Objectives: To assess the scavenging effect of carnitine derivatives on oxidative damage to sperm during sperm processing, cryopreservation and thawing. Materials and Methods: Fresh semen samples from 20 normal healthy volunteers were collected by masturbation after at least 48 hours abstinence. After liquefaction of semen samples at room temperature, the specimens were diluted with sperm wash media (Ham's F-10, Life technologics) to a uniform density of $20{\times}10^6/ml$. L-carnitine or acetylcarnitine were added with various concentration of $0{\mu}M$, $10{\mu}M$, $30{\mu}M$ in semen sample or cryoprotectant. All specimens were cryopreservated at $-196^{circ}C$$LN_2$ for 3 days. Sperm motility, vitality, fertilizing capacity, reactive oxygen species formation and the level of lipid peroxidation were analyzed by computer assisted semen analyzer, eosin-nigrosin stain, hypoosmotic swelling test, chemiluminescence and thiobarbituric acid method, respectively, during sperm processing, cryopreservation and thawing. Results: The sperm motility was only increased in proportion to the concentration of acetylcarnitine with no statistical significance (p>0.05). The sperm vitality was also significantly improved in proportion to the concentration of acetylcarnitine with statistical significance (p<0.05). The sperm fertilizing capacity was significantly increased in proportion to the concentration of L-carnitine and acetylcarnitine and reactive oxygen species generation and lipid peroxidation were significantly decreased with same fashion (p<0.05). On comparison of effects between L-carnitine and acetylcarnitine, acetylcarnitine was superior to L-carnitine on the improvement of sperm motility and vitality as well as the suppression of reactive oxygen species generation and lipid peroxidation. Conclusions: These results suggest that carnitine derivatives have a scavenging effect against oxidative damages during sperm processing, cryopreservation and thawing. Therefore, carnitine derivatives may be useful as an oral antioxidant in patients with male infertility due to increased ROS generation.
A series of experiments were conducted to determine the suitable freezing and thawing temperatures for the freezing of boar semen in 5 ml maxi-straws. The ultrastructure, in vitro fertilization (IVF) and artificial insemination (AI) of frozen-thawed semen were also be evaluated. The 5 cm freezing height gave the best results not only in post-thaw motility rate (54.00%), but also in normal acrosome morphology rate (NAR) (80.23%). There was no significant difference in the post-thaw motility between different thawing temperatures and corresponding thawing times (p>0.05); the group of $52^{\circ}C$ and 25 s gave the highest motility rate (45.00%). As a whole, not only from the motility but also the NAR, thawing at $42^{\circ}C$ was better than the other two treatments. In the freezing packages, 5 ml maxi-straw gave a little lower mobility (40%), viability rate (49.58%), plasma membrane integrity rate (53.91%) and NAR (52.65%) than the 0.25 ml straw, but there was no significant difference between the two straw volumes (p>0.05). The IVF capacity of frozen-thawed semen in this experiment was similar to fresh semen. From ultrastructure observation, the main damage to boar spermatozoa after freezing was seen in the acrosome, such as swelling and formation of vesicles. After AI in recipient Shanghai White sows, frozen-thawed semen from 5 ml maxi-straws and pellets produced 72.2% and 80% conception rate and 7.8 and 8 litter sizes, respectively, and there was no significant difference between the 5 ml maxi-straw and the pellet (p>0.05).
본 연구는 rBST, Vito E 및 Se 투여가 한우 종모우의 정액성상에 미치는 효과를 검토하였고 정액의 동결보존 시 정액희석액에 taurine의 첨가가 융해 후 정액성상에 미치는 영향을 검토하였다. 1. rBST, Vit. E, Se 및 Vit. E와 Se 혼합 투여가 한우 종모우의 정액량, 정자농도 및 수소이온농도 (pH)에 미치는 영향을 조사한 결과, 정액량과 수소이온농도는 처리구간에 커다란 차이가 없었으며(P<0.05), 정자의 평균농도는 각각 13.50$\pm$2.32, 16.26$\pm$2.65, 17.07$\pm$2.61, 19.23$\pm$2.07 및 19.46$\pm$2.06$\times$$10^{8}$ 정자/$m\ell$로서 Se 투여구와 혼합투여구가 대조구, rBST 투여구 및 Vit. E 투여구보다 통계적으로 유의하게 높은 정자농도를 나타냈다 (P<0.05). 2. rBST. Vit. E 및 Se 투여가 한우 종모우의 정액의 동결융해시 정액성상에 미치는 영향을 조사한 결과, 정자의 운동율과 기형율은 투여구간에 통계적 유의차는 없었으나, 정자의 생존율은 혼합투여구가 48.24%로서 대조구 (44.48%)보다 통계적으로 유의하게 높은 생존율을 나타냈으며 (P<0.05), rBST 투여구, Vit. E 투여구 및 Se 투여구는 각각 46.48%, 47.28% 및 46.34%로서 대조구와 통계적 유의차는 인정되지 않았다. 3. 정액의 동결보존시 정액회석액에 taurine의 첨가가 정액의 융해 후 정액성상에 미치는 영향을 조사한 결과는 총정자수, 운동율, 생존율 및 기형율에서 taurine 첨가구가 taurine 무첨가구보다 다소 좋은 결과를 얻었지만 커다란 차이가 없었다. 4. rBST, Vit. E 및 Se 투여가 정자의 수정능획득과 첨체반응에 미치는 효과를 조사한 결과, 수정능 획득과 침체반응이 모두 일어나지 않는 비율(F율)과 모두 일어난 비율 (AR율) 은 투여구간에 커다란 차이가 없었다 (P<0.05). 5. 정액의 동결보존 시 taurine 의 첨가가 융해후 정자의 수정능획득과 첨체반응에 미치는 영향을 조사한 결과는 수정능 획득이 일어났지만 첨체 반응이 일어나지 않은 비율 (B율)과 AR 율에서는 투여구간에 커다란 차이가 없었지만, F율은 taurine 첨가구가 taurine 무첨가구보다 낮은 비율을 나타났다 (P<0.05).
본 연구는 제주흑우의 정액의 동결과 보존기술 개발을 위해 AndroMed와 Trialdyl를 사용하여 보다 우수한 희석제와 우수 종모우 선정을 위해 실시되었다. 종모우 1번부터 4번까지 개체 정자의 성상비교에서 수정능 획득과 첨체반응의 비율은 36.8%, 26.8%, 37.8% 그리고 38%의 결과를 나타내었다. 2번 개체 정자에서 수정능 획득과 첨체반응의 비율이 유의적으로(p<0.05) 낮은 결과를 보였다. 제주흑우 정액을 동결하기 전 정자의 생존율은 약 $93.27{\pm}1.62$, 동결 융해 후 생존율은 $73.34{\pm}3.27%$로 나타나 동결전 정액의 생존율이 유의적으로(p<0.05) 높은 결과를 나타내었으나, 사멸 정자의 비율은 약 $7.35{\pm}2.63%$와 $13.71{\pm}2.85%$의 결과를 나타내었다. 그리고 $Triladyl^{(R)}$ 동해 방지제를 사용하였을 때, 정자의 운동성은 $72.86{\pm}2.83%$, $AndorMed^{(R)}$를 사용하였을 때 운동성은 $81.47{\pm}2.48%$로 $AndorMed^{(R)}$ 동해방지제를 사용하였을 때 운동성이 다소 높은 경향을 보였으나, 유의적인 차이는 나타나지 않았다. 마찬가지로 정자의 사멸율에서도 $Triladyl^{(R)}$ 동해 방지제는 $18.41{\pm}3.42%$, $AndorMed^{(R)}$ 동해방지제는 $17.26{\pm}4.25%$의 결과를 보여 AndroMed를 사용한 동해방지제가 정자의 생존율을 향상시키는 것으로 나타났다. 결론적으로 제주흑우 정액의 동결 보존을 위해 보다 향상된 동결보호제 선정과 동결보존 기술 개발이 필요할 것으로 사료된다.
Park, Byung-Joon;Lee, Hyeon-Jeong;Lee, Sung-Lim;Rho, Gyu-Jin;Kim, Seung-Joon;Lee, Won-Jae
한국수정란이식학회지
/
제33권2호
/
pp.75-84
/
2018
The cryopreservation has been extensively applied in many cells including spermatozoa (semen) during past several decades. Especially, the canine spermatozoa cryopreservation has contributed on generation of progeny of rare/genetically valuable dog breeds, genome resource banking and transportation of male germplasm at a distant place. However, severe and irreversible damages to the spermatozoa during cryopreservation procedures such as the thermal shock (cold shock), formation of intracellular ice crystals, osmotic shock, stress of cryoprotectants and generator of reactive oxygen species (ROS) have been addressed. According as a number of researches have been conducted to overcome these problems and to advance cryopreservation technique, several analytical methods have been employed to evaluate the quality of the fresh or cryopreserved canine spermatozoa in regards to the motility, morphology, integrity of membrane and DNA, mitochondrial activity, ROS generation, binding affinity to oocytes, in vitro fertilization potential and fertility potential by artificial insemination. Because the study designs with certain application of analytical methods are selective and varied depending on each experimental objective and laboratory condition, it is necessary to establish the normal reference data of the fresh or cryopreserved canine spermatozoa for each analytical method to monitor experimental procedure, to translate raw data and to discuss results. Here, we reviewed the recent articles to introduce various analytical methods for the canine spermatozoa as well as to establish the normal reference data for each analytical method in the fresh or cryopreserved canine spermatozoa, based on the results of the previous articles. We hope that this review contributes to the advancement of cryobiology in canine spermatozoa.
Kim, Sung Woo;Lee, Jae-Yeong;Kim, Chan-Lan;Ko, Yeong Gyu;Kim, Bongki
한국동물생명공학회지
/
제37권1호
/
pp.55-61
/
2022
The acrosome cap allows sperm to penetrate the egg membrane and produce male pronuclei within female chicken eggs, facilitating successful fertilization. Given this, it is important to establish practical methods for evaluating the integrity of the acrosome cap and thus the quality of the rooster's sperm. There are several established methods for evaluating the acrosomes of mammalian sperm, but none of these methods are suitable for evaluating the acrosome status of rooster spermatozoa. Therefore, a simplified method for evaluating the rooster acrosome is needed. Here we evaluated the usefulness of CBB (coomassie brilliant blue) staining of the acrosome at concentrations of 0.04%, 0.08%, and 0.3% CBB solutions. Our data revealed a clear staining pattern for intact acrosome caps at 0.04% and 0.08% CBB but not at 0.3% CBB. This protocol revealed differences in acrosome integrity between fresh and frozen rooster sperm smears suggesting that CBB staining may facilitate easier semen evaluation in roosters. This protocol allows for the accurate differential staining of acrosome cap in rooster spermatozoa.
Objective: The aim of this study was to determine the effects of melatonin and selenium in freezing extenders on frozen-thawed rat sperm. Methods: Semen samples were collected from 20 adult male Wistar albino rats. Following dilution, the samples were divided into six groups: four cryopreserved groups with 1 mM and 0.5 mM melatonin and selenium supplements, and two fresh and cryopreserved control groups. The rapid freezing technique was used to freeze the samples. Flow cytometry was used to assess plasma membrane integrity, mitochondrial membrane potential, and DNA damage, while computer-assisted sperm analysis was used to assess motility. Results: Total motility was higher in the 1 mM melatonin supplementation group than in the cryopreserved control group (mean±standard error of the mean, 69.89±3.05 vs. 59.21±1.31; p≤0.05). The group with 1 mM selenium had the highest plasma membrane integrity (42.35%±1.01%). The cryopreserved group with 0.5 mM selenium had the highest mitochondrial membrane potential, whereas the cryopreserved control group had the lowest (45.92%±4.53% and 39.45%±3.52%, respectively). Conclusion: Cryopreservation of rat semen supplemented with 1 mM melatonin increased sperm motility after freeze-thawing, while supplementation with 0.5 mM selenium increased mitochondrial activity.
Objective: Sperm vitrification leads to the production of reactive oxygen species (ROS) that can damage the functional parameters of sperm. The present study aimed to investigate the antioxidant effect of Nigella sativa extract on motility, plasma membrane function, mitochondrial membrane potential (MMP), DNA damage, and intracellular ROS production. Methods: A total of 20 sperm samples were used. Samples were divided into six experimental groups, including groups with aqueous extract from N. sativa seeds at concentrations of 1% to 6%, a cryopreserved control group, and a fresh control group. Results: Statistical analysis showed significantly higher total sperm motility at concentrations of 3% to 6% than in the vitrified semen control group. Additionally, progressive motility and all motion characteristics at all concentrations were significantly higher than in the vitrified semen control group. The presence of N. sativa seed extract also improved the quality of the sperm parameters assayed in all experimental groups (1%-6%; intracellular ROS production, DNA damage, MMP, and sperm membrane function) compared to the control group. Conclusion: Higher concentrations of N. sativa led to improvements in all sperm parameters and sperm quality. These findings indicate that N. sativa seed extract is effective for improving the quality of sperm after vitrification.
This study was performed to investigate the relationship between PSS-HSP70 gene polymorphism and artificial insemination (AI) reproductivity in the pigs. The RFLP polymorphism of PSS and the SSCP polymorphisms of HSP70 K1, K3 and K4 PCR product were detected different patterns. In the experiment for AI of fresh semen, spring and fall season showed higher litter size born of 10.89 head than 10.47 head of summer season. Landrace was showed higher litter size of 9.96 head than that of Duroc and Yorkshire (p<0.05). Stress relating PSS and HSP70 polymorphism of PSS-Normal, HSP70 K1-BB, K3-AB, K4-AA showd a highest litter size born of 10.97 head and litter size born alive of 10.69 head than that of the other polymorphisms(p<0.05). In the experiment for AI of frozen semen, effects of season and pig breeds were not showed for litter size born. The stress relating polymorphism of PSS-Carrier, HSP70 K1-BB, K3-BB, K4-AB showed highest litter size born of 11.29 head and litter size born alive of 10.82 head and PSS-Normal, HSP70 K1-BB, K3-AB, K4-AA showed the lowest litter size born of 8.48 head and litter size born alive of 7.33 head than that of the other polymorphisms(p<0.05). These results suggest that AI litter size born for the stress of forzen thawed semen may be affected by PSS and HSP70 polymorphism in pigs.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.