The antifungal effects of polyposphates on the growth and T-2 toxin production of Fusarium sporotrichioides M-1-1 were investigated. The growth of the strain was significantly inhibited in the potatoes dextrose agar medium treated with 1.5% polyphosphates or more. When we checked T-2 toxin by the indirect competitive ELISA, the strain produced 11.25 ug/ml and 10.90 ug/ml levels of T-2 toxin rice and corn containing 50% moisture contents, respectively. However, T-2 toxin was little detected in rice medium and corn medium with 1.5% polyphosphates addition for short(14 days) and prolonged incubation time(45 days). We also observed the destruction of cell wall and outflow of cell ingredients with 1% polyphosphates treatment to the strain. Therefore, moisture and polyphosphates greatly effected on the growth and T-2 toxin production of the strain.
The cultural and physiological conditions for the T-2 toxin [4,15-diacetoxy-8-(3-mety1butyloxy)-12,13- epoxy-trichothec-9-en-3-01, $C_{24}H_{30}O_9$] production by Fusarium spp. were studied. Thin layer chromatography (TLC) assay and the microbiological assay uslng Rhodotomla rubra were used to quantitate tbe T- 2 toxin. Among the four strains of Fusarium spp., F tn'cinctum NRRL 3299 was best for T-2 toxin production. In solid culture, white com grit medium was best for T-2 toxm production. Temperature played a critical role in the production of T-2 toxin. T-2 toxin production was favored by long duration of low-temperature incubation. The growth and toxin production were relatively high on galactose, fructose, glucose, and sucrose media, when each was used as a sole carbon source, and relatively low on sorbitol, glycerol, and lactose media. For nitrogen sources, $NH_4^(+) and NO_3^{-}were used well as a sole nitrogen source, but $NO_2^-$ was not used. Initial pH and speed of shaker also affected the production of T-2 toxin. From temperature shifting experiment, it is clear that T-2 toxin metabolic pathway is regulated by temperature-dependent enzyme depression or enzyme induction system.
Four isolates of Fusarium sporotrichioides obtained from the corn producing area were tested for their toxicities by feeding the crude cultures to rats. Three out of four isolates were highly toxic and killed all rats within 3-4 days after feeding. The chemical analyses of toxic cultures by thin layer chromatography and gas chromatography-mass spectrometry revealed that two isolates from Jeongsun district produced T-2 toxin and its related trichothecenes. This is the first report that F. sporotrichioides isolates produce T-2 toxin in Korea.
This study was designed to observe the effects of T-2 toxin on total cholesterol and lipid concentration in rat serum. T-2 toxin is a secondary metabolite produced by Fusarium sp. which is often found on agricultural products including cereals, and it is a causal material of liver injuries in cattle and humans. When we fed rats with standard diet treated with T-2 toxin, the body weight and feed consumption of rats treated T-2 toxin were decreased. As the results of lipid analysis, the concentrations of total cholesterol and free cholesterol in serum of treated rats were increased compared to non-fed control group, On the other hand, the levels of triglyceride and phospholipid in the serum of T-2 toxin treated experimental groups were declined. In conclusion, T-2 toxin largely influenced on the total cholesterol and lipid levels in rat serum.
Mycotoxins are toxic secondary metabolites produced by fungi. They can be present in where agricultural-based commodities are contaminated with toxigenic fungi. These mycotoxins cause various toxicoses in human and livestock when consumed. Small grains including corn, barley, rice or wheat are frequently contaminated with mycotoxins due to infection mainly by toxigenic Fusarium species and/or under environment favorable to fungal growth. One of the most well-known Fusarium toxin groups in cereals is trichothecenes consisting of many toxic compounds. Deoxynivalenol (DON), nivalenol (NIV), T-2 toxin, and various derivatives belong to this group. Zearalenone and fumonisin (FB) are also frequently produced by many species of the same genus. In order to monitor Korean cereals for contamination with Fusarium and other mycotoxigenic fungal species as well, barley, corn, maize, rice grains, and soybean were collected from fields at harvest or during storage for several years. The fungal colonies outgrown from the grain samples were identified based on morphological and molecular characteristics. Trichothecene chemotypes of Fusarium species or presence of FB biosynthetic gene were determined using respective diagnostic PCR to predict possible toxin production. Heavy grain contamination with fungi was detected in barley, rice and wheat. Predominant fungal genus of barley and wheat was Alternaria (up to 90%) while that of rice was Fusarium (~40%). Epicoccum also appeared frequently in barley, rice and wheat. While frequency of Fusarium species in barley and wheat was less than 20%, the genus mainly consisted of Fusarium graminearum species complex (FGSC) which known to be head blight pathogen and mycotoxin producer. Fusarium composition of rice was more diverse as FGSC, Fusarium incarnatum-equiseti species complex (FIESC), and Fusarium fujikuroi species complex (FFSC) appeared all at considerable frequencies. Prevalent fungal species of corn was FFSC (~50%), followed by FGSC (<30%). Most of FFSC isolates of corn tested appeared to be FB producer. In corn, Fusarium graminearum and DON chemotype dominate within FGSC, which was different from other cereals. Soybeans were contaminated with fungi less than other crops and Cercospora, Cladosporium, Alternaria, Fusarium etc. were detected at low frequencies (up to 14%). Other toxigenic species such as Aspergillus and Penicillium were irregularly detected at very low frequencies. Multi-year survey of small grains revealed dominant fungal species of Korea (barley, rice and wheat) is Fusarium asiaticum having NIV chemotype.
T-2 toxin is one of mycotoxins produced by fungi such as Fusarium spp. and possesses a potent cytotoxicity to eukaryotic cell. The contamination of mycotoxins in cereals and feedstuffs is one of the great concerns in health authorities. Therefore, the development of the specific, sensitive and simplified analysis method for T -2 toxin is required. During more than ten years, several chemical and biological analysis methods were proposed and applied for the detection and quantification of T-2 toxin. TLC, GLC-FID and GC-MS are widely employed, but these methods required numerous clean-up procedures before analysis, and the detection limit for T-2 toxin is more than 10 ppb. Biological analysis methods with dermal tissues and cultured cells are not specific to T-2 toxin, since T-2 toxin and other related derivatives possess a similar toxicological activity although their relative activity is different each otber. Based on tbe specific reaction between antibody and antigen, the authors tried to introduce the immunochemical methods for determination of T-2 toxin. The enzyme-linked immunosorbent assay method using monoclonal antibody for T-2 toxin was applied to analyse T-2 toxin. The detection limit of T-2 toxin by ELISA method was 0.1 ppb. The correlation between ELISA and GC-MS method on these samples was very high. ELISA method developed for the detection and quantification of T -2 toxin in this paper possesses simplicity, high sensitivity and specific for T-2 toxin. Furthermore, the ELISA method with T-2 toxin monoclonal antibody was an excellent tool for the screening of Fusarium spp. which was suspected to produce T-2 toxin.
T-2 toxin and HT-2 toxin, belong to type A trichothecences, are the most toxic mycotoxins among the trichothecene family. These mycotoxins are commonly found in cereals such as maize, wheat, barley, oats and rice, and their occurrence in food can be of concern. This review investigated the current trends of patents and researches on T-2 toxin and HT-2 toxin pertaining to natural occurrence, toxicity, metabolism, risk assessment, analytical and screening methods, and reduction/detoxification techniques. As compared with other $Fusarium$ mycotoxins, there are limited data for natural occurrence and risk assessment, and regulatory limit and official analytical methods on T-2 toxin and HT-2 toxin in domestic and foreign countries. In particular, selective deacetylation at the C3 and/or C4 positions of T-2 toxin by carboxyesterase present in foods was reported to cause the disappearance of T-2 and the extremely high HT-2 recoveries. Currently, regulatory limits for T-2 and HT-2 are under discussion in EU. For enforcement purposes it is essential to have available precise and reliable analytical methods applicable at the regulatory levels for the T-2 toxin and HT-2 toxin and relevant commodities. In addition, a further study on natural occurrence, risk assessment and reduction/detoxification techniques will be recommended.
A total of 509 rice panicle samples were collected at harvest time from fields in 8 provinces from 2010 to 2014. One hundred five grains per sample were plated on potato dextrose agar and 6,658 Fusarium isolates were obtained; among them, 67 were identified as Fusarium armeniacum by sequencing the translation elongation factor $1{\alpha}$ ($EF-1{\alpha}$) and confirmed by their morphological and cultural characteristics. Considerable variation in conidial size, colony color and $EF-1{\alpha}$ sequences was observed among the fungal isolates. The ability of 24 F. armeniacum isolates to produce T-2 and HT-2 toxin in potato sucrose agar was determined using liquid chromatography-mass spectrometry. Twenty one isolates produced T-2 and HT-2 toxin, resulting in varying toxin levels among the isolates. The results show that Korean isolates of F. armeniacum have diversity with respect to morphological, cultural, genetic, and toxigenic properties.
Fusarium head blight is one of the most important and most common diseases of winter wheat. In order to better understanding this disease and to assess the correlations between different factors, 30 cultivars of this cereal were evaluated in a two-year period. Fusarium head blight resistance was evaluated and the concentration of trichothecene mycotoxins was analysed. Grain samples originated from plants inoculated with Fusarium culmorum and naturally infected with Fusarium species. The genetic distance between the tested cultivars was determined and data were analysed using multivariate data analysis methods. Genetic dissimilarity of wheat cultivars ranged between 0.06 and 0.78. They were grouped into three distinct groups after cluster analysis of genetic distance. Wheat cultivars differed in resistance to spike and kernel infection and in resistance to spread of Fusarium within a spike (type II). Only B trichothecenes (deoxynivalenol, 3-acetyldeoxynivalenol and nivalenol) produced by F. culmorum in grain samples from inoculated plots were present. In control samples trichothecenes of groups A (H-2 toxin, T-2 toxin, T-2 tetraol, T-2 triol, scirpentriol, diacetoxyscirpenol) and B were detected. On the basis of Fusarium head blight assessment and analysis of trichothecene concentration in the grain relationships between morphological characters, Fusarium head blight resistance and mycotoxins in grain of wheat cultivars were examined. The results were used to create of matrices of distance between cultivars - for trichothecene concentration in inoculated and naturally infected grain as well as for FHB resistance Correlations between genetic distance versus resistance/mycotoxin profiles were calculated using the Mantel test. A highly significant correlation between genetic distance and mycotoxin distance was found for the samples inoculated with Fusarium culmorum. Significant but weak relationships were found between genetic distance matrix and FHB resistance or trichothecene concentration in naturally infected grain matrices.
In order to detect the T-2 toxin accumulation in the animal tissues, T-2 toxin, produced by Fusarium sporotrichioides M-1-1, was injected to mouse by 0, 1 and 2 mg per kilogram of body weight, respectively, and T-2 toxin extracted from serum and organs were analyzed by the indirected competitive ELISA. The indirect competitive ELISA established in the laboratory can be check less than 0.1 ppb level of T-2 toxin and average recovery of T-2 toxin spiked was 80~113% in animal samples such as serum, liver and kidney. After 6 weeks of treatment with 2 mg of T-2 toxin per kg body weight, T-2 toxin was accumulated in serum (133.0 ng/ml), liver(1.4 ng/g) and kidney(14.3 ng/g) of mouse injected with 2 mg of toxin per kg body weight.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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