본 연구는 Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici(FOL)에 의해 발생하는 토마토 시들음병의 간편 대량 유묘 검정 방법을 확립하고자 수행하였다. 토마토 시들음병 연구에는 root dip 접종 방법을 많이 사용하고 있으나, 대량의 시료에 대한 병 저항성 검정에서 이 방법은 시간이 많이 소요되고 힘이 많이 드는 어려움이 있다. 대량 검정을 위한 간편한 접종 방법을 선발하고자 FOL race 2와 3 균주를 root dip, tip 및 scalpel 등의 방법으로 접종하고 두 토마토 품종에서 시들음병 발생을 조사하였다. Tip 방법에 의해 접종한 토마토는 root dip 방법으로 접종한 토마토보다 더 낮은 발병도를 보였으며 개체 간 발병도 차이가 더 컸다. 반면에 scalpel방법은 root dip 방법에서처럼 토마토 시들음병에 대하여 분명한 감수성과 저항성 반응을 나타내었다. 이들 결과로부터 대량 시료를 위한 토마토 시들음병 저항성 검정에서 root dip 접종 방법보다 더 간단하고 효율적인 scalpel 이용 접종 방법을 선발하였다. Scalpel 접종 방법은 실험한 접종원 농도 및 재배 온도 등의 발병 조건에 의해 토마토 품종들의 저항성 및 감수성 반응은 영향을 받지 않았다. 따라서 토마토 시들음병에 대한 대량 유묘 검정 방법으로 연결 포트에서 재배한 2엽기 토마토 유묘의 뿌리를 scalpel을 이용하여 상처를 준 후에 FOL 포자 현탁액을 관주하여 $25-30^{\circ}C$ 생육상에서 하루에 12시간씩 광을 조사하면서 4주 동안 재배하는 것을 제안한다.
세 개의 race가 보고되어 있는 Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici는 전 세계적으로 그 피해가 막대한 토마토 시들음병의 원인균으로 알려져 있다. 토마토 유전자원 1,906 자원을 대상으로 토마토 시들음병 race 3 저항성 유전자 I-3의 유전형을 high resolution melting 법을 사용하여 분석하였다. 총 97점의 자원에서 homozygous resistant 피크가 확인되었으며, 8점은 이형접합성, 1,801점은 감수성으로 나타났다. 저항성 자원 97점의 종 분포는 S. lycopersicum var. lycopersicum가 65점, S. lycopersicum var. cerasiforme가 13점, 12종의 야생근연종 중에서 저항성 자원은 S. pimpinellifolium 8점, S. habrochaites 3점, S. corneliomulleri 3점, S. galapagense 1점, S. peruvianum 3점, S. chilense 1점으로 총 19점이었다. 하지만 좀 더 정확한 시들음병 저항성 평가를 위하여 추후에 race 1과 2에 대한 유전분석과 생물검정이 필요하다.
여러 토양에서 분리한 400여 개의 방선균 균주에 대해 4가지 식물병원성 진균에 대한 항진균 활성을 조사하였으며 그 중 Streptomyces costaricanus HR391 균주는 PDB 배지에서 식물병원성 진균인 Fusarium oxysporum f. sp. raphani, F. oxysporum f. sp. niveum, F. oxysporum f. sp. lycopersici와 Rhizoctonia solani의 균사 생장을대조군과 비교하여 각각 26.5, 26.2, 21.2와 23.8% 저해하였다. S. costaricanus HR391은 항진균물질인 siderophore를 $98{\mu}M$을 생성할 뿐만 아니라 유화활성을 나타내며 막지질을 파괴할 수 있는 생물계면활성제인 rhamnolipid와 lipopeptide인 iturin A와 surfactin를 생성하였다. 또한 진균 세포막을 분해할 수 있는 chitinase와 glucanase 활성도 나타내었으며 병원균의 막을 파괴하는 AMP와 항생물질 phenazine도 분비하였다. 이외에도 식물생장 촉진활성을 갖는 zeatin, gibberellin과 indole acetic acid 같은 식물호르몬도 생성하였다. 이와 같이 항진균 활성을 나타내는 S. costaricanus HR391 균주는 다양한 종류의 항진균 물질의 상승작용과 더불어 높은 생물계면활성이 본 균주의 항진균 활성에 큰 역할을 하는 것으로 보이며 친환경적인 생물학적 항진균제로서 활용이 가능할 것으로 기대된다.
Antifungal bacteria for biological control of plant diseases or production of novel antibiotics to plant pathogens were isolated in 1997 from various soils of Ansung, Chunan, Koyang, and Paju in Korea. Sixty-four bacterial strains pre-screened from approximately 1,400 strains were tested on V-8 juice agar against eight plant pathogenic fungi using in vitro bioassay technique for inhibition of mycelial growth. Test pathogens were Alternaria mali, Colletotrichum gloeosporioides, C. orbiculare, Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum, F. oxysporum f. sp. lycopersici, Magnaporthe grisea, Phytophthora capsici, and Rhizoctonia solani. A wide range of antifungal activity of bacterial strains was found against the pathogenic fungi, and strain RC-B77 showed the best antifungal activity. Correlation analysis between inhibition of each fungus and mean inhibition of all eight fungi by 64 bacterial strains revealed that C. gloeosporioides would be best appropriate for detecting bacterial strains producing antibiotics with potential as biocontrol agents for plant pathogens.
A series of 12 pyrimidine derivatives were prepared and tested in vitro against growth, sporulation and nucleic acids of Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici and Helminthosporium oryzae. Intorduction of thiazole ring together with two aryl groups to 2-aminopyrimidine induced drastic toxicity for both fungi. Pyrimidine derivatives with aryl groups were less toxic. Nitro groups were found to enhance the toxicity of the pyrimidine derivatives especially when substituted in ortho-position of the aryl groups. Inhibition of nudeic acids synthesis of both fungi was attributed mainly to the presence of thiazole ring.
노르웨이의 Oslo시 지역의 토양시료로부터 분리된 Bacillus sp. KMU-991를 이용하여 고추탄저병균인 Colletotruchum gloeosporioides KACC 40804에 대한 항진균 활성을 위한 배양 조건을 조사하였다. 항진균 물질의 생산은 기본배지로 TSB를 사용하였으며 탄소원으로 1.0% mannitol과 질소원으로 1.0% ammonium chloride를 첨가하였을 매 가장 높은 항진균 활성을 나타내었다. 배양조건으로는 $30^{\circ}C$, 180 rpm, 48시간 배양하였을 때 가장 높은 항진균 활성을 나타내었다. $30{\sim}60%$ ammonium sulfate 침전물을 첨가하였을 때 가장 양호한 항진균 활성을 나타내었으며 butanol을 이용하여 배양액 중에 존재하는 항진균 물질을 회수하여 다양한 작물병원성 곰팡이에 대한 spectrum을 조사한 결과 B. cinerea KACC 40573, C. orbiculare KACC 40808, F. oxysporum f. sp. radicus-lycopersici KACC 40537, P. cambivora KACC 40160, 그리고 R. solani AG-4 KACC 40142등에 대하여도 높은 항진균 활성을 나타내었다.
Recently, strategies for controlling Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (Fol), the causal agent of Fusarium wilt of tomato, focus on using effective biocontrol agents. In this study, an analysis of the biocontrol and plant growth promoting (PGP) attributes of 11 isolates of loamy soil Bacillus spp. has been conducted. Among them, the isolates B.PNR1 and B.PNR2 inhibited the mycelial growth of Fol by inducing abnormal fungal cell wall structures and cell wall collapse. Moreover, broad-spectrum activity against four other plant pathogenic fungi, F. oxysporum f. sp. cubense race 1 (Foc), Sclerotium rolfsii, Colletotrichum musae, and C. gloeosporioides were noted for these isolates. These two Bacillus isolates produced indole acetic acid, phosphate solubilization enzymes, and amylolytic and cellulolytic enzymes. In the pot experiment, the culture filtrate from B.PNR1 showed greater inhibition of the fungal pathogens and significantly promoted the growth of tomato plants more than those of the other treatments. Isolate B.PNR1, the best biocontrol and PGP, was identified as Bacillus stercoris by its 16S rRNA gene sequence and whole genome sequencing analysis (WGS). The WGS, through genome mining, confirmed that the B.PNR1 genome contained genes/gene cluster of a nonribosomal peptide synthetase/polyketide synthase, such as fengycin, surfactin, bacillaene, subtilosin A, bacilysin, and bacillibactin, which are involved in antagonistic and PGP activities. Therefore, our finding demonstrates the effectiveness of B. stercoris strain B.PNR1 as an antagonist and for plant growth promotion, highlighting the use of this microorganism as a biocontrol agent against the Fusarium wilt pathogen and PGP abilities in tomatoes.
The induction of growth promotion on numerous crops by rhizobacteria is a well documented phenomenon. In case of tomato (Lycopersicon esculentum), fruit yield is higher in replant soil than that in fresh soil. To investigate what kind of rhizobacterium is involved, microbial community in rhizosphere and on rhizoplane of tomato plants from each soil was analyzed by dilution plating on selective media. Many Gram-negative bacteria and actinomycetes were isolated from tomato in replant soil. One Gram-negative rhizobacterium isolated was identified as Pseudomonas putida based on its biochemical characteristics, fatty acid methyl ester analysis and 16S rDNA sequence. This bacterium designated strain 17 inhibited the growth of Pseudomonas corrugata, and increased growth of tomato seedlings. In addition, its culture filtrate inhibited conidial germination of plant-pathogenic fungi such as Fusarium oxysporum f. sp. radicis-lycopersici, F. oxysporum f. sp. cucumerinum, and Nectria radicicola. Scanning electron microscopy revealed strain 17 colonized and persisted on the epidermal surfaces of tomato radicles and roots. These results suggest that P. putida strain 17 may serve as a biological control agent to suppress multiple soil-borne diseases for tomato plants. Increased microbial populations that suppress deleterious microorganisms including pathogens could be one of the major factors in increased tomato yield in replant soil.
Three plant growth-promoting yeasts and two rhizobacteria were tested for controlling tomato wilt caused by Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici under green-house and field conditions. Under greenhouse and field conditions, all treatments were significantly reduced disease severity of tomato wilt relative to the infected control. The highest disease reductions in pots (75.0, 67.4%) and field (52.5, 42.4%) were achieved by Azospirillum brasilense and Bacillus subtilis compared to infected control. Under field condition all treatments produced the highest tomato yield compared to the control plants inoculated with the pathogen.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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