, it is interesting that the material exhibited potent inhibition of acidified aspirin induced gastric damage at the doses of 500 and 1000 mg/kg in rats.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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