An attempt has been made to investigate the possible occurrence of aflatoxins, a group of micotoxin which are toxic metabolites produced by Aspergillus flavus, and aflatoxin like substances in fungal fermented soybean products such as meju and soybean paste. Chloroform extracts from 15 samples which has been defated with petroleum ether are subjected to separations with thin-layer chromatography on silica gel washed with methanol prior to film coating, improves the chromatographic separation and ultraviolet absorption spectral identification. In addition to fluorescencing spot having an Rf value which is same as aflatoxin $B_1$, many of the fluorescencing spots have been occurred in every sample examined. Each fluorescencing spot is scratched and the ethanol extracts are subjected to further separation with thin-layer chromatography. Each fluorescence substance is eluted with ultra violet transparent absolute ethanol and the ultraviolet absorption spectra are checked. None of the absorption curve of eluates shsow accordance with the curve of aflatoxin. 2, 4-Dinitrophenyl hydrazine reagent, Tollen's reagent and ninhydrin reagent are applied on the chromatogram- The data show that aflatoxin is not present in any of the fungal preparations examined.
Endophytic fungi predominantly inhabit grasses, and produce a variety of beneficial metabolites for plant growth, as well as help their hosts against pathogens and herbivores. Current study was focused on plant growth promoting activity of endophytic fungi inhabited in the roots of sand dune grasses. We collected 49 fungal isolates from the roots of four most common sand dune grasses and screened them for their growth promoting capacity. Results showed that 37 fungal isolates (75.5%) promoted plant height and shoot length of waito-c rice, 11 fungal isolates (22.5%) suppressed it, while 1 fungus (2%) showed no effect on the growth attributes. The fungal strain Gibberella fujikuroi, along with distilled water and Czapek broth medium, were taken as control for this experiment. It was concluded that a major proportion of endophytic fungi inhabited in the sand dune plants produce metabolites, and thus help in growth and development of the host plant.
Insects constitute the largest and most diverse group of animals in the world. They also serve as the hosts or nutrient sources for an immense assemblage of pathogens, parasites, and predators. More than 700 fungal species from 100 genera have adopted an entomopathogenic lifestyle. Although entomopathogenic fungi were studied as only biocontrol agents against a variety of pests in various countries, it has been recently focused their additional roles in nature. They are antagonists to/against plant pathogens, endophytes, and possibly even plant growth promoting agents. The potential antimicrobial effect against fungal plant pathogens by an isolate of entomopathogenic fungi including Beauveria bassiana, Lecanicillium spp., and Isaria fumosorosea have been reported since late 1990s, but wasn't reported pathogenicity of the isolate against pests. Later, a Canadian Lecanicillium sp. isolate and L. longisporium isolated from Vertalec$^{(R)}$ showed simultaneous control effect against both aphid and cucumber powder mildew. Therefore, the antimicrobial activities of 342 fungi isolates collected from various regions and conditions in Korea were evaluated against plant pathogenic fungus Botrytis cinerea using dual culture technique on agar plate. As a result, 186 isolates (54.4%) shown the antifungal activity against B. cinerea. The culture filtrates of selected fungi completely suppressed the growth of the microorganisms, indicating that suppression was due to the presence of antimicrobial substances in the culture filtrate. Mode of action of these fungi against insect involves the attachment of conidia to the insect cuticle, followed by germination, cuticle penetration, and internal dissemination throughout the insect. During infection process, secreted enzymes, proteinous toxins, and/or secondary metabolites secreted by entomopathogenic fungi can be used to overcome the host immune system, modify host behavior, and defend host resources. Recently, secondary metabolites isolated from entomopathogenic fungi have been reported as potential bioactive substances. Generally, most of bioactive substances produced by entomopathogenic fungi have reported low molecular weight (lower than 1,000 g/mol) as peptide and, in contrast the high molecular weight fungal bioactive substances are rare. Most substances based on entomopathogenic fungi were shown antimicrobial activity with narrow control ranges. In our study we analyzed the antimicrobial substances having antagonistic effects to B. cinerea. Antimicrobial substances in our fungal culture filtrates showed high thermostability, high stability to proteolytic enzymes, and hydrophilicity and their molecular weights were differed from substance. In conclusion, entomopathogenic fungi showed pathogenicity against insect pests and culture filtrate of the fungi also shown to antimicrobial activity. In the future, we can use the entomopathogenic fungi and its secondary metabolites to control both insect pest control and plant pathogenic fungi simultaneously.
Endophytic fungi were isolated from roots of six halophytes in Suncheon Bay. The endophytic fungi of 35 species isolated from halophytes were identified by internal transcribed spacer (ITS) containing the ITS1, 5.8s, and ITS2 regions. All fungal strains were analyzed to diversity at the genus level. Fungal culture filtrates (FCF) of endophytic fungi were treated to Waito-c rice (WR) seedling for plant growth-promoting verification. It was confirmed that fungal strain Sj-2-2 provided plant growth promotion (PGP) to WR seedling. Then, PGP of Suaeda japonica was confirmed by treating culture filtrate of Sj-2-2. As a result, it was verified that culture filtrate of Sj-2-2 had more advanced PGP than positive control when treated to S. japonica. The secondary metabolites involved in culture filtrate of Sj-2-2 were identified by HPLC and GC-MS SIM analysis. The presence of physiologically bioactive gibberellins (GAs) and other inactive GAs in culture filtrate of Sj-2-2 was detected. The molecular analysis of sequences of Sj-2-2 showed the similarity to Penicillium sp. of 99% homology. The PGP of Sj-2-2 as well as symbiosis between endophytic fungi and halophytes growing naturally in salt marsh was confirmed. Sj-2-2 was identified as a new fungal strain producing GAs by molecular analysis of sequences. Consequently, the Sj-2-2 fungal strain was named as Penicillium sp. Sj-2-2. In this study, the diversity of endophytic fungi isolated from roots of halophytes in salt marsh and the PGP of a new gibberellin-producing fungal strain were confirmed.
Lactobacillus casei KC-324 was tested for its ability to inhibit aflatoxin production and mycelial growth of Aspergillus flavus ATCC 15517 in liquid culture. flatoxin $B_{1}$ biosynthesis and mycelial growth were inhibited in both simultaneous culture and individual antagonism assays, suggesting that the inhibitory activity was due to extracellular metabolites. produced in cell-free supernatant fluids of the cultured broth of L. casei KC-324. In cell-free supernatant fluids of all media tested, deMan, Rogosa and Sharpe broth, potato dextrose broth, and Czapek-Dox broth+1% yeast extract showed higher antiaflatoxigenic activity. In these case, fungal growths, however, was not affected as measured by mycelial dry weight. The antiaflatoxigenic metabolites from L. casei KC-324 were produced over wide range of temperatures between $25^{\circ}C$ and $37^{\circ}C$. However, these metabolites were not thermostable since the inhibitory activity of the supernatant was inactivated within 30 minutes at $100^{\circ}C$ and $121^{\circ}C$. The inhibitory activity was not influenced by changing pH of supernatant between 4 and 10. However, the antiaflatoxigenic activity was slightly reduced at pH 10.
In our previous studies, Bacillus megaterium KU143, Microbacterium testaceum KU313, and Pseudomonas protegens AS15 have been shown to be antagonistic to Aspergillus flavus in stored rice grains. In this study, the biocontrol activities of these strains were evaluated against Aspergillus candidus, Aspergillus fumigatus, Penicillium fellutanum, and Penicillium islandicum, which are predominant in stored rice grains. In vitro and in vivo antifungal activities of the bacterial strains were evaluated against the fungi on media and rice grains, respectively. The antifungal activities of the volatiles produced by the strains against fungal development and population were also tested using I-plates. In in vitro tests, the strains produced secondary metabolites capable of reducing conidial germination, germ-tube elongation, and mycelial growth of all the tested fungi. In in vivo tests, the strains significantly inhibited the fungal growth in rice grains. Additionally, in I-plate tests, strains KU143 and AS15 produced volatiles that significantly inhibited not only mycelial growth, sporulation, and conidial germination of the fungi on media but also fungal populations on rice grains. GC-MS analysis of the volatiles by strains KU143 and AS15 identified 12 and 17 compounds, respectively. Among these, the antifungal compound, 5-methyl-2-phenyl-1H-indole, was produced by strain KU143 and the antimicrobial compounds, 2-butyl 1-octanal, dimethyl disulfide, 2-isopropyl-5-methyl-1-heptanol, and 4-trifluoroacetoxyhexadecane, were produced by strain AS15. These results suggest that the tested strains producing extracellular metabolites and/or volatiles may have a broad spectrum of antifungal activities against the grain fungi. In particular, B. megaterium KU143 and P. protegens AS15 may be potential biocontrol agents against Aspergillus and Penicillium spp. during rice grain storage.
Fungal cytochrome P450 (CYP) enzymes catalyze versatile monooxygenase reactions and play a major role in fungal adaptations owing to their essential roles in the production avoid metabolites critical for pathogenesis, detoxification of xenobiotics, and exploitation avoid substrates. Although fungal CYP-dependent biotransformation for the selective oxidation avoid organic compounds in yeast system is advantageous, it often suffers from a shortage avoid intracellular NADPH. In this study, we aimed to investigate the use of bacterial glucose dehydrogenase (GDH) for the intracellular electron regeneration of fungal CYP monooxygenase in a yeast reconstituted system. The benzoate hydroxylase FoCYP53A19 and its homologous redox partner FoCPR from Fusarium oxysporum were co-expressed with the BsGDH from Bacillus subtilis in Saccharomyces cerevisiae for heterologous expression and biotransformations. We attempted to optimize several bottlenecks concerning the efficiency of fungal CYP-mediated whole-cell-biotransformation to enhance the conversion. The catalytic performance of the intracellular NADPH regeneration system facilitated the hydroxylation of benzoic acid to 4-hydroxybenzoic acid with high conversion in the resting-cell reaction. The FoCYP53A19+FoCPR+BsGDH reconstituted system produced 0.47 mM 4-hydroxybenzoic acid (94% conversion) in the resting-cell biotransformations performed in 50 mM phosphate buffer (pH 6.0) containing 0.5 mM benzoic acid and 0.25% glucose for 24 h at $30^{\circ}C$. The "coupled-enzyme" system can certainly improve the overall performance of NADPH-dependent whole-cell biotransformations in a yeast system.
Mycotoxins are toxic secondary metabolites produced by fungi. They can be present in where agricultural-based commodities are contaminated with toxigenic fungi. These mycotoxins cause various toxicoses in human and livestock when consumed. Small grains including corn, barley, rice or wheat are frequently contaminated with mycotoxins due to infection mainly by toxigenic Fusarium species and/or under environment favorable to fungal growth. One of the most well-known Fusarium toxin groups in cereals is trichothecenes consisting of many toxic compounds. Deoxynivalenol (DON), nivalenol (NIV), T-2 toxin, and various derivatives belong to this group. Zearalenone and fumonisin (FB) are also frequently produced by many species of the same genus. In order to monitor Korean cereals for contamination with Fusarium and other mycotoxigenic fungal species as well, barley, corn, maize, rice grains, and soybean were collected from fields at harvest or during storage for several years. The fungal colonies outgrown from the grain samples were identified based on morphological and molecular characteristics. Trichothecene chemotypes of Fusarium species or presence of FB biosynthetic gene were determined using respective diagnostic PCR to predict possible toxin production. Heavy grain contamination with fungi was detected in barley, rice and wheat. Predominant fungal genus of barley and wheat was Alternaria (up to 90%) while that of rice was Fusarium (~40%). Epicoccum also appeared frequently in barley, rice and wheat. While frequency of Fusarium species in barley and wheat was less than 20%, the genus mainly consisted of Fusarium graminearum species complex (FGSC) which known to be head blight pathogen and mycotoxin producer. Fusarium composition of rice was more diverse as FGSC, Fusarium incarnatum-equiseti species complex (FIESC), and Fusarium fujikuroi species complex (FFSC) appeared all at considerable frequencies. Prevalent fungal species of corn was FFSC (~50%), followed by FGSC (<30%). Most of FFSC isolates of corn tested appeared to be FB producer. In corn, Fusarium graminearum and DON chemotype dominate within FGSC, which was different from other cereals. Soybeans were contaminated with fungi less than other crops and Cercospora, Cladosporium, Alternaria, Fusarium etc. were detected at low frequencies (up to 14%). Other toxigenic species such as Aspergillus and Penicillium were irregularly detected at very low frequencies. Multi-year survey of small grains revealed dominant fungal species of Korea (barley, rice and wheat) is Fusarium asiaticum having NIV chemotype.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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